张春雨
- 作品数：39 被引量：38H指数：6
- 供职机构：吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金吉林省科技厅重点项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 马铃薯Y病毒瞬时ELISA检测试剂盒的研制
- 马铃薯病毒检测方法主要有生物学检测法、电子显微镜检测法、分子生物学检测法和血清学检测法。ELISA属于血清学检测方法,具有高通量、不依赖特定仪器设备,稳定性好等优点,但操作繁琐耗时较长。为了建立马铃薯Y病毒(PVY)快速...
- 梁雨欣李小宇张春雨侯吉超王永志
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体抗原表位
- 文献传递
- 吉林、黑龙江毛葱病毒病调查被引量：2
- 2021年
- 本研究为明确吉林和黑龙江省毛葱病毒病发生率,从两省5个地区共采集255份毛葱样品。根据毛葱4种主要病毒基因组序列设计特异性引物,对胡葱黄条病毒Shallot yellow stripe virus(SYSV)和青葱X病毒Shallot virus X(SVX)、洋葱黄矮病毒Onion yellow dwarf virus(OYDV)和葱潜隐病毒Shallot latent virus(SLV)进行双重RT-PCR检测。结果表明,229份样品检出病毒,带毒率为89.8%,SLV的检出率最高,达87.06%,OYDV次之,为36.86%,SYSV检出率偏低,为0.78%;同时存在病毒复合侵染,其中双病毒复合侵染为SLV和OYDV,检出率为33.3%;三病毒复合侵染为SYSV、OYDV和SLV,检出率为0.78%,未发现4种病毒复合侵染。本研究为吉林和黑龙江种植区毛葱病毒病防治提供了参考依据。
- 刘建青王永志周琦黄淑敏梁雨欣张春雨魏健程兆伟李小宇
- 关键词：毛葱病毒病双重RT-PCR
- 百合斑驳病毒靖宇分离物全基因组序列测定与进化分析
- 2023年
- 以采自吉林省白山市靖宇县的野生百合感病叶片为试材,采用小RNA深度测序法检测到1株百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV),采用分段克隆方法,对LMoV靖宇分离物(LMoV-JY)的全基因组进行测定并分析,以期对吉林省百合病毒病的检测和防控提供参考依据。结果表明:LMoV-JY基因组大小为9648个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号MT795719),该核苷酸序列在第154~9444位存在1个大的开放阅读框(ORF),编码1个多聚蛋白(分子量351.46kD)。LMoV-JY与GenBank中登录的其他LMoV分离物的全基因组核苷酸序列比较,其一致性为82.82%~97.85%,在氨基酸水平上的一致性为92.96%~98.64%,其中与百合斑驳病毒大连分离物LMoV-DL(HM222521)的一致性在该2种水平上均为最高。对比LMoV-JY外壳蛋白与其他54个分离物的氨基酸序列,发现可将LMoV分离物分为2个类群。
- 张春雨李小宇王晨黄瑞贤黄淑敏王永志
- 关键词：百合斑驳病毒基因组
- 基于全基因序列的中国北方3省(区)马铃薯Y病毒遗传多样性分析
- 2020年
- 本研究以马铃薯Y病毒(PVY)全基因组为基础,分析吉林、黑龙江和内蒙古3省(区)PVY群体遗传多样性和群体分化,并评估突变、重组、选择等遗传力所起的作用。根据已报道的PVY全基因序列保守区设计4对引物,采用片段重叠法对来自内蒙古和吉林的24个PVY分离物全基因序列进行测定,并联合NCBI中已登录的9个黑龙江分离物全基因组序列进行遗传多样性参数评估、群体分化检验和分子变异等分析。结果显示,我国北方3省(区)PVY群体遗传多样性高,其中内蒙古和黑龙江PVY群体遗传多样性高于吉林群体,并且3个群体之间呈现一定程度的遗传分化。分子变异分析发现在PVY基因组中存在1786个变异位点,表明我国北方3省(区)PVY群体变异程度较高,并且这种高变异度有85.54%来自各个马铃薯种植区内PVY个体的遗传变异。重组分析和系统发育分析发现,我国北方3省(区)PVY群体中重组株系占比高达90.3%,并具有明显的株系多样性,表明PVY重组株系已成为我国北方3省(区)马铃薯种植区的流行株系。选择压力分析显示,使用FEL和IFEL法分别检测出501个和315个净化压力选择位点,这表明3省(区)PVY群体受净化选择压力为主。以上结果表明,中国北方3省(区)PVY群体遗传多样性高,突变、重组和自然选择都对遗传多样性和群体分化存在一定影响。
- 马俊丰李小宇张春雨周雪平王永志
- 关键词：基因组序列
- 在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法
- 本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法。本发明通过在马铃薯Y病毒cDNA的类原核启动子区插入内含子，用于降低或消除类原核启动子区的启动子活性，经修饰马铃薯Y病毒cDNA编码的...
- 王永志苏颖李小宇张春雨马俊丰
- 文献传递
- 马铃薯Y病毒瞬时ELISA检测试剂盒的研制
- 马铃薯病毒检测方法主要有生物学检测法、电子显微镜检测法、分子生物学检测法和血清学检测法.ELISA属于血清学检测方法,具有高通量、不依赖特定仪器设备,稳定性好等优点,但操作繁琐耗时较长.为了建立马铃薯Y病毒(PVY)快速...
- 梁雨欣李小宇张春雨侯吉超王永志
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体
- Carboxin抗性基因(Cbx^R)原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2015年
- [目的]克隆CbxR基因,进行原核表达,纯化CbxR基因蛋白并制备其多克隆抗体。[方法]CbxR基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达并纯化,Western blot鉴定分析。制备CbxR蛋白的兔源多克隆抗体,运用间接ELISA方法检测多抗效价,利用Western blot印记检测抗体特异性。[结果]成功获得CbxR基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导可大量表达,成功制备CbxR蛋白兔源多克隆抗体,效价为1∶64 000,经Western blot检测表明多克隆抗体特异性良好。[结论]多克隆抗体为CbxR检测及进一步研究CbxR基因功能奠定了基础。
- 李小宇张正坤王秋华张春雨张淋淋尤晴杨凤升王永志李启云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 洋葱黄矮病毒RT-PCR和ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 分麋洋葱Alliumcepa var.aggregatum俗称毛葱、鬼子葱,是北方地区特色经济作物,保健功效显著,其种植面积逐年增加。洋葱黄矮病毒(OBnion yellow dwarfvirus,OYDV)能够侵染分麋洋葱,造成其产量和品质下降。OYDV侵染分麋洋葱后,植株矮化,叶片变形褪绿、叶尖枯萎,后期整个叶片表现发黄、起皱及萎缩等症状。为能在发病早期及时快速地检测出OYDV,本研究利用特异性引物和已制备的单克隆抗体,通过优化参数确定最佳检测条件,建立OYDV的RT-PCR和ELISA检测方法,以期为分麋洋葱生产中农药减施提供技术保障。
- 郭炎李小宇苏颖张春雨周雪平王永志
- 关键词：ELISA检测方法RT-PCR单克隆抗体特异性引物经济作物
- 马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2021年
- 本研究克隆马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)衣壳蛋白(Coat Protein, CP)基因,改造其密码子,使其偏好原核表达,构建pCzn1-PLRV CP重组表达载体,通过大肠杆菌表达纯化,经Western Blot方法鉴定为PLRV CP蛋白,纯化后的蛋白免疫日本大耳兔,成功制备PLRV CP蛋白多克隆抗体,识别重组蛋白效价为128 000倍,识别PLRV叶片的效价为32 000倍,经Western Blot方法分析,其特异性良好。本研究为PLRV检测方法的建立及脱毒种薯的检测提供了必需的生物材料。
- 王韬远张春雨王忠伟李闯张胜利李建平李小宇王永志
- 关键词：马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 苜蓿花叶病毒ELISA检测方法的建立及其在大豆病毒调查和抗性资源鉴定中的应用
- 2023年
- 苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)是一种世界性分布、宿主范围广、具有严重危害性的植物病毒,能引起大豆的严重病害。本研究利用原核表达的AMV CP蛋白制备的抗血清,建立了高效、准确的AMV间接ELISA检测方法,并应用于病害调查和抗性鉴定,结果表明制备的3份抗血清对重组蛋白和AMV感染的大豆植物粗提液的效价均达到256000倍,血清特异性分析结果显示3份抗血清仅识别感染AMV的大豆叶片,不识别感染大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)的大豆叶片。通过建立的AMV间接ELISA与常规RT-PCR同时对采集的50份疑似感染AMV的大豆样品进行检测,有46份样品检测结果一致,符合率达92%。利用建立的AMV ELISA方法和课题组已建立的SMV ELISA方法对吉林省大豆主产区的大豆样品进行病毒检测的结果表明,病毒检出率为38.30%,SMV的检出率达30.85%,AMV的检出率达17.06%,复合侵染率为9.61%。对接种AMV的40个大豆品种进行抗性鉴定,结果显示40份大豆全部感染AMV,但是病毒载量存在差异,部分品种表现出AMV抗性,其中大豆抗性资源11份,首次发现AMV造成的大豆病害已经成为吉林省大豆的主要病害之一。
- 战笑蕾王馨玥李小宇张春雨刘建青王晨王斌梁雨欣王永志程晓非
- 关键词：大豆苜蓿花叶病毒间接ELISA
