杨芳丽
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医科大学基础医学院免疫学教研室更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组小鼠IL-33成熟蛋白的原核表达、纯化及活性检测
- 2015年
- 目的为了在大肠埃希菌中表达具有生物学活性的小鼠IL-33成熟蛋白。方法利用PCR技术从pc DNA3.1-IL-33质粒中扩增小鼠IL-33成熟蛋白的基因,将其插入原核表达载体p ET21a(+),构建成p ET21a-m IL-33质粒,转化至大肠埃希菌BL21,筛选出可表达m IL-33的大肠埃希菌工程菌株。经IPTG诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化。结果经SDS-PAGE分析获得纯度高达95%的m IL-33蛋白,相对分子质量18 000。ELISA试验显示m IL-33可以有效的促进肠系膜淋巴细胞产生Th2型细胞因子(IL-5),与未处理组的差异具有显著的统计学意义。结论利用大肠埃希菌表达系统表达了具有生物活性的m IL-33蛋白,为继续开展IL-33在炎症性肠病的免疫治疗研究奠定了基础。
- 朱俊丰桑力轩杨芳丽李岩翟景波高植鹏邓芳博孙逊王大南吕昌龙
- 关键词：原核表达纯化活性INTERLEUKIN
- 小鼠白细胞介素33真核表达质粒的构建及表达
- 2015年
- 克隆小鼠IL-33基因构建其真核表达质粒,并转染COS-7细胞检测其表达。提取C57BL/6小鼠肺组织总RNA,经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增小鼠IL-33基因,酶切后插入pc DNATM3.1/myc-His A构建其真核表达质粒pc DNA-3.1-IL-33,重组质粒转染COS-7细胞,RT-PCR和免疫印迹法(western blotting)检测目的基因表达。结果显示,pc DNA3.1-IL-33中插入的片段序列测定结果与小鼠IL-33c DNA序列一致,重组质粒转染COS-7细胞后检测到相应mRNA及蛋白表达。成功克隆了小鼠IL-33基因c DNA,并构建其真核表达质粒。
- 朱俊丰桑力轩杨芳丽李岩翟景波高植鹏邓芳博孙逊王大南吕昌龙
- 关键词：基因克隆真核表达
