姚克
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- 肝素联合层黏连蛋白对大鼠脂肪间充质干细胞向运动神经元分化的影响
- 2015年
- 目的研究单独或联合应用肝素(heparin)与层黏连蛋白(laminin)对大鼠脂肪间充质干细胞(AD-MSCs)向运动神经元分化的影响。方法用酶消化法分离纯化SD大鼠AD-MSCs,取传至第3代的AD-MSCs,检测表面抗原CD31、CD44、CD49d及CD106的表达情况,MTT法检测增殖活性。根据处理因素不同为4组:空白对照组,不加任何诱导剂;L组(laminin组),加入1μg/ml层黏连蛋白;H组(heparin组),加入50μg/ml肝素;HL组(heparin+laminin组),加入50μg/ml肝素和1μg/ml层黏连蛋白。细胞诱导后第15天,观察细胞形态的变化;采用免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Hb9和Ch AT的表达,比较各组抗体的阳性率。诱导后3、6、9、12和15 d分别收集各组细胞,ELISA法检测细胞内Ach的含量。结果原代细胞为贴壁生长的长梭形细胞,流式细胞仪检测结果显示,CD44高表达,CD49d低表达,CD31、CD106阴性。MTT法结果表明AD-MSCs经多次传代培养后,其增殖能力没有明显降低。空白对照组和L组细胞诱导后形态变化不明显,NSE阳性表达率均很低,两者之间无明显差别。H组和HL组细胞诱导第15天后具有神经元样形态;NSE的阳性表达率比其他两组明显增多。H组和HL组细胞诱导后可见Hb9表达阳性,阳性率分别为为6.89%和30.47%,Ch AT阳性率分别为10.83%和39.36%,其他两组无Hb9和Ch AT表达,各组的GFAP均低表达。ELISA检测结果显示,对照组和L组诱导后细胞不表达乙酰胆碱(Ach),而H和HL组自诱导后第9天起表达Ach,且随着诱导时间的延长逐渐增加,到第15天时分别达到1.27和4.98ng/ml。结论肝素联合层黏连蛋白能显著促进大鼠AD-MSCs向运动神经元分化。
- 姚克李德华刘学元房艳
- 关键词：脂肪间充质干细胞肝素层黏连蛋白运动神经元
