杨玉静
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
- 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小鼠毛囊不同生长周期中MITF下游色素相关基因的定位表达及相关性分析被引量：6
- 2017年
- 小眼畸形转录因子(MITF)不仅是黑色素细胞发育、增殖和存活的必要调节因子,而且对调节相关酶和黑素体蛋白表达来确保黑色素产生具有至关重要的作用。MITF下游色素相关基因在小鼠毛囊生长周期中的表达及相关性仍有待研究。HE染色结果表明不同毛囊时期的小鼠毛囊呈现典型的组织形态学结构;免疫组织化学显示,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在不同毛囊生长周期中的毛基质及内外毛根鞘均有不同程度的阳性表达。黑色素测定结果表明,在毛囊生长初期和中期,碱性可溶性总黑色素(ASM)、真黑素(EM)以及褐黑素(PM)相对含量高于毛囊生长末期。蛋白免疫印迹结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在毛囊生长初期和中期蛋白质相对水平明显高于毛囊生长末期。实时荧光定量PCR结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2、PMEL在毛囊生长初期和中期,mRNA相对表达量显著高于毛囊生长末期。在不同毛囊生长周期小鼠皮肤的MITF下游色素相关基因表达存在显著差异,表明上述因子在维持黑色素细胞色素生成是不可或缺的因素。
- 赵兵令王海东陈天直于秀菊杨玉静许灿胡帅鹏聂瑞强董常生
- 关键词：小鼠毛囊免疫组化学
- 绵羊MITF-M在黑素细胞中过表达后的功能分析被引量：11
- 2016年
- 【目的】小眼畸形相关转录因子-M型(microphthalmia associated transcription factor M,MITF-M)在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用,克隆绵羊小眼畸形相关转录因子-M型基因序列,研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊MITF-M是否影响TYR、TYRP-1和TYRP-2的表达,从而探究对黑色素的生成的影响。【方法】使用试验室冻存的第5代绵羊黑素细胞,通过PCR方法用引物以绵羊黑素细胞cDNA为模板克隆MITF-M基因cDNA序列,构建绵羊MITF-M克隆载体和真核表达载体;通过细胞转染技术在细胞水平过量表达绵羊MITF-M;转染后使用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用分光光度计对绵羊黑素细胞中黑色素含量进行测定,并进行Real-time PCR试验检测转染后细胞MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2基因在mRNA水平表达量的变化,Western blot试验检测转染后细胞MITF、TYR蛋白水平的变化。【结果】经测序和拼接,最终获得长度为1 242 bp的绵羊MITF-M基因的cDNA序列;成功构建真核表达载体,载体上连有一个启动报告基因绿色荧光蛋白和特异性TYRP-2基因启动子;细胞转染后,在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光说明转染效率明显;分光光度计检测显示,转染后绵羊黑素细胞中黑色素量增加1.15倍(P<0.05);荧光定量检测结果显示,绵羊黑素细胞中MITF mRNA表达量增加极显著(P<0.001),表明绵羊MITF-M转染效率显著,TYR mRNA表达量增加极显著(P<0.001),TYRP-1 mRNA表达量升高至5.06倍(P<0.05),TYRP-2 mRNA表达量升高至1.49倍,变化不明显。蛋白免疫印迹结果显示,绵羊黑素细胞中MITF-M转染组MITF蛋白表达量是空载体组的1.65倍(P<0.001),转染组TYR蛋白表达量是空载体组的2.38倍(P<0.001),这与荧光定量检测结果一致。【结论】通过PCR和克隆技术及核酸测序技术获得了绵羊MITF-M基因全长1 242 bp的CDS区,过表达绵羊MITF-M会使黑素细胞TYR、TYRP-1的表达量增加,对TYRP
- 杨玉静张丹瑾聂瑞强谢建山范瑞文高文俊董常生
- Pax6 PAI亚结构域在黑色素细胞中对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的影响被引量：4
- 2016年
- 【目的】高度保守的PAX转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用,其家族共有的PD结构域是其与下游基因结合的主要位点,而PD结构域氨基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明Pax6在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用,本试验借助研究Pax6 PAI亚结构域的功能来对PAX转录因子家族共有的PD结构域和PAI亚结构域进行研究。【方法】首先通过Psipred对Pax6 PD结构域的结构进行分析,使用NCBI对Pax6 PD结构域与下游基因的结合位点进行分析,使用Jaspar对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2启动子中Pax6 PD结构域可能的作用位点进行预测。使用普通PCR克隆Pax6PAI亚结构域,将其连入T载体,酶切后连入慢病毒载体,并送公司测序确认。将构建好的PAI亚结构域过表达载体通过细胞转染导入到培养的小鼠黑色素细胞中,使其过量表达。收集细胞,分别通过观察绿色荧光蛋白检测转染效率,使用RT-PCR和Western blot来检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2在m RNA和蛋白水平的变化,同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】通过NCBI分析可知,Pax6 PD结构域与下游基因的作用位点主要集中在氨基端的PAI亚结构域。通过Jaspar预测分析,得知,MITF启动子-695处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYR启动子-873和-1133处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYRP1启动子-629处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYRP2启动子-655处存在Pax6 PD结构域的结合位点。在黑色素细胞中过表达Pax6 PAI亚结构域后,与空载组相比,试验组MITF m RNA升高2.05倍(P<0.01),蛋白质升高1.7倍(P<0.01);TYR m RNA升高2.09倍,蛋白质升高2倍(P<0.05);TYRP1 m RNA升高2.93倍(P<0.05),蛋白质升高1.9倍(P<0.01);TYRP2 m RNA升高3.62倍(P<0.01),蛋白质升高1.37倍。同时试验组的黑色素含量是空载组黑色素含量的1.33倍(P<0.001)。【结论】在小
- 聂瑞强杨玉静谢建山范瑞文许冬梅于秀菊段志成董常生
- 关键词：PAX6黑色素
- Slc45a2调控小鼠黑色素细胞色素生成被引量：4
- 2017年
- 膜相关转运蛋白Slc45a2(solute carrier family 45 member 2)调节黑素体中的p H值,进而调节酪氨酸酶活性,在黑色素生成中发挥重要作用。小眼畸形转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)已被证实是Slc45a2的调节因子,然而其调控机制仍待研究。该研究旨在探讨Slc45a2在不同毛色小鼠皮肤是否存在差异表达,以及与毛色形成是否存在相关性。QRTPCR检测显示,Slc45a2在不同毛色小鼠皮肤样品中均有表达,在棕色和灰色小鼠皮肤中Slc45a2的表达量是黑色小鼠皮肤的6.29倍(P<0.01)和1.18倍(P<0.05);Western印迹结果显示,在棕色和灰色小鼠皮肤中Slc45a2蛋白表达量是黑色小鼠皮肤的1.44(P<0.01)和1.03倍;免疫组织化学结果表明,Slc45a2在不同毛色皮肤毛囊的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。为了进一步了解Slc45a2在黑色素细胞色素沉着的重要作用,将Slc45a2转染到小鼠黑色素细胞并测定黑色素含量,同时检测色素沉着相关基因的表达水平。结果表明,转染Slc45a2与空载组相比黑色素含量明显增加。此外,MITF、TYR、TYRP1和TYRP2蛋白水平分别升高1.31倍、1.37倍、1.63倍和2.21倍,差异显著(P<0.05);TYRP2蛋白显著升高2.47倍(P<0.01)。MITF mRNA显著升高1.64(P<0.05);TYR和TYRP1 mRNA显著升高2.96倍(P<0.01)和8.85倍(P<0.01);TYRP2 mRNA表达量变化不明显。Slc45a2在不同毛色小鼠皮肤中均可有效表达,且差异显著。Slc45a2过量表达,使色素沉着相关基因的表达量及黑色素含量增加。由此表明,Slc45a2通过调控色素的生成,进而影响毛色的形成。
- 王海东赵兵令陈天直于秀菊杨玉静刘颖常露程赫晓燕薛霖莉
- 关键词：毛色黑色素细胞
- 紫外线b促进绵羊黑色素细胞中GPNMB和PMEL的表达被引量：3
- 2017年
- 非转移性黑色素瘤糖蛋白b(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)及其同系物色素细胞特异性黑色素细胞蛋白(pigment cell-specific melanocyte protein,PMEL)对黑素体的形成和黑色素的生成具有重要的作用,而GPNMB和PMEL的功能还有待深入研究。本文旨在探索GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤表达是否存在差异,确定紫外线b(UVB)对GPNMB和PMEL是否有影响。免疫组织化学结果表明,GPNMB在不同毛色绵羊皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。Western印迹和qRT-PCR结果显示,黑色绵羊皮肤中GPNMB和PMEL表达量,高于白色绵羊皮肤。黑色素细胞经UVB照射后,GPNMB和PMEL的表达增高。UVB照射剂量为100 m J/cm2时,黑色素细胞活性最高;单次UVB辐射后,GPNMB和PMEL mRNA表达量在72h达到顶峰,两者的曲线变化趋势大致相同。UVB连续辐射后,GPNMB mRNA表达量在4 d达到顶峰,而PMEL mRNA表达量虽然在3 d升高,但且对GPNMB作用更明显。上述结果提示,GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤存在差异性表达。UVB单次或者连续照射,均促进GPNMB和PMEL表达,且对GPNMB影响更显著。GPNMB和PMEL可能通过影响黑素体的成熟进而调节黑色素的生成。
- 赵兵令杨玉静陈天直于秀菊杨林佩董常生杨姗姗
- 关键词：绵羊
- 突触融合蛋白4在不同毛色小鼠皮肤组织的差异表达被引量：1
- 2015年
- 旨在探讨突触融合蛋白4(Syntaxin4,STX4)在皮肤组织细胞中的表达与定位,确定其是否与毛色形成存在相关性。选择白、灰、黑3种毛色皮肤组织样品(6只昆明小鼠白毛色背部皮肤、6只C57BL/6小鼠灰毛色腹部皮肤和黑毛色背部皮肤)和体外培养小鼠黑色素细胞样品,通过PCR扩增、Real-time PCR、免疫组化和Western blot技术对STX4的表达情况进行定性和定量分析。结果表明:在3种毛色皮肤样品和黑色素细胞样品中均扩增出897bp CDS区序列片段;Real-time PCR检测显示,STX4在白灰黑3种毛色皮肤样品中均有表达,黑色皮肤表达量最高,灰色皮肤表达量次之,分别是白色皮肤的3.44倍和1.92倍;免疫组化结果表明,在白色和黑色皮肤表达于整个毛囊,包括角化细胞;在体外培养黑色素细胞也显示阳性表达;Western blot结果显示,在白、灰、黑色皮肤和黑色素细胞样品中均有STX4阳性条带,表达量与荧光定量结果一致。综上表明,STX4在小鼠皮肤组织、毛囊角化细胞、黑色素细胞有效表达,且表达量在白灰黑皮肤中呈递增趋势,推测STX4与小鼠毛色形成呈正相关性。
- 谢建山张丹瑾郭艳妮范瑞文许冬梅杨玉静聂瑞强于秀菊段力升朱芷葳高文俊赫晓燕董常生
- 关键词：小鼠毛囊
- 非转移性黑色素瘤糖蛋白B对小鼠黑色素细胞色素生成的影响
- 2017年
- 旨在探索非转移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)在不同毛色小鼠皮肤是否存在差异性表达,确定其对黑色素生成的影响。随机选取C57BL/6J品系出生12d的黑、棕、灰小鼠各3只,背部剪毛后,每只小鼠各取3块皮肤组织,采用免疫组织化学检测,结果表明,GPNMB在不同毛色小鼠皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。利用Western blot和qRT-PCR方法分析,结果显示,灰色小鼠皮肤中GPNMB表达量最低。过表达GPNMB后,与空载体组相比,MC1R、β-catenin和SLC45A2相对表达量显著升高;用紫外线B(UVB)处理黑色素细胞,同时检测GPNMB和MC1R的表达量变化。结果表明,UVB对GPNMB和MC1R有影响,并且不同剂量UVB辐射对GPNMB影响不同。综上表明,GPNMB在不同毛色小鼠皮肤存在差异性表达,并且通过影响黑色素细胞色素的生成进而参与毛色的生成。
- 赵兵令陈天直杨玉静于秀菊杨林佩董常生
- 关键词：UVB黑色素细胞黑色素
- STX17在不同毛色小鼠皮肤中差异表达与在毛囊中的定位被引量：1
- 2015年
- 突触融合蛋白17(STX17)是一种囊泡蛋白,参与细胞中物质的运输.为研究Stx17在不同毛色皮肤中是否存在差异表达及明确它在毛囊中的定位,进行了普通PCR、real-time PCR、免疫组化和蛋白免疫印迹实验对小鼠皮肤组织和体外培养黑素细胞的Stx17基因及蛋白的检测.普通PCR检测得出小鼠皮肤和黑色素细胞总RNA有Stx17 CDS区序列的表达;荧光定量检测显示,在白、灰、黑3种组织中Stx17均有表达,在灰色腹部表达量最高,是黑色皮肤的1.682倍,昆明鼠白色皮肤中表达量最低,是黑色皮肤的0.115倍;皮肤组织免疫组化结果显示,STX17表达于毛囊的上皮根鞘,且毛囊上段和中段表达量高于下段,黑色素细胞的免疫组化分析得出,STX17在黑色素细胞的细胞质和细胞膜上均有表达;蛋白免疫印迹结果显示,在白色、灰色和黑色皮肤均有STX17蛋白阳性条带且灰色皮肤中表达量最高,黑色皮肤次之,白色皮肤中表达量是最低的,这与荧光定量检测结果一致,体外培养的小鼠黑色素细胞中也有STX17蛋白阳性条带.实验结果表明,小鼠Stx17基因在皮肤组织、毛囊角化细胞以及黑色素细胞中均有表达,Stx17可能参与毛色的形成,且在小鼠腹部毛色变浅中起到了一定的作用.
- 张丹瑾谢建山申艳范瑞文聂瑞强杨玉静于秀菊段力升曹靖董常生
- 关键词：毛囊
- 小鼠Oct-1基因CDS区克隆与生物信息学分析被引量：2
- 2016年
- 为研究小鼠Oct-1基因的生物学特性,试验扩增小鼠黑色素细胞中Oct-1基因CDS区序列,并运用生物信息学软件分析小鼠Oct-1基因序列的特性、编码蛋白理化性质、亚细胞定位、靶基因及保守性结构域等,从而预测其是否调控黑色素的生成。结果表明,小鼠Oct-1基因大小为2 313bp,编码蛋白质的分子式C3425H5606N976O1163S15,是一个不稳定可溶性蛋白质,二级结构以无规卷曲和α-螺旋为主,亚细胞定位主要分布在细胞核,推测其可能在能量代谢和辅因子的生物合成过程中发挥信号转导和转录因子调控的作用;Oct-1基因在小鼠黑色素细胞中表达,其编码的蛋白含有一个保守的POU结构域和一个保守的同源域,参与调控13个黑色素形成相关基因转录表达,在黑色素生成关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子上存在Oct-1转录因子的作用位点,Oct-1蛋白质还可能与Brf2、Pou2af1、Tbp等蛋白相互作用调控毛色基因表达,故可以推测转录因子Oct-1在黑素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用,为研究毛色形成机制提理论依据。
- 杨玉静聂瑞强谢建山范瑞文董常生
- 关键词：黑色素细胞基因克隆生物信息学
- Nkx2-5基因的克隆及其与黑色素细胞黑色素生成相关性的研究被引量：2
- 2016年
- 本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位点在144～196位氨基酸残基处，且其在黑色素生成中的关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子中都有作用位点，同时Nkx2—5蛋白与对神经嵴分化有重要影响的Hand1、Hand2存在相互作用，故可以推测转录因子Nkx2—5在黑色素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用，进而为从分子水平解释动物被毛白化的发病机理提供新的思路。
- 聂瑞强石轶男杨玉静谢建山董常生
- 关键词：黑色素生物信息学
