王燕
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金中华医学会临床医学科研专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-132增强乙酰胆碱对肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用被引量：4
- 2015年
- 目的 观察调控microRNA-132 （miR-132）联合乙酰胆碱（ACh）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用.方法 分别采用FAM荧光标记的mimic/inhibitor阴性对照（NC）、miR-132 mimic/inhibitor、mimic/inhibitor NC转染大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,通过荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测miR-132的表达.转染后细胞给予LPS（1μg/mL）刺激或LPS＋ ACh（10 μmoL/L）处理,采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）浓度.两组间均数比较采用独立样本t检验,以P ＜0.05为差异具有统计学意义.结果 通过在NR8383细胞中转染mimic FAM NC确定50 nmol/L为转染mimic的最佳浓度.与mimic NC组相比,miR-132 mimic组细胞中miR-132的表达上调了（21.54±2.14）倍（P=0.001）.LPS组中结果发现miR-132 mimic上清液中TNF-α（P=0.683）、IL-1β（P=0.770）、IL-6（P=0.872）水平较mimic NC差异均无统计学意义;LPS＋ ACh＋ mimic NC组TNF-α（P=0.008）、IL-1β（P =0.004）、IL-6 （P =0.003）水平与LPS＋mimic NC组相比均下降;LPS＋ ACh＋ miR-132 mimic组TNF-α（P=0.001）、IL-1β （P =0.001）、IL-6 （P =0.001）水平与LPS＋ ACh＋ mimic NC组相比均下降.通过转染inhibitor FAM NC确定100nmol/L为转染inhibitor的最佳浓度.LPS组miR-132 inhibitor上清液中TNF-α（P=0.800）、IL-1β（P =0.449）、IL-6 （P =0.418）水平较inhibitor NC差异均无统计学意义.LPS＋ ACh组结果显示miR-132 inhibitor可逆转ACh介导的TNF-α （P =0.018）、IL-1β （P =0.022）、IL-6 （P=0.032）水平的下降.结论 在体外培养环境,单独给予LPS时过表达miR-132或抑制miR-132活性不影响肺泡巨噬细胞炎症反应,但miR-132可增强ACh对LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的抑制作用.
- 刘芬李勇赵宁李东海江榕曾振国邵强彭菲菲王燕钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱肺泡巨噬细胞炎症反应白细胞介素-1Β白细胞介素-6
- 乙酰胆碱对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的影响被引量：5
- 2015年
- 目的：观察乙酰胆碱（ACh）对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞炎症反应模型大鼠胆碱能抗炎通路的作用，以及胆碱酯酶抑制剂毒扁豆碱（Phy）对ACh抗炎作用的影响。方法体外培养NR8383大鼠肺泡巨噬细胞株并分为空白对照组、LPS组（1 mg/L LPS刺激12 h）、LPS＋ ACh组（LPS刺激前加入终浓度0.01、0.1、1、10、100μmol/L的ACh处理5 min）、 LPS＋Phy组（LPS刺激前加入1 mmol/L的Phy处理5 min）、 LPS＋ACh＋Phy组（LPS刺激前加入1 mmol/L Phy及10μmol/L Ach分别处理5 min）5组。收集各组细胞上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-6）的含量；同时测定乙酰胆碱酯酶（AChE）活性。结果① LPS组细胞上清液中TNF-α（ng/L：605.09±57.13比34.07±8.62）、IL-1β（ng/L：377.09±28.55比32.33±10.62）、IL-6（ng/L：558.04±77.45比42.62±11.21）含量均较空白对照组显著升高（均P＜0.05），证实肺泡巨噬细胞炎症反应模型构建成功。②与LPS组相比，终浓度0.01、0.1和1μmol/L的ACh对 LPS刺激的肺泡巨噬细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量影响较小（均P＞0.05）；而终浓度10μmol/L及100μmol/L的ACh可显著降低细胞上清液中TNF-α（ng/L：451.19±30.67、332.19±32.19比604.96±22.56）、IL-1β（ng/L：261.08±24.78、143.98±28.39比367.06±10.44）、IL-6（ng/L：342.75±54.60、235.48±29.75比562.69±63.34）的含量（均P＜0.05）。③ LPS组细胞上清液中AChE活性较空白对照组显著增加（kU/L：5.21±0.63比3.09±0.10，P＜0.05）；与LPS组相比，给予1 mmol/L胆碱酯酶抑制剂Phy预处理可成功抑制AChE的活性（1.51±0.12比5.21±0.63，P＜0.05）。④与LPS＋ ACh组相比，LPS＋ ACh＋ Phy组可显著降低细胞上清液中TNF-α（ng/L：183.17±35.44比451.19±30.67）、IL-1β（ng/L：91.49±12.27比261.08±24.78）、IL-6（ng/L：108.17±22.82比342.75±54.60）的含量（均P
- 刘芬赵宁李东海曾振国邵强彭菲菲王燕钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱脂多糖肺泡巨噬细胞炎症反应
- MicroRNA-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨microRNA-132(miR-132)通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法:向大鼠肺泡巨噬细胞NR8383中转染miR-132 mimic、mimic阴性对照(NC)、miR-132 inhibitor或inhibitor NC,转染后用脂多糖(LPS)和(或)乙酰胆碱(ACh)处理细胞;采用real-time PCR检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的m RNA表达;采用Western blot检测细胞中AChE、信号转导及转录激活因子3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3),以及细胞浆和细胞核中核因子κB(NF-κB)蛋白的改变;采用AChE活性测试盒检测细胞上清液中AChE活性的改变;采用免疫荧光检测NF-κB的核移位变化。结果:上调或下调miR-132不影响AChE的mRNA相对表达水平;上调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著降低(P<0.05),下调miR-132可使AChE蛋白及活性的水平均显著升高(P<0.05)。当给予LPS+ACh作用时,miR-132 mimic组对NF-κB p65核移位的抑制作用较mimic NC组更强(P<0.05),miR-132 inhibitor组较inhibitor NC组更弱(P<0.05);miR-132 mimic组对STAT3及p-STAT3蛋白的抑制作用较mimic NC组更强(P<0.05)。结论:miR-132通过调控胆碱能通路减轻肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制可能是miR-132靶向作用AChE,抑制AChE对ACh的水解作用,从而增强ACh的抗炎作用,抑制NF-κB及STAT3的活化。
- 刘芬李勇赵宁李东海江榕曾振国邵强彭菲菲王燕钱克俭
- 关键词：乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱
