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利用Tn5转座子介导突变提高大肠杆菌丁醇生产水平被引量：1: 2015年; 目前,对于构建高产丁醇大肠杆菌工程菌株的工作,主要是对丁醇通路和相关途径的基因进行理性改造。为进一步提升菌株的丁醇生产能力,需要发掘基因组上可影响丁醇生产能力的基因,但这很难通过已有认识或计算机模型进行预测。本工作以一株实验室前期构建的产丁醇大肠杆菌工程菌株为研究对象,利用Tn5转座子构建了一个含有1 196个菌株的突变文库。丙酮酸是丁醇的前体,并且在发酵终产物中,副产物丙酮酸的含量与丁醇的含量呈反相关,因此,可以利用丙酮酸的含量来间接反映丁醇的含量,而丙酮酸可用二硝基苯肼显色法进行快速测定,基于此,建立了96孔板——酶标仪快速筛选方法。利用该方法成功筛选到了比对照菌株丁醇产量提高了29%、49%、56%的3个突变体菌株。利用反向PCR及测序的方法,确定了其转座子插入位置分别为:pyk A、tdk、cad C基因。这些基因可以作为进一步提高菌株丁醇产量的靶点,同时这种利用Tn5转座子筛选基因靶标的策略也为构建其他微生物细胞工厂提供了新思路。; 林兆董红军李寅; 关键词：大肠杆菌丁醇基因组

一种构建高产丁醇菌株的方法与应用: 本发明公开了一种构建高产丁醇菌株的方法与应用。本发明提供一种构建重组菌的方法，为抑制或沉默生产丁醇的出发菌的基因组上的丙酮酸激酶pykA基因表达，得到重组菌。实验证明本发明的工程菌发酵产生的丙酮酸产量明显下降，丁醇产量明...; 董红军赵春华林兆张延平李寅; 文献传递

一种构建高产丁醇菌株的方法与应用: 本发明公开了一种构建高产丁醇菌株的方法与应用。本发明提供一种构建重组菌的方法，为抑制或沉默生产丁醇的出发菌的基因组上的丙酮酸激酶pykA基因表达，得到重组菌。实验证明本发明的工程菌发酵产生的丙酮酸产量明显下降，丁醇产量明...; 董红军赵春华林兆张延平李寅

高产丁醇的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用: 本发明公开了高产丁醇的大肠杆菌基因工程菌及其构建方法与应用。本发明提供的重组菌，包括如下步骤：1)抑制生产丁醇的出发菌基因组上pykA基因表达和/或活性，且提高所述出发菌基因组上fdh基因的表达和/或活性，得到目的菌A；...; 董红军赵春华张天瑞朱华伟林兆张延平李寅; 文献传递

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林兆