李健
- 作品数：15 被引量：100H指数：6
- 供职机构：江苏省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省医学重点人才培养基金江苏省卫生厅医学重点人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 环介导同温DNA扩增技术快速检测弓形虫DNA的初步研究被引量：13
- 2008年
- 目的建立一种快速的弓形虫活动性感染检测方法。方法根据刚地弓形虫特异性基因B1的基因序列设计一套用于环介导同温DNA扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,用DNA聚合酶Bst在65℃水浴箱中对含有弓形虫基因组DNA的样本进行LAMP扩增,用荧光染料SYBRⅡ染色及琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色观察结果。同时进行常规PCR对照试验。结果琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色发现LAMP扩增产物为大小不等的DNA片段,在扩增产物中加入荧光素SYBRⅡ顔色由紫红色变成绿色荧光,而阴性对照管仍保持紫红色。环介导同温DNA扩增的敏感性为103个弓形虫/ml,高于常规PCR。结论LAMP扩增检测弓形虫DNA的方法已经建立,为发展弓形虫病快速诊断方法奠定了良好的基础。
- 余传信殷旭仁李健华万全何伟梁幼生高琪
- 关键词：弓形虫病
- 三格式化粪池粪便无害化处理的效果被引量：20
- 2009年
- 目的评价三格式化粪池对人粪便的无害化处理效果,为农村改厕提供科学依据。方法2009年在江苏省内5个市选取130座三格式化粪池作为评价对象,采集三格式化粪池第1格和第3格样品,检测其中的粪大肠菌群(FC)、寄生虫卵(血吸虫卵、蛔虫卵和钩虫卵)、化学需氧量(COD)、五日生化需氧量(BOD5)和氨氮(NH3-N),观察各指标的变化情况,用统计软件SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果三格式化粪池第1格、第3格粪液FC达标率分别为3.1%和100%,两者差异有统计学意义(P=0.000 1,P<0.01)。分别有1座和4座化粪池第1格检测到钩虫卵和蛔虫卵,密度为1～2个/100 ml。第3格FC、COD、BOD5和NH3-N去除率分别为(99.96±0.03)%,(60.69±21.77)%,(60.13±23.20)%和(44.14±24.61)%。与第1格相比差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论三格式化粪池对人粪便处理达到了无害化卫生标准要求,可作为农村粪便无害化处理的有效形式进行推广。
- 金小林李健陈晓进徐祥珍沈明学曹汉钧高琪
- 关键词：去除率
- 2008年江苏省农村改厕无害化处理效果评价被引量：20
- 2009年
- 目的调查2008年江苏省无害化卫生厕所建造和使用情况,评价其对粪便处理的卫生学和环境学效果,为指导江苏省农村改厕工作提供科学依据。方法在江苏省无害化卫生厕所普及率<80%的10个县(市、区)的20个改厕村,随机抽取300座已经改造的无害化卫生厕所,现场勘察三格式化粪池的建造是否符合要求。采集无害化卫生厕所进口粪稀、出口粪液样品,实验室检测粪大肠菌群(FC)、寄生虫卵、化学需氧量(COD)、五日生化需氧量(BOD5)和氨氮(AN)等指标。计算进、出口FC的平均合格率,COD、BOD5和AN平均去除率。结果在调查的300座无害化卫生厕所中,构筑物的各项指标均符合要求。600份样品中均未检出寄生虫卵。进、出口FC平均合格率分别为16.00%和97.67%,差异有统计学意义(χ2=407.783,P<0.01),出口COD、BOD5和AN平均去除率分别为63.00%、47.67%和8.67%。结论2008年江苏省农村改厕工作完成情况较好。无害化卫生厕所对粪便中FC有很好的杀灭作用,但对COD、BOD5和AN的去除效果不够理想,需做进一步处理。
- 李健金小林徐祥珍沈明学吉兆华江文才高琪陈晓进
- 关键词：改厕卫生厕所
- 混合重组抗原用于血吸虫病诊断的研究被引量：5
- 2006年
- 目的观察混合重组抗原用于血吸虫病诊断的价值。方法采用亲和层析法制备纯化的日本血吸虫23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(SjC23HD)、21.7kDa膜蛋白(SjC21.7)和日本血吸虫虫卵毛蚴抗原(SjCMP10),采用酶联免疫吸附法对不同包被量的可溶性虫卵抗原、单个重组抗原、多个混合重组抗原检测血吸虫病血清抗体效果进行了比较。结果分别使用2.5μg/ml和7.5μg/ml的可溶性虫卵抗原包被酶标板,检测同一组血吸虫病人血清抗体的效果相同,但使用相同包被量的单一重组蛋白抗原及混合重组蛋白抗原检测同一组血吸虫病人血清抗体,混合重组蛋白抗原检测血清抗体的吸光度明显高于单一重组蛋白抗原,两者差异有显著性。用可溶性虫卵抗原与混合重组抗原同时检测39份急性血吸虫病人血清、80份慢性病人血清、27份晚期病人血清,两者阳性检出率相似。混合重组抗原检测20份华支睾吸虫病人血清及40份健康人血清无交叉反应和假阳性反应,特异性比可溶性重组抗原高。结论建立混合重组抗原诊断血吸虫病的方法,有助于提高重组抗原用于血吸虫病诊断的效能。
- 殷旭仁余传信许永良沈林南华万全李健
- 关键词：血吸虫病重组抗原
- 日本血吸虫童虫信号序列捕捉cDNA文库的构建及初步筛选被引量：3
- 2007年
- 目的建立日本血吸虫童虫信号序列捕捉cDNA(SST-cDNA)文库,筛选日本血吸虫病潜在的疫苗候选分子。方法抽提日本血吸虫童虫mRNA,并转录合成cDNA。将纯化的cDNA插入到载体pAPtag2中,构建SST-cDNA文库。将cDNA文库质粒转染到COS7细胞中进行蛋白表达,通过检测转染细胞中胎盘碱性磷酸酶(PLAP)的活性来判定插入的血吸虫童虫cDNA片段中是否带有信号序列。测定阳性克隆中外源性cDNA的核苷酸序,并通过Blast与Gen-Bank、EST数据库进行比对确定其性质。采用快速扩增cDNA未端序列方法获得基因的全长cDNA序列。用SignalP3.0、TMPred、TargetP服务器对带有信号序列基因的特征进行分析和预测。结果日本血吸虫童虫cDNA被插入到真核表达载体pAPtag2中,成功构建日本血吸虫童虫SST-cDNA文库。限制性内切酶分析表明SST-cDNA文库的容量为5×106cfu。SST-cDNA文库质粒转染到COS7细胞中后,通过近缘筛选获得21个带有信号肽cDNA序列,其中4个为未知新基因序列,5个为已知功能基因,12个与血吸虫EST序列同源。获得了8个基因的全长cDNA序列,演绎氨基酸序列特征分析表明,其中5个为膜结合蛋白基因,3个为外分泌蛋白基因。结论本研究成功构建了日本血吸虫童虫SST-cDNA文库,初步筛选获得了8个带信号肽的外分泌或膜结合蛋白分子基因。
- 余传信殷旭仁李健许永良周永华高琪梁幼生
- 关键词：血吸虫膜蛋白
- 表位疫苗的研究进展被引量：6
- 2007年
- 李健余传信
- 关键词：表位疫苗传染性疾病
- 江苏省包虫病流行病学调查被引量：7
- 2009年
- 目的了解江苏省包虫病流行的现状。方法对江苏省2005年以来的包虫病病例进行回顾性调查;对疑似本地感染的包虫病病人所在乡的宿主动物进行调查;ELISA检测病人所在乡镇的小学生、重点人群血清特异抗体和犬粪包虫抗原;血清阳性者作B超检查。结果共调查包虫病病例15例,其中4例疑似本地感染;犬和羊为主要中间宿主和终宿主;小学生、重点人群血清抗体阳性率、犬粪抗原阳性率分别为0.56%、0.22%和1.63%;B超检查未发现阳性病人。结论江苏省虽然出现了疑似本地感染包虫病病人、检出血清抗体阳性者和粪便抗原阳性犬,且存在完整的传播链,但未能找到病原体,因此不能判定江苏省为包虫病流行区,但也不能排除该可能性。
- 金小林李健沈明学徐祥珍曹汉钧高琪
- 关键词：包虫病流行病学调查
- 环介导等温扩增技术检测细粒棘球绦虫DNA的初步研究被引量：10
- 2011年
- 目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)检测细粒棘球绦虫的敏感性。方法提取细粒棘球绦虫虫卵及成虫DNA,根据棘球绦虫线粒体12SrRNA基因序列及LAMP法原理,设计4条细粒棘球绦虫特异性引物,进行LAMP反应,反应产物经SYBRGreenⅠ显色及1.5%琼脂糖电泳鉴定,同时设置泡状带绦虫及空白对照。用1000、100、10、1个虫卵/200μl细粒棘球绦虫虫卵DNA进行LAMP反应,评价其敏感性。结果细粒棘球绦虫检测管反应液呈混浊沉淀,显色后为绿色;对照组澄清,显色后为棕色。虫卵产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组无扩增产物。LAMP可检测到的虫卵最低数量为1个。结论 LAMP法敏感、特异、简便,可用于棘球蚴病病原检测和疾病监测。
- 徐祥珍金小林李健江文才蒋岗
- 关键词：细粒棘球绦虫环介导等温扩增技术RRNA
- 日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)基因合成、表达与免疫原性研究被引量：5
- 2008年
- 目的合成和表达日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)基因,并研究其免疫原性。方法采用重叠PCR人工合成日本血吸虫TSP2HD(aa107～aa182)完整基因片段,经测序正确后,将此片段插入表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒TSP2HD-PG,转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得含重组表达质粒的转化子,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察TSP2HD融合蛋白表达情况。用谷胱甘肽(GST)融合蛋白纯化胶(glutathione sepharose 4B)从表达产物裂解上清中纯化GST-TSP2HD融合蛋白,用凝血酶切割融合蛋白,制备纯化的重组TSP2HD蛋白。通过蛋白质印迹(Western blotting)分析重组TSP2HD蛋白与血吸虫病患者血清及血吸虫重感染兔血清的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白刺激血吸虫感染小鼠淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,通过比较实验组与对照组脉冲指数(cpm)值的差异研究重组TSP2HD蛋白的免疫原性。结果经过3轮重叠PCR扩增,获得长228bp的TSP2HD基因,序列分析证实与天然基因序列完全一致。含重组质粒TSP2HD-PG的转化子细菌,经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为34000的可溶性GST-TSP2HD融合蛋白。凝血酶切割GST-TSP2HD融合蛋白获得纯化的重组TSP2HD蛋白。Western blotting分析证明,重组表达蛋白可被血吸虫重感染兔血清和血吸虫病患者血清识别,有较好的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白能刺激血吸虫感染小鼠脾细胞增殖,实验组cpm值明显高于对照组,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论日本血吸虫TSP2HD基因合成及表达获得成功,重组TSP2HD蛋白有天然免疫原性。
- 余传信李健殷旭仁华万全梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫重叠PCR基因合成免疫原性
- 诱导T细胞免疫反应的日本血吸虫抗原表位的重组表达与免疫原性鉴定
- 2007年
- 目的对预测的日本血吸虫T细胞免疫反应表位进行合成与融合表达,并对其免疫原性进行分析。方法根据3个表位(P7、P17、P18)的基因序列,人工合成正、负链寡核苷酸序列,使正链的5′端带有NcoI酶切位点,负链的3′端带有XhoI酶切位点。将每条表位肽的正、负寡核苷酸链退火形成双链DNA后,定向克隆入表达载体pET32c(+),电转化至E.coliDH5α,经PCR、酶切及DNA序列分析鉴定出分别含有P7、P17、P18序列的重组质粒。提取重组质粒电转化至E.coliBL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷对表位肽融合蛋白进行诱导表达,经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析。表位肽融合蛋白用Ni2+螯合亲和层析胶纯化。同时根据P7、P17及P18的氨基酸序列人工合成这3个表位肽段。用纯化的表位融合蛋白、人工合成的表位肽体外刺激紫外线致弱尾蚴免疫C57BL/6J小鼠脾细胞,3H-TdR掺入法检测其刺激淋巴细胞的增殖效果。结果P7、P17、P183个表位肽基因序列被成功克隆到pET32c(+)中并获得重组质粒,重组质粒均能表达大小约20kDa的融合蛋白。表达产物用Ni2+亲和层析胶纯化后获得纯化的肽融合蛋白。表位P7、P17重组蛋白或合成肽均能有效刺激小鼠淋巴细胞增殖。结论P7、P17肽段是日本血吸虫的T细胞抗原表位。
- 李健殷旭仁余传信许永良华万全何伟梁幼生高琪
- 关键词：日本血吸虫抗原表位
