张灏
- 作品数：12 被引量：28H指数：3
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市重点科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 子宫内膜癌与胰岛素-Ras-MAPK信号通路的相关性研究被引量：6
- 2010年
- 目的:探讨胰岛素-Ras-MAPK通路中主要调节蛋白生长因子受体结合蛋白2(Grb-2)、Ras、P-ERK、细胞周期素D1(CD-1)在子宫内膜癌中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法检测48例正常子宫内膜,10例非典型增生子宫内膜,51例子宫内膜癌组织中Grb-2、Ras、P-ERK及CD-1的表达情况,放免法检测内膜癌患者空腹血清胰岛素水平。结果:Grb-2、Ras、P-ERK、CD-1在正常子宫内膜组织、非典型增生子宫内膜、子宫内膜癌组织中阳性表达率依次升高,其中Grb-2、P-ERK、CD-1差别有统计学意义。不同病理分期的子宫内膜癌患者组织中Grb-2阳性表达情况比较差异有统计学意义,P-ERK阳性表达差异亦有统计学意义(均P<0.01),子宫内膜癌中Grb-2与Ras、Grb-2与P-ERK表达呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),在有无淋巴结转移的子宫内膜癌中Grb-2的表达差异有统计学意义有关(P<0.05)。血胰岛素水平与Grb-2、P-ERK表达呈正相关(P<0.05)。结论:胰岛素-Ras-MAPK信号传导通路在子宫内膜癌的发生发展过程中可能起重要作用。
- 田文艳窦文婷王颖梅张丽志薛凤霞张灏
- 关键词：子宫内膜肿瘤胰岛素MAP激酶信号系统免疫组织化学
- 人乳头状瘤病毒18型E6蛋白的信号转导初探被引量：5
- 2011年
- 目的探讨人乳头状瘤病毒18型E6蛋白（HPV18E6）与信号转导和转录激活因子1（STAT1）、蛋白激酶R（PKR）／真核细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、核因子-κBp65（NF—κBp65）、丝裂酶原激活的蛋白激酶（MAPK）／c—Jun氨基末端激酶（JNκ）信号转导的关系以及可能的分子机制。方法构建靶向HPV18E6癌基因及无关序列（NC序列）的短发夹结构RNA（shRNA）干扰序列的慢病毒载体（HPV18E6-RNAi-LV，NC-GFP—LV），转染宫颈癌HeLa细胞，在沉默HPV18E6癌基因表达的基础上，以RT-PCR、Westernblot法分别在核酸、蛋白水平（包括磷酸化型）检测各组HPV18E6、STAT1、PKR、eIF2α、NF—κBp65、MAPK、JNK的表达，以transwell侵袭试验及MTr法检测各组HeLa细胞侵袭能力及对卡铂敏感性的差异。结果HPV18E6癌基因的表达水平能影响NF-κBp65、PκR基因的核酸及蛋白表达水平，并影响磷酸化蛋白p-STAT1、P—PκR、P-eIF2α的磷酸化水平；HPV18E6-RNAi-LV转染组细胞侵袭抑制率及对卡铂的敏感程度明显高于其他组（P〈0．05或P〈0．01）。结论HPV18E6通过降低PκR表达，并使p-STAT1、p-PκR、P-eIF2α去磷酸化的方式抑制PκR／eIF2α信号传导通路激活，维持HeLa细胞增殖活性及侵袭能力，也可抑制凋亡。HPV18E6与MAPK／JNK信号转导关系尚不明确。
- 罗远材瞿全新糜若然郭路张灏
- 关键词：慢病毒载体信号转导
- 靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体。方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连入pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化;所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果。结果:HPV18E6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构;重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功;成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达。结论:成功构建了HPV18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具。
- 罗远材瞿全新糜若然张灏
- 关键词：人乳头瘤病毒18癌基因RNA干扰HELA细胞逆转录聚合酶链反应
- 苦味叶下珠治疗乙型病毒性肝炎的临床研究
- ＜正＞目的:观察苦味叶下珠治疗乙型病毒性肝炎的临床疗效。方法:按1990年上海第六届肝炎会议制定的乙肝诊断标准,选择60例乙型病毒性肝炎患者,随机分成治疗组和对照组,治疗组30例患者（急性肝炎5例、慢迁肝8例、慢活肝11...
- 王淑慧夏淑玲张灏苏征王立军李冬田
- 文献传递
- 反义miR-221/222上调p27^(kip1)对MCF-7乳腺癌细胞系的放射增敏作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨敲低miR-221/222表达上调p27kip1对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响。方法经生物信息学分析查询miR-221/222成熟体序列和它们与p27kip1的关系。脂质体共转染反义寡聚核苷酸(反义miR-221/222)后,用Northern blot法检测转染后MCF-7细胞miR-221、miR-222表达水平;将实验细胞分为6组:对照组、对照照射组、无义序列组、无义序列照射组、反义miR-221/222共转染组和反义miR-221/222共转染照射组。用MTT法检测细胞增殖及放射协同作用,流式细胞仪分析细胞周期,克隆形成实验检测细胞增殖,Western blot分析p27kip1蛋白的表达变化。数据间的方差分析采用F检验;两两比较采用LSD-t检验。结果经生物信息学分析显示miR-221/222成熟体序列的种子序列几乎一致,p27kip1是miR-221/222的靶基因。Northern blot显示反义miR-221/222共转染组miR-221、miR-222的表达水平明显下降(miR-221:P=0.000;miR-222:P=0.000)。对照组及无义序列组之间miR-221、miR-222表达水平的差异无统计学意义(miR-221:P=0.371;miR-222:P=0.284)。MTT结果显示转染后第4天共转染组肿瘤细胞生长抑制效果最好,细胞增殖率明显低于对照组和无义序列组(P=0.000),但与放射治疗无协同作用(P=0.091)。流式细胞术检测可见共转染组细胞周期存在G0/G1期阻滞(P=0.000)。经放射治疗后,可明显降低S期比例(P=0.002)。克隆形成实验表明反义miR-221/222可增加MCF-7细胞的放射敏感性。Western blot显示反义miR-221/222共转染组的p27kip1蛋白表达明显上调(P=0.000)。结论反义miR-221/222通过上调p27kip1蛋白表达可以增加MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性。
- 梅玫任玉周旋祁艳斌王鸿梅张灏申潇咏赵川苏征姚智
- 关键词：MIR-221MIR-222
- 反义寡聚硫代磷酸脱氧核糖核苷酸的抗巨细胞病毒作用被引量：1
- 2001年
- 目的 研究互补于CMV主要即刻早期 (MIE)mRNA的起始密码子位点和MIEmRNA前体内含子 1/外显子 2拼接位点的 2个 19个碱基的ASS ODN (AS1和AS2 )对CMV复制的抑制作用。方法 采用原位ELISA法测定 2BS细胞上CMV抗原量。结果 2个S ODN均有抗CMV作用 ,半数有效浓度 (EC50 )分别为 4 5 3和 10 2 μmol·L-1。 8 0 μmol·L-1的AS1使CMV抗原分泌推迟 3～ 4d。感染后立即加药效果最好 ,12h后加药效果大大下降 (P <0 0 5 ) ,感染后 36h再添加同一剂量及与DHPG联合使用效果明显增强 (P <0 0 5 )。 2种ASS ODN 6 4 0 μmol·L-1时仅有轻微的细胞毒性 ,16 0 μmol·L-1以下浓度无明显毒副作用。采用 5mg·L-1的脂质体使 2种S ODN的EC50 分别降低了 111 0和 15 1 7倍。 2种正义序列对照也显示出抑制效应 ,EC50 分别为 2 6 2和 30 1μmol·L-1。NorthernBlot分析提示激活RNA酶H降解杂交双链中的mRNA分子为重要的特异性作用机制 ,而干扰CMV对细胞的吸附与侵入为重要的非特异性作用机制。结论 作用于MIE基因的ASS ODN可有效地抑制CMV复制 。
- 周天戟张雪怡张灏王立军任中原
- 关键词：巨细胞病毒抗病毒剂
- 负载肺癌A549抗原的树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞特异性激活研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察负载肺癌A549抗原的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)特异性肿瘤杀伤活性的作用。方法由正常人富含淋巴细胞白膜分离、细胞因子诱导制备DC细胞和CIK细胞。用流式细胞术分析DC细胞和CIK细胞的表型。经混合淋巴反应和体外细胞毒性实验观察负载A549抗原的DC对CIK具有特异性激活作用。结果表型分析显示,CIK细胞以CD3+CD56+自然杀伤细胞为主,成熟DC细胞高表达CD40、CD80、CD86和HLA-DR,并可刺激CIK细胞的增殖诱导混合淋巴反应,而负载A549抗原的DC细胞能显著增强CIK细胞特异性杀伤靶细胞的能力(P<0.05)。小鼠注射CIK、DC·CIK和Ag·DC·CIK后的肿瘤直径分别为(65.34±12.33)、(70.17±13.26)和(36.79±9.19)mm,后者的抗肿瘤作用较高(P<0.05)。结论抗原负载的DC细胞可活化CIK细胞,并使其具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力。
- 苏征张灏李欣汤华
- 关键词：树突状细胞
- HPV18E6基因对HeLa细胞PKR、eIF2α表达、激活及其生物学行为的影响被引量：2
- 2011年
- 宫颈癌的发生与HPV感染相关，高危型HPV（high risk—HPV，HR—HPV）突破机体抗病毒的防御机制，在宫颈部位的整合感染是宫颈癌发生的始动因素和病理基础。
- 罗远材瞿全新糜若然郭路张灏
- 关键词：HPV18HELA细胞生物学行为E6基因PKR
- 应用基因芯片技术筛查肠型胃癌发生发展中差异基因表达的研究被引量：3
- 2009年
- 目的应用寡核苷酸芯片研究胃正常组织、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型性增生和肠型胃癌黏膜的基因表达谱,筛选肠型胃癌发生相关基因。方法利用激光切割显微捕获联合基因芯片研究胃正常黏膜组织与慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型性增生和肠型胃癌黏膜组织研究肠型胃癌发展中的差异基因表达谱。结果在慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型性增生和肠型胃癌黏膜组织中,筛选出共同差异基因109个,其中有61个基因持续上调表达,48个基因持续下调表达,包括细胞信号传导、细胞周期相关基因、代谢酶类相关基因、细胞信号和传递蛋白、细胞外基质基因、原癌基因、抑癌基因、细胞黏附分子、生长因子、免疫相关基因、细胞骨架和运动相关蛋白、凋亡相关基因和肿瘤相关抗原等。将各组筛选出的基因进行聚类并结合各组临床病理资料统计分析后发现一些表达上具有特征意义的基因。其中ALDOB下调、CDX2和MUC2上调与Hp感染和肠化之间存在关联;Bim-1、hTERT、PTTG和COX2上调,TFF3下调与肠上皮化生和不典型增生具有相关性;Bim-1、PGA5、HAP1、STS和LIPF表达改变与胃癌Borrmann分型、Hp感染阳性率和淋巴结转移数目等存在关联;在慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型性增生和肠型胃癌黏膜共同差异基因中聚类分析并结合临床资料分析发现,ALDOB和TFF3表达下调与肠上皮化生具有负相关性,hTERT、COX-2和hMSH2上调和上皮非典型增生具有正相关。结论基因表达谱芯片能够快速筛选出肠型胃癌发生癌相关基因,有多种基因共同参与肠型胃癌发生的整个过程。
- 苏征张灏汤华
- 关键词：寡核苷酸芯片基因表达谱肠型胃癌
- 端粒酶反义hTERT基因治疗抑制卵巢癌细胞生长的研究被引量：3
- 2003年
- 瞿全新糜若然张灏苏征
- 关键词：卵巢癌端粒酶基因治疗
