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全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体单克隆抗体蛋白高效表达体系的建立及其功能性分析被引量：2: 2015年; 目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体（TRAIL）-R1单克隆抗体（TR1-404）蛋白体系，并评价TR1-404抗体蛋白功能特性。方法构建pcDNA3．4载体抗体质粒，转染Expi293F^TM细胞，表达抗体蛋白。收集细胞培养上清，使用ProteinA／G纯化抗体蛋白。利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TRl_404与Hela细胞和HCT116细胞表面TRAIL-R1的结合能力。MTT法检测在不同时间点TR1-404、TRAIL及二者联合作用对Hela细胞和HCT116细胞生存和增殖的影响。Annexin V／PI双染色检测Hela细胞和HCT116细胞凋亡。结果成功构建pcDNA3．4载体抗体质粒和建立Expi293F^TM细胞蛋白高效表达系统。精制的TR1-404抗体既与重组TRAIL-R1抗原特异性结合，也能与Hela和HCT116细胞表面的TRAIL-R1结合。发现TR1-404联合TRAIL作用于Hela细胞，肿瘤细胞凋亡效果显著提高。而在HCT116细胞中，TRAIL与TR1-404的联合作用未见显著提高。结论成功建立抗体蛋白高效表达系统。TR1-404抗体特异性与TRAIL-R1抗原结合。TR1-404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用。本研究为TRAIL—R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法。; 石佳宁韩晓健吕福莲毕冬梅金艾顺; 关键词：肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体单克隆抗体凋亡

治疗性抗体药物的基础应用研究: 背景:由于单克隆抗体(单抗,mAb)特异性高、靶向性强和毒副作用少等特点作为治疗性抗体药物广泛应用于临床.治疗性抗体药物研发成为备受关注的研究热点.目前,治疗性抗体药物主要来源于人鼠嵌合型和人源化抗体.由于全人源单抗制备...; 郝智超韩晓健吕福莲石佳宁毕冬梅金艾顺; 关键词：HBV INFLUENZA V

治疗性抗体药物的基础应用研究: 背景:由于单克隆抗体(单抗,mAb)特异性高、靶向性强和毒副作用少等特点作为治疗性抗体药物广泛应用于临床。治疗性抗体药物研发成为备受关注的研究热点。目前,治疗性抗体药物主要来源于人鼠嵌合型和人源化抗体。由于全人源单抗制备...; 郝智超韩晓健吕福莲石佳宁毕冬梅金艾顺; 关键词：HBV; 文献传递

自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞的方法研究被引量：1: 2015年; 目的建立自人外周血淋巴细胞（PBMCs）中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞（如浆细胞）的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者（z和L）外周血，分离PBMCs，通过白细胞介素（IL）-2、IL-4和Toll样受体诱导剂（CpG、R848）体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清中总抗体和HBsAg特异性抗体的含量；通过酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测培养细胞中总抗体分泌细胞（ASC）数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量。结果活化第6天，对照组和两个活化组[CpGDNA2006联合IL-2（C组）和R848联合IL-2（R组）]细胞培养上清总免疫球蛋白（Ig）G浓度分别为37．06ng／mL、80．87ng／mL和85．97ng／mL，两个活化组（C组和R组）均明显高于对照组（t=23．318，60．639，P均〈0．05）。ELISPOT检测ASC数量，结果显示，C组和R组数量均多于对照组，并且R组明显多于C组。两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化，但R组活化效果更佳，确立R组为最佳活化方法。用该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs，ELISA检测活化组特异性抗体浓度，R组显著高于对照组（t=5．031，11．561，P均〈0．05）。不同细胞数量诱导的分组，ELISPOT检测HBsAg特异性抗体分泌细胞数量，R组均明显多于对照组。结论确立诱导剂R848和细胞因子IL-2联合能够有效地诱导外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞，为今后抗体药物研发提供了研究基础。; 毕冬梅韩晓建石佳宁刘晔金艾顺; 关键词：外周血单个核细胞体外活化

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毕冬梅

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