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吴琼: 作品数：10 被引量：83H指数：5; 供职机构：江西农业大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科技计划项目江西省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及药敏试验被引量：8: 2016年; 2015年3月,江西省上饶市万年县某规模化养猪场部分肥猪出现体温升高、呼吸困难、咳嗽等症状,部分发病猪出现死亡,病死率为35%,疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌感染。用TSA及鲜血培养基进行了胸膜肺炎放线杆菌的分离和纯化,经培养特性、染色镜检、生化试验及16SrDNA PCR鉴定等证明了分离菌为生物Ⅰ型胸膜肺炎放线杆菌。毒力基因检测表明该菌具有ApxⅣ毒力基因。药敏试验结果显示,分离菌对头孢哌酮、诺氟沙星高度敏感,对青霉素G耐药。; 周信荣宋德平彭棋陈燕君李安琪张帆帆吴琼唐玉新; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌药敏试验

新现猪圆环病毒3型及圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立与应用被引量：8: 2018年; 根据GenBank数据库中的新现猪圆环病毒3型(PCV-3)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的OFR2基因设计了2对扩增PCV-3和PCV-2的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV-3和PCV-2的双重PCR方法。敏感性和特异性结果显示,该方法对PCV-3和PCV-2的最低核酸检测量均为1.0×103拷贝/μL,而对猪伪狂犬病毒(PRV)、猪delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(CSFV)的扩增结果均为阴性。应用所建立的双重PCR检测了临床上256份样品,结果表明,PCV-3和PCV-2感染的阳性率分别为0.78%(2/256)和86.3%(221/256),仅有1份样品为PCV-3和PCV-2混合感染,混合感染阳性率为0.39%(2/256)。试验结果表明,本研究建立的PCR方法敏感、特异,适于临床样品检测,为猪群中PCV-3和PCV-2的临床快速诊断和流行病学调查提供了一种工具。; 张帆帆李龙显叶昱叶昱郭楠楠李凯李凯郭楠楠何后军张敏张敏; 关键词：猪圆环病毒2型双重PCR

2016-2017年江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查及ORF5基因变异分析被引量：16: 2018年; 为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病料,采用RT-PCR方法对所有病料进行检测。结果发现,其中321份病料为PRRSV阳性,阳性率为70.86%,各地区的阳性率在19.15%~84.85%之间。挑选14份阳性样品测序后,经ORF5基因序列分析,江西地区各PRRSV毒株ORF5基因的核苷酸同源性为83%~100%,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性在59.9%~98.5%之间。基于ORF5基因的进化树分析表明,14个测序毒株均为美洲型毒株,其中有4株为基因亚型Ⅰ,即高致病性毒株(HP-PRRSV);3株为基因亚型Ⅱ,即经典毒株;3株为基因亚型Ⅲ,即NADC30-like毒株;4株为新出现的基因亚型Ⅳ。氨基酸序列比对分析表明,基因亚型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ毒株ORF5基因编码的GP5蛋白氨基酸在3个表位及2个重要的抗原相关区域存在较大变异,其中以NADC30毒株为代表的基因亚型Ⅲ毒株和以GD1404毒株为代表的基因亚型Ⅳ毒株均表现出独有的氨基酸变异,这些变异可能会影响GP5蛋白的免疫原性。本次调查结果表明,2016-2017年江西地区PRRSV流行出现了新形势,美洲型毒株出现了多基因亚型共同存在的局面,以高致病性毒株(HP-PRRSV)为主,NADC30-like毒株和新基因亚型等新毒株的比例较高,同时还存在经典毒株;持续实时监测PRRSV的毒株流行和变异情况,可为临床诊断、药物和疫苗开发及PRRS的科学防控提供依据。; 袁为锋张帆帆李龙显李昊张付华刘小萍叶昱叶昱黄冬艳李凯吴琼黄冬艳唐玉新; 关键词：ORF

猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1: 2016年; 为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况,本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RDRP)基因序列设计了一套巢式RT-PCR引物,用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带,经克隆、测序后获得的序列与GenB ank数据库序列比对,证明所扩增的序列属于猪诺如病毒,表明本研究成功建立了猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法。该检测方法具有高特异性和敏感性,应用该方法检测某猪场健康育肥猪粪便样品,阳性率为54.5%。通过RDRP基因进行核苷酸同源比对发现本文获得的猪诺如病毒Wuning 1株属于GII群诺如病毒,与美国猪诺如病毒毒株OH-QW101/03/US、中国猪诺如病毒毒株Norovirus pig/GII/Ch6/China/2009核苷酸序列同源性最近。值得注意的是猪诺如病毒Wuning1毒株与武汉人诺如病毒毒株E2120/CHN/2010核苷酸同源性高达77.1%,说明猪诺如病毒Wuning 1毒株与武汉人诺如病毒基因组上亲缘性较近。本研究成功建立了一种检测猪诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并应用于临床猪粪便样品的检测,为猪诺如病毒的诊断与监测提供了可供借鉴的方法、为猪诺如病毒的进化、分子病毒学及与人诺如病毒关系的深入研究提供依据。; 陈燕君唐玉新周信荣宋德平黄瑫彭棋李安琪张帆帆张田生叶昱吴琼; 关键词：巢式RT-PCR 同源性分析

新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用被引量：35: 2016年; 【目的】猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是近年来新发现的可引起猪只,特别是新生仔猪腹泻的冠状病毒,其引发的腹泻具有较高的发病率和死亡率,是造成新生仔猪死亡的重要原因之一。试验拟建立新现PDCoV RT-PCR检测方法,并调查当前江西腹泻猪群中PDCoV的感染情况。【方法】通过对Gen Bank数据库中PDCoV全基因组序列的比对分析,找出保守序列,用Primer 3.0在线软件设计1对扩增PDCoV核衣壳(N)蛋白基因片段的特异性引物,基于该引物建立PDCoV RT-PCR检测方法;用建立的方法检测腹泻猪粪便及肠道样品,挑选阳性扩增产物进行克隆、测序;用本试验获得的PDCoV序列与其他国家或地区的PDCoV序列以及猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)共同构建进化树,分析PDCoV各毒株及其与PEDV和TGEV之间的进化关系;以PEDV、TGEV、猪库布病毒(PKoV)、猪星状病毒(PAstV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪瘟病毒(CSFV)RNA为模板验证引物的特异性;构建PDCoV核衣壳蛋白基因片段重组质粒,并以系列稀释的重组质粒为模板确定所建立的PDCoV RT-PCR方法的敏感性;应用建立的RT-PCR方法调查249份2012—2015年江西省猪群腹泻样品中PDCoV的存在情况,随机抽取一定数量的RT-PCR阳性扩增产物进行克隆、测序进一步验证反应的特异性。【结果】1以腹泻猪粪便样品RNA为模板,应用所设计的特异性引物扩增出了329 bp的单一条带,与预期目的片段大小一致,扩增产物经克隆后测序,将获得的序列与NCBI Gen Bank数据库序列进行比对,比对结果表明试验所获得的序列与数据库中PDCoV序列的同源性高达99.1%,证明所扩增的序列属于PDCoV;2将8条本试验获得的PDCoV N基因片段序列与18株其他国家或地区的PDCoV毒株以及PEDV、TGEV的相应N基因片段序列构建进化树,结果表明26条PDCo V序列属于同一个分支,而PEDV和TGEV则分别属�; 张帆帆宋德平周信荣黄冬艳李安琪彭棋陈燕君吴琼何后军唐玉新; 关键词：RT-PCR 腹泻进化树

猪流行性腹泻病毒感染调控干扰素反应的研究进展被引量：3: 2020年; 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种烈性传染的肠道冠状病毒,主要导致仔猪腹泻、脱水、高发病率和高死亡率。全球范围暴发的高致病性PEDV变异毒株给养猪业带来巨大经济损失。PEDV调控宿主天然免疫,对其成功感染宿主和复制增殖具有重要影响。本文主要阐述PEDV感染时,干扰素(Interferon,IFN)在猪肠道细胞发挥的功能,并简单介绍PEDV病毒及其编码的蛋白调控IFN-α/β和IFN-λ的分子机制,从而阐明PEDV是如何逃逸宿主天然免疫反应。; 丁珍吴琼丘建龙黄冬艳宋德平叶昱唐玉新; 关键词：肠道天然免疫干扰素免疫逃逸

三种猪的肠道腹泻冠状病毒三重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2020年; 为了同时检测引起猪只腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)这三种主要肠道冠状病毒,试验设计3对特异性引物,建立PEDV、PDCoV和SADS-CoV的三重RT-PCR方法,同时进行特异性、敏感性、重复性试验,并检测临床样品对方法进行验证。结果表明:采用建立的三重RT-PCR方法对PEDV、PDCoV和SADS-CoV进行扩增,分别扩增出大小约为486 bp、329 bp和628 bp的特异性片段;该方法对猪瘟病毒、猪传染性肠胃炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不能扩增出任何片段,特异性好;对PDCoV、PEDV和SADS-CoV的最低检测量分别为1×10^6,1×10^3,1×10^4 copies/μL,具有较好的敏感性;在196份临床样品中,PEDV的阳性检出率为13.27%,PDCoV为12.24%,SADS-CoV为0,同时多重RT-PCR与单项RT-PCR检测方法的符合率均为100%。说明建立的三重RT-PCR方法能够同时特异敏感、高效廉价检测出猪群中PDCoV、PEDV及SADS-CoV这三种肠道冠状病毒,具有快速、便捷和经济的特性,可用于临床大规模流行病学调查和诊断。; 曾秀秀宋德平张帆帆张帆帆叶昱李凯吴琼叶昱于振兴丁珍陈君吴琼曾秀何后军唐玉新; 关键词：猪流行性腹泻病毒腹泻

非洲猪瘟病毒p72蛋白的原核表达和多克隆抗体制备被引量：3: 2021年; 【目的】非洲猪瘟(african swine fever,ASF)是一种以猪急性发病、高死亡率为典型特征的病毒病,其病原非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)在中国的暴发给中国养猪业造成重大损失。p72蛋白是ASFV的主要衣壳蛋白,能够有效诱导机体产生特异性抗体,常被利用于检测试剂盒的备成。【方法】构建了p72全长(pET-28a-ASFV-p72)及1-171aa截短突变体(pET-28a-ASFV-p72-(1-171))原核表达质粒,通过E.coli原核表达系统表达并纯化了p72全长及1-171aa融合蛋白。该2种蛋白经过4次免疫日本大耳白Balb/C兔后,获得效价皆为大于1∶819200的多抗血清。【结果】通过间接免疫荧光实验和Western blot检测2种多抗均能与真核表达的p72蛋白发生特异性反应。【结论】制备的针对p72多克隆抗体为后续诊断试剂盒的研发提供依据。; 陈金凤乐伟何永吴丽琴贾宝玉邓小淇胡睿铭黄冬艳宋德平邬向东吴琼唐玉新丁珍; 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达多克隆抗体

七彩山鸡致病性阴沟肠杆菌的分离鉴定、毒力和遗传进化分析被引量：4: 2018年; 为了确诊一起大规模七彩山鸡发病、死亡的原因,试验采用细菌分离鉴定、序列分析、细菌生长曲线绘制、药敏试验和半数致死量测定等方法对致病原进行研究。结果表明：从发病鸡肺脏中分离出一株致病菌,PCR扩增该菌的16S r DNA序列,与GenBank中的序列进行BLAST分析,分离菌与阴沟肠杆菌的同源性〉99.9%,证实该分离菌为阴沟肠杆菌;细菌生长曲线的线性回归结果为y=81.677x-1.612 3;该分离菌对头孢噻肟、氧氟沙星等药物高度敏感,对阿莫西林、头孢拉定、青霉素等药物耐药;该分离菌对试验小鼠的半数致死量为3.85×10-9cfu/m L。; 李昊叶昱宋德平宋德平李安琪周信荣吴琼李安琪; 关键词：阴沟肠杆菌遗传进化分析药敏试验半数致死量

猪毛尾线虫的检测及其ITS序列分析被引量：2: 2018年; 毛尾线虫俗称鞭虫,为肠道常见寄生线虫,可感染人和多种动物。2015年11月,江西某猪场育肥猪出现腹泻症状,粪便带黏液和血液,部分病猪死亡;剖检发现猪肠道内充满了线状虫体;依据发病猪症状和虫体、虫卵的分析,初步确定该病为猪毛尾线虫病。采用通用引物扩增分离线虫的基因组内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS),结果显示分离虫体的ITS序列与猪毛尾线虫ITS序列的核苷酸同源性高达99.8%,从基因水平进一步证实了该病原为猪毛尾线虫;系统进化分析表明其与18条来自不同地区毛尾线虫的ITS序列相似性均>93.5%,其中,与湖南益阳地区的猪毛尾线虫(AM993005)亲缘关系最近。试验结果为建立猪毛尾线虫的分子生物学诊断方法奠定了基础。; 郭楠楠张帆帆张帆帆张敏唐玉新吴琼张敏宋德平; 关键词：聚合酶链反应进化分析

吴琼

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