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杆状病毒-昆虫细胞系统表达的戊型肝炎病毒衣壳蛋白p495的纯化、结构解析以及免疫原性分析被引量：4: 2016年; 本研究目的是利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立戊型肝炎病毒(HEV)p495蛋白的高效稳定表达和可放大纯化的方法,研究其理化性质和解析三维结构,与上市戊肝疫苗益可宁(Hecolin)进行免疫原性的比较。本研究选择基因1型HEV毒株的开放读码框2(ORF2)的aa112-606片段构建杆状病毒,感染昆虫细胞进行重组蛋白的表达,经过PEG沉淀和阴离子交换层析的纯化,获得纯度为95%以上的p495蛋白,每升细胞培养液最终获得15mg的目的蛋白。经ELISA、分析超离、分子排阻色谱和电镜负染等分析显示p495蛋白具有良好的抗原性且呈现为均一的病毒样颗粒(VLP),沉降系数为51.3S,颗粒直径约20nm。冷冻电镜三维结构解析获得分辨率为3.8的三维结构,揭示p495形成了T=1的等二十面体结构,与已报道的晶体结构相一致。小鼠免疫实验表明p495蛋白与益可宁中p239抗原的免疫原性相当。本研究为进一步开展HEV的受体鉴定、表位结构研究以及疫苗改进等奠定良好的基础。; 林庆山蒋婕李婷婷张玉云张振勇郑明华王凯航郑清炳俞海顾颖夏宁邵李少伟; 关键词：戊型肝炎病毒病毒样颗粒真核表达系统免疫应答

一种内毒素合成途径抑制的整合表达型大肠杆菌菌株的构建及应用: 疫苗在预防和治疗多种人类疾病中发挥着重要的作用。大肠杆菌具有生长快速、培养简单、遗传背景清楚等特点，已被广泛地应用于重组蛋白的表达和生产，但被应用于基因工程疫苗的研发和生产直至近年来才取得突破。目前，大肠杆菌表达系统应用...; 王凯航; 关键词：基因载体内毒素; 文献传递

戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其中和表位的结构研究进展被引量：1: 2016年; 戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,被证实为人兽共患病,该病症对免疫力低下人群和已有基础性肝病的患者的危害更为显著。戊肝病毒主要通过粪口途径传播,猪是其主要的天然宿主。近年来,关于戊肝病毒的衣壳蛋白及其表位结构的研究取得了重要的进展,对于戊肝病毒的病毒学研究和戊肝疫苗的机制探讨起着重要的指导意义。本文将综述HEV病毒衣壳蛋白的结构研究和中和表位的结构基础,着重说明戊肝病毒中和表位存在型特异性和型交叉两种特征,提示型交叉表位与人兽共患现象的关系。; 郑明华王凯航李琼张晓李少伟夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒人兽共患中和表位

流感病毒M2e与白喉毒素无毒突变体CRM197融合蛋白的抗原性和免疫原性分析被引量：4: 2017年; 流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性。流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一。白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可增强小分子抗原的免疫原性,商业化的肺炎球菌疫苗采用CRM197结合形式提高多糖分子的免疫原性。本实验通过重组蛋白融合的方式,将M2e与CRM197(aa 1~535)、CRM197-N190(aa 1~190)、CRM197-N389(aa 1~389)的C端或N端进行融合表达,并考察融合蛋白的反应活性以及免疫原性。融合蛋白中的M2e和CRM197均具有反应活性;超速离心分析和四聚体特异构象单抗反应均表明融合蛋白(CRM197-N190)-M2e及M2e-(CRM197-N190)主要以类似M2e天然构象的四聚体形式存在;融合蛋白可与多株流感M2e特异性单抗以及CRM197特异性单抗反应,M2e融合至CRM197N末端形成的重组蛋白的反应活性高于C端融合蛋白;相比融合GST,与CRM197-N190的融合显著增强了M2e蛋白的免疫原性,为流感通用疫苗研究提供了新思路。; 李琼王凯航周立志陈婷婷张晓陈毅歆顾颖夏宁邵李少伟; 关键词：流感病毒抗原性免疫原性

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王凯航