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猪圆环病毒2型ORF2基因重组植物乳杆菌的构建及其免疫原性分析被引量：5: 2017年; 为研制一种能有效控制猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的新型疫苗,本试验将PCV2的ORF2基因克隆至植物乳杆菌表达载体pSCPSP超强启动子SCP的下游,构建重组表达质粒pSCPSP-Cap,用电击转化法转化克隆至表达宿主菌植物乳杆菌,获得一株重组植物乳杆菌。以SDS-PAGE和Western blotting法检测24h上清液中表达的蛋白;将8周龄的SPF级BALB/c小鼠随机分组,每组8只,分别设置对照组、空载体组、灌胃组、饮水组、灭活疫苗组,试验14、28、42和56d后对小鼠采血,分离血清,利用PCV2ELISA抗体检测试剂盒检测小鼠血清中PCV2的抗体水平。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,PCV2衣壳蛋白在植物乳杆菌中成功分泌表达,表达的蛋白分子质量为28ku,且具有良好的反应原性,重组植物乳杆菌免疫小鼠诱导机体产生PCV2特异性抗体显著高于其他组(P<0.05)。结果表明,PCV2的ORF2基因在植物乳杆菌中成功表达,且具有良好的生物活性,可为PCV2口服疫苗的开发研究提供理论参考。; 倪能能王新珂赖强焦茂兴黄毓茂; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白植物乳杆菌口服疫苗

猪表皮生长因子在植物乳杆菌中的表达及其活性检测被引量：9: 2015年; 为获得一株高效表达猪表皮生长因子(p EGF)的重组植物乳杆菌,并检测其生物活性,从仔猪肠道内容物中分离植物乳杆菌,选择其中生物活性最强的一株(Lp-1)为宿主。以商品化乳杆菌表达载体p IAβ8为骨架,干酪乳杆菌超强组成型启动子SCP、M6前体蛋白信号肽SP、猪表皮生长因子p EGF等为元件,构建表达p EGF的植物乳杆菌重组表达载体p SCPSE。用电转化方法 (2.0 k V,2 000?,25μF,4.0 ms)将重组载体p SCPSE转化入宿主菌Lp-1中获得重组植物乳杆菌Lp-p SCPSE。以Tricine-SDS-PAGE法和p EGF ELISA特异性检测试剂盒检测目的蛋白的表达;用培养12 h的阳性转化子菌体给刚断奶的BALB/c小鼠灌胃,2次/d,连续10 d,以断奶小鼠的体重、肠绒毛长度和隐窝深度的变化为指标,检测目的蛋白的生物活性。Tricine-SDS-PAGE检测和小鼠实验结果显示,重组植物乳杆菌的培养上清中出现6 k Da左右p EGF的特异性条带,且表达p EGF的重组植物乳杆菌能显著增加(P<0.05)断奶小鼠的体重、肠绒毛高度和肠隐窝深度。结果表明,p EGF在植物乳杆菌中成功表达,且具有良好的生物学活性。; 钟泽民赖强余希尧刘德辉黄毓茂; 关键词：猪源乳酸杆菌绒毛高度隐窝深度

定点改造的猪源胰高血糖素样肽-2在植物乳杆菌中的表达及生物活性研究: 在养殖生产过程中，仔猪在断奶期由于各种因素应激，导致仔猪肠道形态和结构出现不同程度的破坏，导致食欲不振、腹泻、生长停滞等所谓的“断奶仔猪应激综合征”，严重影响仔猪的健康和养殖效益。GLP-2是一种特异性肠道营养因子，在特...; 赖强; 关键词：生物活性断奶仔猪应激综合症

定点改造的猪源胰高血糖素样肽-2基因在植物乳杆菌中的表达: 2016年; 根据pGLP-2基因序列,进行定点位点改造,即将pGLP-2的第二位的丙氨酸替换成甘氨酸,形成不被DPP-IV酶切的p(Gly2)-GLP-2,并进行植物乳杆菌(LP1)的密码子偏嗜性修饰,克隆至由超强启动子SCP驱动外源基因表达的植物乳杆菌表达载体p SCPSP,电转化表达宿主菌植物乳杆菌。通过基因组PCR方法鉴定后获得阳性重组转化子,将24 h培养上清通过Tricine-SDS-PAGE检测目的条带,并用pGLP-2ELISA特异性检测试剂盒检测24 h、36 h、48 h培养上清中目的蛋白的表达含量。结果,对pGLP-2成功进行了氨基酸的定点改造,形成了p(Gly2)-GLP-2,成功构建了表达载体p SCP-p(Gly2)-GLP-2;将质粒电转化入植物乳杆菌LP1后成功获得阳性转化子p SCPSP-p(Gly2)-GLP-2-LP1,在Tricine-SDS-PAGE试验中可观察到4 ku左右的目的条带;ELISA试验中p(Gly2)-GLP-2在24 h、36 h、48 h的表达量呈下降趋势,确定最佳表达时间为24 h。结果表明,本试验成功构建的由超强启动子SCP组成的表达系统,在宿主菌植物乳杆菌中成功表达了改造后的p(Gly2)-GLP-2,为pGLP-2的开发研究奠定了基础。; 赖强倪能能王新珂华国良钟泽民黄毓茂; 关键词：ELISA

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赖强