孙丽娜
- 作品数：74 被引量：54H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法的建立
- 2021年
- 目的探索即时、快速、准确的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测方法,提高新型冠状病毒感染者检出率,并建立2019-nCoV的S蛋白特异性检测方法。方法本研究利用ELISA方法对前期研发的2019-nCoV基因工程单克隆抗体(mAb)进行配对检测,从中挑选出最优检测抗体组合,建立了新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法,并对检测方法进行条件优化。结果本实验室前期筛选出的12株2019-nCoV基因工程单克隆抗体对2019-nCoV S蛋白具有良好的结合活性,是抗原检测候选抗体。本研究所建立的新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法可快速有效的检测2019-nCoV S蛋白,灵敏度较高,对S蛋白检出限小于1 ng/ml。结论本研究所建立的抗原检测方法可特异性检测2019-nCoV的S蛋白,为COVID-19感染的早期、敏感、特异诊断提供了有意义的参考。
- 曲园园芜为殷强玲李川李建东梁米芳孙丽娜王世文
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA抗原检测
- 人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究
- 2015年
- 为研制人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重组抗体,本研究利用噬菌体表面展示技术,以SFTSV全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白为抗原,从人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库中筛选抗SFTSV-Gn蛋白的重组Fab抗体,通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测。将Fab抗体基因克隆入哺乳动物细胞表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞获得分泌表达的IgG抗体。通过ELISA、IFA和Western-blotting检测IgG抗体的结合特异性。采用亲和层析纯化IgG抗体,并用微量中和试验检测IgG抗体的中和活性。结果表明经过三轮富集筛选,以SFTSV病毒颗粒为抗原筛选出364株针对SFTS病毒核蛋白Fab抗体,没有筛选出特异性结合Gn蛋白的阳性克隆,而通过Gn蛋白筛选得到8株特异结合Gn蛋白的Fab抗体,其中5株来自Lambda库,3株来自Kappa库。ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白。微量中和试验显示8株新筛抗体没有中和活性,但仍可为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供借鉴和参考。
- 陈素华孙丽娜刘洋李川刘林梁米芳仇佩虹
- 关键词：噬菌体抗体库发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
- 人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究被引量：3
- 2016年
- 为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造。以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库。经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能。结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9 M。通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位。通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础。
- 孙丽娜刘洋李川李德新梁米芳
- 关键词：狂犬病毒单链抗体糖蛋白表位
- 重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果评价被引量：4
- 2016年
- 本研究对重组人源抗狂犬病毒单克隆抗体鸡尾酒暴露后预防效果进行评价,选用狂犬病毒国内代表性疫苗株、实验室固定毒株及街毒株共11株病毒,通过荧光抗体病毒中和试验(FAVN)分析针对狂犬病毒糖蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号表位的三株单抗CR57(I)、RV08(II)和RV3A5(Ⅲ)及其鸡尾酒配伍的中和谱,在此基础上选用狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11感染仓鼠腓肠肌,进一步研究重组人源抗狂犬病毒单抗及其鸡尾酒制剂暴露后保护效果,结果显示CR57、RV08、RV3A5及其三联配伍制剂对11株狂犬病毒均具有明确的中和作用,按中和效价1∶1∶1配伍组成的鸡尾酒组合制剂对这些毒株的中和能力没有减弱,表明三株抗体间无相互干扰,对个别毒株(JX08-45、Flury、SRV9)的中和活性表现出协同作用;三株单抗CR57、RV08和RV3A5单独应用或是三联配伍应用的暴露后保护率达100%,与HRIG单独免疫相比较具有更优秀的动物保护活性;在与疫苗联合应用方面重组人源单抗与HRIG在暴露后预防的效果相仿,均可达到100%的保护率,所以重组人源单抗具有替代HRIG应用于狂犬病暴露后预防与保护的潜力,为我国具有自主知识产权的狂犬单抗鸡尾酒制剂的研发打下基础。
- 孙丽娜刘洋李川李德新梁米芳
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白
- 人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体HBIgG03(轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示)和HBIgG12(轻链和重链可变区的氨基...
- 梁米芳毕胜利孙丽娜郭瑜刘洋张福顺李川李德新
- 文献传递
- 用于检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的引物探针组合、试剂盒及方法
- 本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及用于检测希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的引物探针组合、试剂盒及方法。本发明提供用于希望山病毒、穆勒舒病毒和里约塞贡多病毒的分别或同时实时荧光定量RT‑PCR检测的引物探针组合，...
- 李建东杜珊珊李阿茜梁米芳李德新王世文黄晓霞李川王芹孙丽娜芜为
- 人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV-121及其应用
- 本发明公开了人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV‑121及其应用。本发明利用噬菌体抗体库技术，成功获得一条特异性针对新型冠状病毒表面抗原的人源中和性抗体nCoV‑121，其在体外具有阻止新型冠状病毒感染敏感细胞的中和功能，对...
- 梁米芳孙丽娜曲圆圆殷强玲李德新王世文李川芜为李建东李阿茜黄晓霞
- 文献传递
- 人源抗寨卡病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达
- 2019年
- 目的 利用噬菌体表面展示技术进行人源抗寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)噬菌体抗体库的构建及其基因工程单克隆抗体Fab段基因的获得和表达,掌握人源噬菌体抗体库的制备和针对特定病毒高度特异性的抗体筛选方法。方法 收集寨卡病毒病康复期患者的全血样本,分离淋巴细胞,采用RT-PCR方法成功地从淋巴细胞Ig mRNA中扩增出抗体轻链和重链Fab段基因,利用pComb3H系统成功构建具有基因多样性的人源抗ZIKV噬菌体抗体库制备。利用已纯化的ZIKV和已获得的ZIKV E蛋白抗原对已建立的抗体库进行富集筛选。结果 本研究成功地构建人源抗ZIKV噬菌体抗体库,并获得针对ZIKV E蛋白抗原的单克隆抗体Fab段基因,该基因能在大肠埃希菌中进行有效表达。结论 根据其序列分析研究表明,该单抗为一株新的抗ZIKV的人源基因工程抗体,这对建立ZIKV快速特异的早期诊断方法,获得特异性ZIKV人源治疗单抗奠定基础。
- 袁润余孙丽娜苏娟纪洵敏梁均和陈茂余梁米芳柯昌文
- 关键词：人源基因工程抗体噬菌体表面展示
- 寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 2019年
- 目的 建立一种可以同时鉴别寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的检测方法。方法 通过全球共享数据库中检索下载寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒全基因组序列进行比对分析,估计其保守区,确定靶基因位置,针对这3种病毒分别设计特异性引物和探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对方法的特异性、灵敏性和重复性进行评估。结果 所建立实时荧光定量RT-PCR检测方法可检出寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒模拟样本,最低检出限分别为寨卡病16.22拷贝/PCR,基孔肯雅病毒12.02拷贝/PCR,马雅罗病毒体外转录RNA为2.82拷贝/PCR,三重组合检测与3种病毒分别单重检测,灵敏度无明显差别。与登革病毒、汉坦病毒、SFTS病毒、黄热病毒和流感病毒等无交叉反应,检测100份健康人体检血清样本未见非特异性反应,特异性为100%。重复性结果显示,通过选取高、中、低3个不同浓度梯度的病毒核酸或体外转录RNA,3种病毒的标准差均控制在0.5以内,变异系数在2%以下。结论 建立了寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。
- 赖丽金李阿茜张全福孙丽娜李川芜为王芹梁米芳李德新韦艳李建东
- 关键词：基孔肯雅病毒RT-PCR
- Flexal和Whitewater Arroyo两种高致病沙粒病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2020年
- Flexal病毒(Flexal virus,FLEV)和Whitewater Arroyo病毒(Whitewater Arroyo virus,WWAV)属沙粒病毒,经鼠传播,可引起人类严重传染病,主要分布于美洲,有因野外工程而感染或国际物流和人员往来而输入的风险。本研究通过检索、分析FLEV和WWAV基因组序列,参照同科属病毒遗传进化特征,确定病毒基因组保守区,筛选分子检测靶基因,设计PCR扩增引物和检测探针,建立两种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR检测方法,并进行灵敏性、特异性和重复性初步评价。结果表明,所建立的FLEV和WWAV检测方法与其他病毒无交叉反应,扩增效率大于95%,检出限分别为100copies/μL和20copies/μL,变异系数在2%以内。上述结果显示,本研究所建立的FLEV和WWAV检测方法的特异性强,灵敏性与重复性均处于常规病毒性传染病分子诊断可接受范围,可应用于疑似病例的快速检测和相关病原的筛查和流行病学调查。
- 赖丽金李阿茜张全福孙丽娜杜珊珊李川芜为王芹梁米芳李德新韦艳李建东
- 关键词：实时荧光RT-PCR
