冯昆
- 作品数：9 被引量：74H指数：5
- 供职机构：遵义医学院珠海校区更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- “基于问题的教学”方法在《生物化学与分子生物学》实验教学中的应用被引量：6
- 2018年
- 本院生物化学与分子生物学实验教学内容多是验证性实验,加上教师讲解、学生照做传统的实验教学模式,使学生对实验课学习兴趣不高,动手能力、解决问题能力也未得到充分提升。我们通过在实验课中引入基于问题的教学策略,将抽象乏味的实验内容联系生活实际问题,使其具体化、形象化,大大提高了学生学习的积极性,拓宽学生的知识面及对基础知识的理解和掌握,并增强了学生实际解决问题的能力,取得了良好的教学效果。
- 夏春丽张健王燕魏妮娜张青峰冯昆
- 关键词：生物化学与分子生物学实验教学
- 人蔗糖酶卵黄抗体三种不同提取方法的比较
- 2016年
- 目的应用三种不同方法分离提取特异性抗人蔗糖酶卵黄抗体,比较总蛋白浓度、蛋白纯度及生物活性。方法以人蔗糖酶蛋白作为抗原免疫蛋鸡,分别采用硫酸钠水提取法、聚乙二醇法和冷乙醇法分离提取卵黄抗体,BCA法测定总蛋白质含量;聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测抗体纯度;间接酶联免疫吸附测定法检测抗体效价。结果经典的硫酸钠水提取法相对其他两种方法提取的卵黄抗体在总蛋白含量和纯度都较高,杂带相应较少,聚乙二醇法提取的抗体效价较低,硫酸钠水提取法和冷乙醇法提取的抗体效价基本没有区别。结论三种提取方法中,硫酸钠水提取法操作简单、纯度较高、对蛋白影响较小,为后续有效分离提取卵黄抗体打下实验基础。
- 邵敏王新颖杜凤霞冯昆田忠周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体生物活性
- 磁珠法快速提取基因组DNA的实验研究被引量：16
- 2018年
- 针对临床标本基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,提取步骤繁琐,需要进行离心操作,并且提取过程中会用到苯酚、氯仿等有机试剂,会对操作人员有一定的危害性等不足,本研究拟建立一种适用于临床标本的基因组DNA快速提取方法。在传统的基因组DNA提取试剂和方法的基础上,本研究采用二氧化硅修饰的超顺磁珠设计了一种基因组DNA快速提取方法;探讨磁珠用量、裂解液p H、盐酸胍浓度等因素对基因组DNA提取效率的影响并采用凝胶电泳实验进行验证。当磁珠用量在50~100μg/100 mg样品,裂解液p H约为6,盐酸胍的浓度为6 mol/L时基因组DNA提取效果好、效率高,且磁珠的用量与吸附表面积成正比,但达到一定用量后不会增加提取量,对于100 mg肺组织,适宜的磁珠用量为80μg。此基因组DNA提取方法高效省时,简便快捷,性价比高,适用临床大量样本基因组DNA提取。
- 许朋郑春辉孙智勇余兰冯昆
- 关键词：基因组DNA磁珠法
- 基于实践的研究生医学实验动物学教学分析被引量：7
- 2018年
- 研究生医学实验动物学课程是我校教学改革的中心对象之一,我们构建以研究生成长成才为主的培养机制,对教学内容、教学方法、考核评价机制三方面进行优化,积极探索以理论为指导,以实验为主导的教学改革的有效方法和途径。经过实践证明,教改提高了教学质量和效果,充分激发了学生的学习积极性和主动性,并建立了完善的考核体系,为今后的教学奠定了理论基础。
- 张青峰冯昆刘星高书颖吕延成
- 关键词：医学实验动物学教学内容教学方法考核评价机制
- 小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进被引量：4
- 2015年
- 目的改进小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备的方法,以利于在实验教学中应用。方法设定不同浓度梯度的秋水仙素,分别作用于小鼠4小时和14小时,调整低渗液浓度及低渗时间、预固定和固定时间、离心速度及离心时间、滴片高度等,制作出分散良好、形态清晰的染色体标本。结果经过多次反复实验比较,秋水仙素注射剂量为10μg/g BW作用4小时和5μg/g BW作用14小时,低渗液处理15分钟,预固定2分钟,固定10分钟,2 500转/分,离心5分钟,滴片高度50~80 cm,可获得理想的实验结果。结论改进后的实验方法不仅能有效地缩短实验操作时间,而且可以提高实验教学质量,可应用于相关实验教学。
- 刘星冯昆张青峰姬可平王燕
- 关键词：小鼠骨髓细胞中期染色体
- 抗人异麦芽糖酶卵黄抗体的研制及活性测定被引量：1
- 2018年
- 目的抗体药物是目前生物医药的研究热点问题之一。文章旨在研制抗人异麦芽糖酶(hISO)卵黄抗体(IIgY)并检测其生物学活性。方法将hISO重组蛋白作为抗原与弗式佐剂充分乳化后免疫蛋鸡,水稀释-硫酸钠提取法提取抗人I-IgY,分别通过SDS-PAGE、Western blot和ELISA等实验技术分析该抗体的纯度、特异性、效价和稳定性,PNPG法测定该抗体对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果获得了抗人I-IgY,其效价最高可以达1∶12 800,该抗体可特异性结合hISO重组蛋白,且具有较好的热稳定性、酸碱稳定性及胃蛋白酶抗性。结论成功制备了抗人I-IgY,为后续对2型糖尿病口服降糖药物的研制奠定实验基础。
- 王新颖王丹冯昆葛正龙周鹤峰邵敏
- 关键词：卵黄抗体效价稳定性特异性
- 在线提取HPLC法测定两种虫草中腺苷和虫草素的含量被引量：14
- 2018年
- 目的建立测定两种虫草样品中腺苷和虫草素含量的在线提取高效液相色谱定量分析方法。方法样品提取条件为:样品粉末和硅藻土均匀混合后置于空预柱芯中,并装入预柱套,组成样品提取池;将样品提取池置于70℃柱温箱中,以水为提取溶剂,提取溶剂以流速1.5 m L·min^(-1)依次通过提取池、保护柱ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×12.5 mm,5μm)和分析柱ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm)产生压力进行在线加压溶剂提取及色谱分析。色谱条件:ZORBAX SB-Aq(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,柱温20℃,流动相为水-甲醇梯度洗脱,流速1.5 m L·min^(-1),检测波长260 nm。结果腺苷及虫草素质量浓度分别在1.01~50.32μg·m L^(-1)(r=1.000)和3.98~198.94μg·m L^(-1)(r=1.000)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为103.5%及97.8%,RSD均小于5%;3批冬虫夏草样品的腺苷含量范围为0.24~0.30 mg·g^(-1);3批蛹虫草样品的腺苷含量范围为0.18~0.37 mg·g^(-1);虫草素仅在3批蛹虫草样品中被检测到,其含量为0.74~1.19 mg·g^(-1)。结论该方法准确可靠,可用于冬虫夏草和蛹虫草的质量评价。
- 钱正明李春红李文庆宋月林周妙霞冯昆李文佳
- 关键词：冬虫夏草蛹虫草腺苷虫草素
- 党参多糖的提取及体内外免疫作用的研究被引量：22
- 2018年
- 目的旨在分离、纯化党参多糖并对其在体内、外的免疫调节活性进行研究。方法采用传统的水提(加热回流)醇沉(梯度乙醇沉淀)法制备党参粗多糖(Codonopsis pilosula Polysaccharide,CPP),经活性炭吸附脱色、Sevage法除蛋白得党参多糖,通过体外淋巴细胞增殖实验检测CPP的免疫调节作用,通过测定大鼠免疫脏器指数、血清中补体C3、补体C4、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、生长激素(GH)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、胰岛素(INS)生成水平评价其免疫调节作用。结果 CPP能够促进淋巴细胞体外增殖(P<0.05);党参多糖各剂量组均能提高胸腺指数和脾脏指数,与模型组相比,党参多糖高、中、低剂量组的血清中C3、C4、IgG、IgM、IgA、GH、IGF-1、T3、T4、INS生成水平均有不同程度的增高(P<0.05)。结论 CPP对环磷酰胺所致免疫功能低下大鼠具有明显的增强作用,本研究为CPP的临床应用和功能性食品的开发提供了理论依据。
- 许朋余兰冯昆
- 关键词：党参多糖细胞增殖免疫功能
- 抗人蔗糖酶卵黄抗体的制备及其稳定性和体外活性研究被引量：4
- 2016年
- 目的：制备抗人蔗糖酶（Sucrase,SUC）卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin Y,Ig Y）并对其稳定性、体外活性进行研究。方法：采用人SUC蛋白为抗原,免疫海兰灰蛋鸡,水稀释和盐析法提取纯化Ig Y;间接ELISA法监测抗体效价变化并评价其稳定性;SDS-PAGE和Western blot分析Ig Y的纯度和特异性;PNPG法测Ig Y对α-葡萄糖苷酶的体外抑制效果。结果：初次免疫10 d后检测到Ig Y,40 d后效价最高达到1∶12 800;提取的Ig Y重链和轻链分别在65 k D和25 k D处,且能够与抗原蛋白特异性结合;29~69℃范围内水浴15 min和p H 4~7之间37℃水浴4 h,抗体效价无变化;胰蛋白酶与胃蛋白酶作用Ig Y2 h,抗体效价降至一半,延长作用时间,Ig Y对胃蛋白酶耐受力较胰蛋白酶耐受力更强;Ig Y对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,呈现剂量相关性,半抑制浓度（IC50）值为0.540 mg/ml。结论：抗人蔗糖酶卵黄抗体（S-Ig Y）的成功制备为后续用于2型糖尿病大鼠模型体内实验研究奠定基础。
- 邵敏王新颖卢毓璁王敏冯昆魏妮娜杜凤霞周鹤峰
- 关键词：蔗糖酶卵黄抗体稳定性
