王世杰
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金云南省科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 将异源蛋白呈递于大肠杆菌外膜囊泡表面的新型疫苗形式
- 本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说，本发明提供了一种大肠杆菌外膜囊泡（OMVs）作为疫苗载体的构建及应用方法。运用基因工程手段，可以利用膜蛋白（如SEQ ID NO1所示）作为牵引将异源蛋白呈递至大肠杆菌OMVs...
- 马雁冰黄惟巍姚宇峰王世杰
- 文献传递
- 鲍曼不动杆菌亚单位疫苗抗原蛋白与应用
- 本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说，本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的亚单位疫苗抗原蛋白与其应用方法。鲍曼不动杆菌外膜蛋白OmpW的基因核酸序列如序列表SEQ？IDNO:1所示，其编码的蛋白即为鲍曼不动杆菌亚单位疫苗...
- 马雁冰黄惟巍姚宇峰王世杰杨旭夏烨孙文佳刘存宝白红妹
- 文献传递
- 大肠埃希菌外膜囊泡作为新型外源质粒递送载体的研究被引量：1
- 2019年
- 目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs与哺乳动物吞噬细胞及非吞噬细胞进行体外孵育,观察不同细胞对OMVs的摄取效率。通过电击转化方式将带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP转入OMVs中,并与RAW264. 7细胞共孵育,观察OMVs携带真核表达质粒进入细胞并表达绿色荧光蛋白的情况。结果密度梯度离心法可有效纯化OMVs,纯化后的OMVs进入不同哺乳动物细胞的效率不同,进入吞噬细胞的效率高于非吞噬细胞,经电击转化后,质粒DNA可被导入OMVs中,并随吞噬细胞摄取及表达。结论约5 300 bp的真核表达质粒可用电击方式导入OMVs中,并通过OMVs介导该质粒在吞噬细胞中表达,提示OMVs具有作为新型质粒DNA递送载体的潜力。
- 舒聪妍王世杰高福兰黄惟巍马雁冰
- 关键词：质粒递送系统DNA疫苗
- 将异源蛋白呈递于大肠杆菌外膜囊泡表面的新型疫苗形式
- 本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说，本发明提供了一种大肠杆菌外膜囊泡（OMVs）作为疫苗载体的构建及应用方法。运用基因工程手段，可以利用膜蛋白（如SEQ ID NO1所示）作为牵引将异源蛋白呈递至大肠杆菌OMVs...
- 马雁冰黄惟巍姚宇峰王世杰
- 呈现埃博拉病毒包膜糖蛋白抗原表位重组病毒样颗粒的构建被引量：2
- 2017年
- 目的构建呈现埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原表位的病毒样颗粒(viruslike particles,VLPs)。方法通过EBOV GP抗原性预测,并结合其功能结构域分析获得潜在的B细胞表位,经基因重组将该抗原表位插入至乙肝核心抗原(HBcAg)的优势表位区域,SDS-PAGE法分析重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的表达。重组菌体破碎上清经硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心纯化后,通过电镜观察VLPs形态。将VLPs与Alum佐剂按1∶1的比例混合,经背部皮下免疫小鼠。ELISA及Western blot法检测小鼠血清的特异性。结果重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的相对分子质量约19 300,纯化后蛋白浓度为1.244 mg/ml,镜下可见其以VLPs形式存在。VLPs免疫小鼠血清可与GP发生特异性免疫反应。结论成功构建了呈现EBOV GP抗原表位的VLPs,其可有效诱导小鼠产生特异性免疫应答。本实验为EBOV基因重组疫苗的研究及特异性抗体的制备奠定了基础。
- 黎奎孙鹏艳姚宇峰刘存宝黄惟巍王世杰褚晓杰白红妹杨旭孙文佳马雁冰
- 关键词：埃博拉病毒糖蛋白抗原表位乙肝核心抗原病毒样颗粒
- 利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及TEF-1启动子指导下的HPV16_L1蛋白表达被引量：3
- 2015年
- 目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(TEF-1)启动子指导下HPV16_L1蛋白表达的影响。方法:利用1.5L发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力学,并以Western blot动态分析HPV16_L1蛋白的表达水平。结果:以甘油作为碳源,菌体细胞湿重可达到510g/L(OD600为189.4),HPV16_L1的表达在72h之前保持高水平;在甲醇和葡萄糖中菌体细胞湿重都可达到220g/L左右(OD600分别为75.3和77.3),甲醇利用下HPV L1蛋白在144h后仍保持较高水平表达,葡萄糖中60h HPV L1表达开始显著下降;在山梨醇作为碳源情况下菌体未能在发酵罐中获得高密度生长;总体上,甘油作为碳源在72h左右可获得最高的目的蛋白收获总量。结论:为实现毕赤酵母高密度生长与异源基因在TEF-1启动子指导下高效表达,以及HPV L1蛋白的简易、有效制备提供了基础。
- 夏烨黄惟巍杨旭孙鹏艳姚月婷王世杰刘存宝孙文佳白红妹姚宇峰马雁冰
- 关键词：碳源毕赤酵母高密度发酵L1蛋白
- 新型抗原递送载体:细胞溶素A融合目的蛋白整合的重组外膜囊泡的构建与鉴定被引量：1
- 2016年
- 细菌外膜囊泡(OMVs)是革兰氏阴性菌以出芽方式分泌的一种蛋白脂质体,可通过基因工程改造成为外源大分子抗原蛋白的载体。成孔蛋白细胞溶素A(Cly A)可作为引导序列将C-端融合的外源蛋白质定位在菌体及其所分泌的OMVs外膜上。利用Cly A融合蛋白重组的OMVs可介导抗原呈递,制备疫苗。为验证这一假说,本研究拟以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为目的蛋白,采用重组技术,构建Cly A-EGFP融合蛋白表达载体,转化E.coli DH5α,获得Cly A-EGFP融合蛋白整合的重组细菌OMVs,探索Cly A/EGFP融合蛋白整合的OMVs作为一种制备新型疫苗载体的可行性。重组OMVs分别经蛋白酶K和/或EDTA处理后,蛋白质印迹分析显示,Cly A-EGFP融合蛋白有效地整合在重组的OMVs中,且EGFP呈现于表面。重组OMVs与小鼠巨噬细胞Raw264.7共同孵育后,以EGFP作为标记,荧光显微镜观察显示,OMVs可被巨噬细胞吞噬、摄取。进而,荧光显微镜及流式细胞术分析证明,重组的OMVs可被骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)有效摄取,并促进BMDCs表达CD86和CD80,说明重组的OMVs可激活树突状细胞,促进其成熟。本研究结果提示,利用Cly A融合特异目的蛋白整合的重组OMVs,可作为外源蛋白质的载体,介导抗原呈递作用,在设计与制备疫苗中具有潜在的应用价值。
- 王世杰黄惟巍舒聪妍黎奎夏烨李扬李慧孙鹏艳杨旭白红妹孙文佳刘存宝褚晓杰冯雪军马雁冰
- 关键词：疫苗抗原递呈细胞
