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转化生长因子B受体Ⅰ影响脂肪细胞分化的研究: 2016年; 目的探讨siRNA下调转化生长因子β受体Ⅰ(TGFBRⅠ)基因表达后对ST2细胞向脂肪细胞分化的作用。方法设计并合成针对TGFBRⅠ的靶向si RNA作为实验组,以转染Control si RNA作为对照组。应用q RT-PCR检测并比较转染ST2细胞后各组TGFBRⅠm RNA的表达和脂肪细胞特异性转录因子CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、脂肪细胞表征因子FABP4 m RNA的表达水平。诱导5 d后对2组细胞进行油红O染色,检测TGFBRⅠsi RNA对ST2细胞分化的影响。利用激光共聚焦显微镜观察脂肪细胞的染色情况并对细胞进行拍照。另外,用异丙醇萃取出油红O,测定油红O在波长520 nm处的光密度(OD)值,并进行组间比较。结果转染TGFBRⅠsi RNA后,ST2细胞TGFBRⅠ基因的表达水平明显下调,TGFBRⅠsi RNA能够促进脂肪细胞生成,增强C/EBPα、PPARγ及FABP4 m RNA表达;经成脂诱导5 d后,转染TGFBRⅠsi RNA的细胞产生的脂滴明显较Control si RNA组多,且OD值高于Control si RNA组。结论 TGFBRⅠsi RNA能有效促进脂肪细胞的分化,提示TGFBRⅠ可能是前体细胞向脂肪细胞分化的重要调控因子。; 杨永旭陈棣张欣王宝利; 关键词：脂细胞细胞分化

甲状腺素对甲状腺功能减低大鼠子代脑组织中同源盒基因Nkx6．2表达的影响: 2013年; 目的探讨甲低大鼠妊娠不同时间补充不同剂量甲状腺素(L-T4)对子代大鼠脑组织中同源盒基因Nkx6.2 mRNA表达的影响。方法120只雌性Wistar大鼠分为对照组,甲低组,甲低孕鼠妊娠早期(1～17d)补充L-T4高、中、低剂量组,甲低孕鼠妊娠晚期(18～20d)补充L-T4高、中、低剂量组,每组15只,与正常雄性大鼠交配后分别取孕17d、新生期、20d龄仔鼠脑组织,采用实时荧光定量PCR法检测脑Nkx6.2 mRNA表达。结果甲低组与对照组对应日龄仔鼠脑Nkx6.2 mRNA表达差异有统计学意义(均P<0.01);除甲低孕早期中、高剂量组与对照组对应日龄仔鼠的差异及甲低孕晚期高剂量组新生期仔鼠与同日龄对照组的差异无统计学意义外(均P>0.05),其他补充L-T4组与对照组同日龄仔鼠的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论甲低孕鼠子代大鼠脑组织同源盒基因Nkx6.2mRNA的表达受补充甲状腺素剂量及时间影响。; 张欣汪蓓蕾张瑞郭刚; 关键词：甲状腺功能试验甲状腺素

地拉罗斯联合顺铂对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：1: 2015年; 目的探讨铁鳌合剂地拉罗斯及其联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为寻找肺癌有效的治疗途径提供依据。方法常规传代细胞培养方法培养肺腺癌细胞A549,以不同浓度的地拉罗斯、地拉罗斯联合顺铂干预细胞生长一定时间。在倒置显微镜下观察A549的生长抑制特征;MTT法检测细胞的增殖抑制状况;DAPI、AO/EB染色观察细胞凋亡的形态学变化;Annxin V-FITC/PI双染流式细胞术定量测定细胞凋亡状况。结果 A549细胞经不同浓度的药物作用一定时间以后,在倒置显微镜下可见随药物浓度和时间的增加,细胞数明显减少,细胞相互分散,贴壁细胞出现皱缩变小折光性差;MTT检测显示,细胞增殖抑制率随药物浓度的增加和作用时间的延长呈现上升趋势,即剂量效应关系及时间效应关系;DAPI、AO/EB染色法观察到细胞凋亡的形态学变化,即细胞发生染色质凝集,核固缩等典型的凋亡形态特征;流式细胞术检测显示,细胞的凋亡率随药物浓度的增加而升高,联合用药促细胞凋亡显著。结论铁鳌合剂地拉罗斯具有抗肺癌细胞A549增殖的能力,促进肿瘤细胞凋亡,其与顺铂联合可增强癌细胞耐受性,降低顺铂的用量及其不良反应。; 袁婷梁吉祥张斌汪蓓蕾张欣郭刚张瑞; 关键词：铁螯合剂顺铂细胞增殖

重组蛋白TAT-NLS-Nkx6.2在大肠杆菌的表达纯化及活性测定: 2013年; 目的:构建重组基因TAT-NLS-Nkx6.2的原核表达载体,获得重组TN-Nkx6.2蛋白,并验证其生物学活性。方法:该实验先将人类免疫缺陷病毒HIV-1的反式激活因子TAT、核定位信号NLS、Nkx6.2基因片段连接合成目的基因TAT-NLS-Nkx6.2。之后构建重组质粒pET-28a-TNNkx6.2并将其转化入E.coli DH5α中克隆,再转化至E.coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,经组氨酸Ni2+亲和层析纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE及Western blot鉴定融合蛋白,荧光免疫组化染色观察TN-Nkx6.2在小鼠脑组织分布。结果:成功表达并获得纯度90%以上的TN-Nkx6.2蛋白,经Western Blot鉴定,TN-Nkx6.2有良好的免疫原性和免疫反应性荧光免疫组化染色证明TNNkx6.2与小鼠大脑细胞结合并内化进入胞浆及胞核。结论:获得的融合蛋白TN-Nkx6.2具有生物学活性,并能穿过血脑屏障与小鼠大脑细胞结合,并内化进入胞核和胞浆,为深入探讨同源盒基因Nkx6.2在甲状腺减低模型的分子机制研究奠定了物质基础。; 孙少飞汪蓓蕾袁婷张斌张欣郭刚张瑞; 关键词：重组蛋白蛋白纯化活性检测

大鼠NKx6.1启动子克隆及特异性表达分析: 2016年; 旨在构建大鼠NKx6.1启动子的报告载体,验证转录因子T3R对NKx6.1启动子的调控活性。用PCR扩增大鼠脑组织NKx6.1的5'上游启动子片段2.4 kb,应用生物信息学方法预测该片段上潜在的转录因子T3R结合位点,根据不同的结合位点作系列截短,获得3段长度不等的启动子缺失片段,分别克隆到荧光素酶报告基因表达质粒(p GL3-Basic)上,构建相应的报告载体。将报告载体和T3R共转染大鼠星形胶质细胞(rat astrocytes,RA),并检测报告基因荧光素酶的活性。结果显示,成功构建大鼠NKx6.1启动子报告载体,双荧光素酶报告基因活性检测表明T3R对NKx6.1启动子有明显调控作用,其中-1 887 bp-1 507 bp活性最高,即存在关键顺式调控元件。克隆并筛选出启动子核心区域,揭示了甲状腺激素对大鼠NKx6.1的表达调控机制。; 王大玮汪蓓蕾姚远陈皓张欣郭刚张瑞; 关键词：甲状腺激素启动子活性

大鼠小肠分泌胰岛素基因水平研究被引量：1: 2014年; 目的:明确小肠内胰岛素的存在情况及其表达水平。方法:8周龄雄性Wister大鼠,禁食24 h,灌胃50%葡萄糖溶液、牛血清白蛋白溶液、油脂悬液各2 mL,分别灌胃后在第0、5、10、15、20、25 min时脱臼处死,按不同时间段分为6组,取其胰腺、十二指肠。提取各组织总RNA,反转录成cDNA,普通PCR检测胰岛素mRNA的存在,实时荧光定量PCR检测不同时刻胰腺和十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量。结果:反转录普通PCR在大鼠十二指肠中扩增出胰岛素基因片段(经测序证实与胰岛素基因序列完全一致);十二指肠与胰腺胰岛素mRNA的相对表达量有显著差异(P<0.05),远远低于胰腺组织。灌胃后胰腺和十二指肠分泌胰岛素的表达水平呈动态表化,且十二指肠分泌胰岛素的表达高峰晚于胰腺。结论:该实验证实了除胰岛β细胞外十二指肠组织具有分泌胰岛素的功能,灌胃后十二指肠胰岛素mRNA的相对表达量呈动态表化,从而推测糖尿病的一种可能发病机制。; 甘文学张瑞张欣汪蓓蕾郭刚; 关键词：小肠胰岛素

miR-223敲减慢病毒的构建: 2015年; 目的构建mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能提供工具。方法采用Invitrogen公司mi R-RNAi在线设计工具,根据mi R-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R载体,经酶切连入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建了mi R-223敲减慢病毒质粒,利用293T细胞将其包装成病毒,并感染ST2细胞,观察感染效率并用q RT-PCR检测mi R-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了mi R-223敲减慢病毒载体,mi R-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞,表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%-90%,病毒滴度为1×10^9PFU/m L,感染效率达90%。感染mi R-223敲减慢病毒的细胞mi R-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09）,为阴性对照的31%,差异有统计学意义（n=3,t=15.091,P〈0.05）。结论成功构建了mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能准备了条件。; 张欣关晓慧王宝利; 关键词：微RNAS 慢病毒属 RNA干扰

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张欣

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