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李静: 作品数：20 被引量：46H指数：5; 供职机构：河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心更多>>; 发文基金：质检公益性行业科研专项项目公益性行业科研专项河北省科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光SPIA方法的建立被引量：2: 2017年; 以单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)hly A基因为靶序列,设计5'端为RNA序列,3'端为DNA序列的嵌合引物和链终止Blocker序列,经过优化,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence SPIA)方法,进行特异性、检出限实验,并对不同DNA提取方法进行比较。结果显示,确定荧光染料SPIA法的最佳反应温度为58℃,反应30 min,引物特异性良好,只有4株不同来源的L.monocytogenes DNA产生典型的S型荧光扩增曲线。对L.monocytogenes纯培养DNA的检出限为3.6×10~1fg/μL,相应菌液浓度为1.2×10~1CFU/m L;Realtime fluorescence SPIA检测试剂盒法、水煮法、溶菌酶-蛋白酶K法、饱和酚提取法四种方法提取DNA,均产生典型的扩增曲线,Ct值没有明显差异。对人工添加猪肉火腿样品中的L.monocytogenes,采用水煮法提取DNA的检出限为1.1×10~2CFU/g。结果表明,所建立的L.monocytogenes的Real-time fluorescence SPIA新型等温扩增方法,特异性强、灵敏度高、不受DNA纯度的影响、快速、简便。; 王建昌胡连霞孙晓霞李静; 关键词：荧光单核细胞增生李斯特氏菌 A基因

我国进口种鸡群禽白血病及禽网状内皮组织增生症的血清学检测: 2015年; 为了解河北进口种鸡群禽白血病病毒(ALV)及禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的感染情况,对实验室留存的2011—2013年间来自美国、加拿大和法国的15批进口种鸡的血清样品450份,通过ELISA方法进行ALV-A、B亚群和REV的抗体检测。结果共有8批28份样品为ALV-A、B亚群抗体阳性,群体阳性率和个体阳性率分别为53.3%和6.2%;未检出REV抗体阳性样品。结果表明目前我国进口种鸡群中存在一定比例的禽白血病病毒A、B亚群抗体阳性个体。; 王建昌付琦王金凤李静孙晓霞刘立兵; 关键词：禽白血病间接ELISA 血清学检测

实时荧光单引物等温扩增(SPIA)技术检测大肠杆菌O157的方法研究被引量：7: 2016年; 建立一种快速、灵敏的食品中肠出血性大肠杆菌O157的检测方法。以大肠杆菌O157的特异性基因(rfbE)为靶序列,设计相应的RNA/DNA组合引物和链终止序列,优化引物浓度、Mg2+浓度、温度等反应条件,建立实时荧光单引物等温扩增(Real Time Fluorescence Single Primer Isothermal Amplification,实时荧光SPIA)检测大肠杆菌O157的方法,并对该方法的特异性、灵敏度以及人工污染检出限进行检测。确定了实时荧光SPIA法的最适反应条件,该方法可以在55 min内完成检测工作,除大肠杆菌O157外,其他细菌均未产生特异性荧光扩增曲线,而且实时荧光SPIA检测大肠杆菌O157的灵敏度为2.0 CFU/m L,对猪肉人工污染样品中大肠杆菌O157的检出限是4.0 CFU/g。实时荧光SPIA方法检测大肠杆菌O157具有耗时短,灵敏度高,特异性强,方法简便的优越性,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。; 李瑞王建昌李静胡连霞张伟; 关键词：大肠杆菌O157

副溶血性弧菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立被引量：1: 2016年; 以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)gyr B基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence single primer isothermal amplification,实时荧光SPIA)检测副溶血性弧菌的方法。实时荧光SPIA在40 min反应时间内,对3株副溶血性弧菌和16株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA检测,结果表明除3株副溶血性弧菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌纯培养DNA的灵敏度为8.2 fg/μL,对副溶血性弧菌菌悬液的检测灵敏度为13.5 CFU/m L;对鳕鱼、海蟹、牡蛎和咸鸭蛋等4种模拟样品中副溶血性弧菌的检出限均为14.7 CFU/g。研究结果表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便。; 王建昌胡连霞段永生李静王金凤; 关键词：副溶血性弧菌 B基因

基于内参的大肠埃希氏菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：8: 2015年; 针对大肠埃希氏菌O157∶H7 rfb E和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方法。结果表明,该方法对E.coli O157∶H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL;对细菌的最低检测限为5×103 CFM/m L;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999)。人工污染实验结果表明,在初始菌量为7 CFM/25 g时,采用水洗加试剂盒法提取DNA,E.coli O157∶H7在增菌6 h后即可检出;而采用水煮法提取DNA,则在增菌10 h后方可检出。建立的E.coli O157∶H7实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中O157∶H7,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生。; 王建昌王金凤段永生李静陈志敏陈瑞春; 关键词：FLIC 实时荧光定量PCR 内参

猪源性bla_(NDM-1)阴性雷氏普罗威登斯菌的分离鉴定被引量：8: 2015年; 为了解美国进口种猪人畜共患性致病菌的携带情况,本研究采集种猪新鲜粪便样品,进行常见致病菌的分离。结果在120份样品中分离到1株普罗威登斯菌,命名为HBA13。通过不同选择性培养基、常规生化鉴定及16S rRNA基因序列同源性比对分析,鉴定HBA13为雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)。鉴于雷氏普罗威登斯菌在细菌耐药性方面的重要意义,进行了NDM-1表型检测,并利用PCR方法进行blaNDM-1耐药基因的检测,结果表明所分离雷氏普罗威登斯菌blaNDM-1耐药基因为阴性。猪源性blaNDM-1阴性雷氏普罗威登斯菌的分离,为今后相关研究奠定了基础。; 王建昌姜彦芬王金凤陈志敏李静; 关键词：基因

口岸核心能力信息管理系统设计与应用研究被引量：1: 2015年; 新版国际卫生条例对口岸核心能力提出了更高更新的要求,并且口岸核心能力建设是一个持续的过程,为更好的维持并不断提升口岸核心能力,确保管理部门及时准确掌握口岸核心能力的即时状况和动态变化,基于"全面掌握、即时分析、科学决策"的理念,设计开发了口岸核心能力建设信息化管理系统,从而提升口岸核心能力建设管理的科学性和有效性。; 刘利辉李自力方洪狄楠张治富李静林建斌; 关键词：信息化统筹

飞机输水车的卫生质量控制被引量：2: 2004年; 〔目的〕　控制微生物对水源污染 ,保障输水车为飞机输送的水卫生安全。〔方法〕　根据《良好操作规范》(GMP)的要求制定了输水车输水及保持卫生操作规程 ;根据HACCP的原理 ,提出了以微生物指标为目的 ,在消毒环节上确立控制点的输水车输水卫生质量控制体系。〔结果〕　既减少输水车及输水被微生物污染 ,又防止盲目消毒带来的不良后果。〔结论〕　实践证明。; 李静张毅刘志刚; 关键词：飞机

施马伦贝格病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用: 2015年; 依据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因保守序列,设计了特异性引物和MGB荧光探针,建立了SBV实时荧光RT-PCR检测方法,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性等试验评价,并对绵羊和牛全血样品进行了检测。结果表明,所建立的SBV检测方法模板浓度与Ct值呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.998;特异性强,仅对SBV RNA出现特异性扩增曲线;灵敏度高,对SBV RNA的检测灵敏度为10copies;重复性好,重复检测灵敏度CV<3%;对临床样品的检测均为SBV阴性。所建立的SBV实时荧光RT-PCR方法可以为SBV的诊断和流行病学调查提供一种快速、特异、敏感的检测手段。; 王建昌王金凤段永生张永宁李静; 关键词：施马伦贝格病毒 S基因

加强能力建设,防止外来有害生物入侵: 河北省共有4个海港、2个空港，均为对外开放口岸.船舶、航空器、人员、货物从这些口岸进境.近年来，河北省进境船舶、航空器、进境人员和动植物及其产品数量增长势头迅猛，随交通T具、旅客携带物、货物携带的外来有害生物传人风险增大...; 李静; 关键词：入侵外来有害生物

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