陈建斌
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：湖南省农业科学院更多>>
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- 番茄斑萎病毒侵染的西花蓟马酵母双杂交cDNA文库的构建和分析
- 2022年
- 【目的】探明番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV)和介体西花蓟马(Frankliniella occidentalis)之间的分子互作关系,探索介体因子如何参与病毒侵染过程,以期为解析西花蓟马蛋白调控介体传毒机理奠定基础。【方法】通过若虫期饲毒获得高带毒西花蓟马群体,借助SMART技术构建TSWV侵染的西花蓟马酵母双杂交三框cDNA文库。【结果】3种读码框初级cDNA文库的库容量分别为3.0×10^(6)、2.0×10^(6)和2.0×10^(6) cfu,文库实际扩增基数大于1.5×10^(6) cfu(3种读码框均大于5×10^(5))。扩增文库平均插入片段主要分布在0.5~3.0 kb。对文库随机挑选16个克隆,测序后与GenBank数据库比对,结果显示各插入片段具有同源序列。【结论】构建的cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于后续筛选西花蓟马与TSWV互作的蛋白。
- 叶倩卢冰心魏艳陈建斌刘勇张松柏章松柏郑立敏
- 关键词：番茄斑萎病毒西花蓟马
- 本氏烟中与番茄斑萎病毒N蛋白互作的寄主因子的筛选
- 2021年
- 【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是植物多分体负义链RNA病毒的代表性成员。TSWV的N蛋白在病毒感染的寄主植物内表达量高,可能调控病毒对寄主的感病,探究N蛋白通过影响哪些寄主蛋白的表达来完成病毒的侵染,以期为深入解析寄主蛋白调控病毒的分子机制提供理论基础,为后续有效的防控TSWV提供新的思路。【方法】以TSWV N蛋白作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交(Yeast two-hybrid,Y2H)的方法筛选本氏烟内与TSWV N相互作用的寄主蛋白。【结果】共筛选获得15种与TSWV N相互作用的寄主蛋白。【结论】这些介体因子主要参与色素的生物合成、类囊体膜的组装、植物防御反应和核糖体生物发生的过程,调节脂质代谢和细胞功能,可能是翻译调控的辅助蛋白,在植物发育和对非生物胁迫的反应中发挥着重要作用。
- 苗淑月高晓晓郑立敏陈建斌赵星月程菊娥陈莎章松柏刘勇
- 关键词：N蛋白酵母双杂交
- 番茄斑萎病毒及其与传播介体西花蓟马互作的研究进展被引量：9
- 2017年
- 番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是一种世界性危害农业生产的植物病毒,主要通过西花蓟马(Frankliniella occidentalis)以持久增殖型方式进行传播,可对番茄、生菜、辣椒等蔬菜及花卉、烟草等经济作物生产造成严重损失。从番茄斑萎病毒的特征、传播介体、传播途径、病毒与介体互作对番茄斑萎病毒传播的影响等方面进行归纳总结,旨为番茄斑萎病的预防和控制提供参考。
- 陈建斌刘勇郑立敏张松柏杨春晓张德咏
- 关键词：番茄斑萎病毒西花蓟马
- 云南省马铃薯番茄斑萎病毒N蛋白自身互作功能域鉴定
- 2023年
- 为了探究番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N在马铃薯上的致病性,采用酵母双杂交和双分子荧光互补技术研究了病毒N蛋白的自身互作及其关键功能域。通过RT-PCR扩增了N基因全长及其截断突变体,并构建了酵母表达载体对其自身互作的功能区域进行鉴定。结果显示,在酵母细胞中N蛋白自身互作的关键功能域位于186位至193位氨基酸之间,且N蛋白在植物体内的互作主要发生在细胞核和细胞质中。研究结果可为番茄斑萎病毒的防控提供理论依据。
- 苗淑月叶倩张宇赵星月王鑫卢冰心史晓斌张志代郑立敏陈建斌
- 关键词：马铃薯番茄斑萎病毒N蛋白
- 利用酵母双杂交技术筛选鉴定与番茄环纹斑点病毒NSs蛋白互作的西花蓟马蛋白被引量：1
- 2020年
- 【目的】筛选鉴定西花蓟马Franiklinella ocicdentalis体内与番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus,TZSV)NSs蛋白互作的介体因子。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白;进行序列分析鉴定后,将捕获的蛋白与NSs基因回转到酵母细胞,利用营养缺陷型培养基鉴定蛋白互作情况。再利用GST Pull-down技术验证TZSV NSs与鉴定出的西花蓟马蛋白的体外互作关系。【结果】构建了TZSV NSs的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-NSs,确定了诱饵质粒对酵母AH109细胞无毒性,并且无自激活活性。序列分析发现与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白为类电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion-selective channel-like,VDAC)。酵母回转实验显示TZSV NSs与西花蓟马VDAC在酵母细胞内存在特异性互作。GST Pull-down结果表明TZSV NSs与西花蓟马VDAC在体外存在相互作用。【结论】通过酵母双杂交和GST Pull-down技术,分别在酵母细胞内和体外证实了TZSV NSs和西花蓟马VDAC存在特异性互作。这些结果有助于揭示西花蓟马VDAC蛋白调控西花蓟马持久传毒的机制,为虫传病毒病的防治提供理论基础。
- 赵星月陈建斌王曙光张晓林张晓林魏辉穆野魏辉赵立华陈永对郑雪陈勇
- 关键词：西花蓟马酵母双杂交
