雷文波
- 作品数：13 被引量：10H指数：2
- 供职机构：南华大学医学院病原生物学研究所更多>>
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- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响被引量：5
- 2017年
- 目的探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬的影响,为进一步阐明Ct致病机制提供实验依据。方法 PCR扩增Ct pORF5质粒蛋白基因,克隆入PLenO-DCE慢病毒质粒,构建慢病毒重组表达载体。慢病毒重组表达载体经双酶切及测序鉴定后与辅助质粒共转染293T细胞,制备慢病毒。收集慢病毒,再感染HeLa细胞,流式细胞仪分选获得pORF5基因稳定转染细胞株(PLenO-DCE/pORF5-HeLa)。实验同时建立对照细胞株(PLenO-DCE-HeLa)。血清饥饿处理两组细胞24h,Real-time PCR和Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Becin1的蛋白和mRNA表达水平,计算LC3-II/LC3I比率;采用间接免疫荧光检测自噬荧光斑点。结果 PLenO-DCE/pORF5-HeLa和PLenO-DCE-HeLa细胞饥饿处理后均出现LC3红色荧光斑点,斑点数分别为(97.6±12.1)个/细胞和(34.0±2.6)个/细胞,差异有统计学意义(t=45.36;P<0.05);饥饿处理后PLenO-DCE-HeLa和PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1的mRNA表达水平均显著高于未处理组,其中PLenO-DCE/pORF5-HeLa细胞中LC3、Beclin1mRNA的表达水平较未处理组增加3.10倍(t=95.25;P<0.01)和0.85倍(t=16.56;P<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞分别增加1.95倍(t=79.12;P<0.01)和1.57倍(t=23.95;P<0.05);PLenO-DCE/pORF5-HeLa经饥饿处理24h后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin1蛋白较未处理组分别增加52.17%和76.00%(t值分别是15.13,57.24;P均<0.05),较PLenO-DCE-HeLa细胞组分别增加1.05倍(t=35.21;P<0.05)和4.34倍(t=112.23;P<0.01)。结论 pORF5质粒蛋白可诱导HeLa细胞自噬,可能在Ct致病过程中发挥重要作用。
- 杨晓玉雷文波粟盛梅陈超群李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞自噬BECLIN1
- 沙眼衣原体抑制宿主细胞凋亡机制的研究进展被引量：3
- 2016年
- 沙眼衣原体是一类具有独特发育周期的革兰阴性病原体,能够引起人类多种疾病。沙眼衣原体感染的宿主细胞能够抵抗多种凋亡刺激,并且通过抑制宿主细胞凋亡从而完成自身的复制与发育。其抗凋亡机制可能与其参与调节宿主细胞MAPK信号途径、抑制线粒体细胞色素c的释放、上调凋亡抑制蛋白IAPs和降解促凋亡蛋白等多种机制有关。最新研究发现沙眼衣原体可以通过HDM2/MDM2与p53相互作用,促进p53蛋白水解,抑制细胞凋亡,从而导致持续性感染。
- 雷文波何战胜李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞凋亡丝裂原活化蛋白激酶凋亡抑制因子
- 沙眼衣原体pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制细胞凋亡被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5蛋白对细胞凋亡的影响,并进一步分析其分子机制,为阐明Ct致病机制提供实验依据。方法:p GEX-6p/pORF5重组质粒转化XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B纯化及蛋白酶切除GST标签后得到pORF5蛋白。用不同浓度的pORF5蛋白刺激HeLa细胞,Western blot检测不同时间Bax和Bcl-2的表达水平以及PI3K/Akt磷酸化水平,Hoechst 33342及流式细胞技术分析细胞凋亡情况;HeLa细胞经PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理1 h后,再用pORF5蛋白刺激24 h,测定细胞凋亡率,并进一步分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平及PI3K/Akt磷酸化水平。结果:凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化与pORF5蛋白浓度呈现一定的浓度和时间依赖性,当pORF5蛋白浓度达10μg/ml时,Bax表达下调,Bcl-2的表达上调,当升高至15μg/ml时,Bax和Bcl-2的表达量变化最明显;15μg/ml的pORF5蛋白刺激HeLa细胞24 h,Bax和Bcl-2表达变化最明显;流式细胞检测结果显示:pORF5蛋白刺激组较TNF-α处理组和未处理组细胞凋亡率分别降低了27.3%(P<0.01)和8.4%(P<0.05);Akt在pORF5蛋白刺激15 min后发生磷酸化,30 min后磷酸化水平达到峰值,用PI3K抑制剂LY294002预处理Hela细胞后,发现Akt的磷酸化显著减少,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2表达明显下调;LY294002处理组细胞凋亡率相比于对照组增加了13.0%(P<0.01)。结论:pORF5蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路调节Bcl-2和Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡。
- 卜继常邹燕聂倩雷文波周洲陆春雪陈超群李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体细胞凋亡PI3K/AKT信号通路
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白免疫优势片段的筛选与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的:鉴定沙眼衣原体pORF5质粒蛋白的免疫原性,并进一步筛选和确定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。方法:以沙眼衣原体D血清型DNA为模板,设计pORF5基因全长和9个不同片段特异引物进行PCR扩增,PCR产物经Bam HⅠ、NotⅠ双酶切后插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6p中,构建pORF5质粒蛋白不同长度片段的原核表达重组体,重组体经PCR和测序鉴定后,转化XL1 Blue大肠杆菌表达10种不同长度的GST融合蛋白;ELISA方法检测pORF5质粒蛋白的免疫原性,Western blot鉴定pORF5质粒蛋白的免疫反应性;ELISA测定10个不同片段与沙眼衣原体生殖道感染患者血清、鼠免疫血清以及抗pORF5单克隆抗体的免疫反应性,鉴定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。结果:pORF5质粒蛋白免疫原性强,能刺激机体产生高效价抗体;破坏pORF5质粒蛋白天然空间结构,其免疫反应性基本消失;在ELISA反应中,N端缺失66氨基酸的F6片段的免疫反应强度与pORF5全长基本相似,F2与F3出现较弱的免疫反应,其余片段免疫反应消失。结论:pORF5质粒蛋白为构象依赖性免疫优势抗原,其免疫优势表位和构象表位位于C端,本研究为进一步探讨pORF5质粒蛋白的生物学功能和疫苗的研制提供实验依据。
- 何战胜邹燕粟胜梅雷文波李忠玉
- 关键词：沙眼衣原体免疫原性
- 沙眼衣原体质粒蛋白pORF5通过上调HMGB1诱导线粒体自噬抑制细胞凋亡
- 李忠玉雷文波卜继常粟盛梅周洲
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞蛋白表达谱的影响
- 目的:分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白p ORF5基因转染He La细胞后所引起的蛋白表达谱的变化,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据。方法:构建p ORF5基因慢病毒表达载体...
- 李忠玉戴文婷邹燕雷文波粟盛梅何战胜
- 关键词：沙眼衣原体差异蛋白
- 文献传递
- 沙眼衣原体质粒蛋白pORF5相互作用宿主蛋白的筛选及鉴定
- 目的 筛选并鉴定与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5相互作用的宿主蛋白,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据.方法 构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T...
- 戴文婷粟盛梅龚思璐邹燕雷文波李忠玉
- 沙眼衣原体质粒蛋白pORF5相互作用宿主蛋白的筛选及鉴定
- 目的筛选并鉴定与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5相互作用的宿主蛋白,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据。方法构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅助质粒共转染293T细胞...
- 戴文婷粟盛梅龚思璐邹燕雷文波李忠玉
- 文献传递
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞蛋白表达谱的影响
- 目的：分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5基因转染HeLa细胞后所引起的蛋白表达谱的变化,为深入研究Ct的致病机制提供实验依据。方法：构建pORF5基因慢病毒表达载体,与辅...
- 李忠玉戴文婷邹燕雷文波粟盛梅何战胜
- 关键词：沙眼衣原体差异蛋白
- 沙眼衣原体pORF5质粒蛋白对HeLa细胞自噬的影响
- 目的探讨沙眼衣原体质粒蛋白pORF5对HeLa细胞自噬和凋亡的影响,为进一步阐明沙眼衣原体的致病机制提供实验依据。方法 PCR扩增沙眼衣原体pORF5质粒蛋白基因,克隆入DCE慢病毒质粒构建慢病组重组表达载体,慢病毒重组...
- 杨晓玉粟盛梅龚思璐邹燕雷文波周洲李忠玉
- 文献传递
