胡晶莹
- 作品数：28 被引量：70H指数：4
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达
- 2003年
- 目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1 Fab中 ,构建得到pSW1 2F7Fab ,转化受体菌E .coilXL1 Blue ,IPTG诱导表达 ,经Westernblot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果 :从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因。测序证实 2F7单抗的重链 (VH)可变区基因全长 36 2bp ,编码 12 0个氨基酸 ;轻链 (VL)可变区基因全长 319bp ,编码10 5个氨基酸。构建的 2F7人 鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达 ,主要分泌在菌液的上清中 ,表达量较高且稳定 ,具有与NCI H1 2 8细胞特异性结合的活性。结论 :构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗 2F7人 鼠嵌合Fab片段 ,表达产物具有与抗原结合的特异性 ,为进一步研究和应用打下了基础。
- 林琳鲁驰朱明洁胡晶莹赵新泰
- 关键词：人-鼠嵌合抗体FAB片段基因工程
- 肺腺癌干细胞表达小细胞肺癌相关抗原的实验研究
- 2013年
- 肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)是指一类具有自我更新(self-renewal)能力的未分化细胞。在肺腺癌中,CSC的自我更新调控机制类似胚胎干细胞,即高表达OCT4、Nanog和Sox2多潜能基因,但目前对其表型特征尚存争议。该文采用成球试验(sphere-forming assay)从SPC-A1细胞株中富集CSC后进行分子表型分析。结果显示,此类肺球体细胞(pulmospheres)同时表达肺脏近端和远端呼吸上皮的多个谱系(lineage)标志,包括纤毛柱状细胞标志FoxJ1、非纤毛柱状细胞(即Clara细胞)标志CCSP、肺神经内分泌细胞标志GRP、II型肺泡细胞标志SP-C及其转录调控因子TTF-1。这些肺球体细胞也能够被3株小细胞肺癌特异性单抗(2F7、4B3和E6)所识别。通过基因沉默技术使得肺球体细胞中OCT4表达转阴后,上述标志(除E6外)均消失。研究结果揭示,肺癌CSC具有肺脏呼吸上皮多潜能细胞的表型特征。此外,初步研究结果发现,中药冬虫夏草(Hirsutella Hepialid of Cordyceps Sinensis)的被毛孢菌丝体中含有新颖抗癌成分,能够显著遏制肺球体细胞增殖,提示对其进行分离鉴定,将是研制开发肺癌CSC靶向药物的一个发展方向。
- 吴丽霞徐慧莉陈复华张艳胡晶莹刘蕾薛建祥董强刚王维林
- 关键词：肺腺癌肿瘤干细胞
- 肺癌干细胞的球体形成与致瘤性分析被引量：21
- 2008年
- 目的：从人肺腺癌细胞株SPC—A1中诱导球体形成，对其中的肺癌干细胞进行鉴定并评估其致瘤能力。方法：无血清条件下培养肺癌细胞，采用表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、重组人胰岛素样生长因子-1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）和重组人成纤维细胞生长因子-10（fibroblast growth factor—10，FGF-10）等细胞生长因子诱导球体形成，球体细胞采用RT—PCR及免疫荧光技术检测干细胞相关标志的表达，并通过NOD—SCID小鼠移植评估其致瘤性。结果：SPC—A1肺腺癌细胞经培养5—10d后，即可形成悬浮生长的细胞球体（肺球体）。RT—PCR检测显示肺球体细胞表达肺癌干细胞表面标志CD24和CD221．细支气管肺泡干细胞标志Clara细胞分泌蛋白和肺泡活性蛋白C，胚胎干细胞主干基因OCT4、Nanog和Bmi-1，以及肺干细咆主干基因甲状腺转录因子-1。采用免疫荧光检测其中3个标志的蛋白表达，证实80％以上的肺球体细胞呈Clara细胞分泌蛋白、肺泡活性蛋白C和OCT4染色阳性。肺球体细胞具有高致瘤性，在NOD—SCID小鼠中移植5103个细胞即可形成肿瘤。结论：肺球体细胞中肺癌干细胞高度富集并具有致瘤性。
- 耿沁董强刚姚明郑必强胡晶莹周瑾赵仰星闫明霞甘愉
- 关键词：细胞培养技术干细胞动物实验
- 抗人整合素β3亚基单克隆抗体的制备及其抗肿瘤活性的研究被引量：2
- 2007年
- 目的制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用。方法用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3,将其转化大肠杆菌M15,通过诱导表达及纯化,获得β3蛋白。将此蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗β3亚基mAb,Western blot鉴定mAb的特异性。通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的mAb。进一步用MTT法及流式细胞术观察该mAb体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及诱导其凋亡的作用。结果扩增获得了β3胞膜外基因,构建了β3蛋白的原核表达载体,表达纯化了β3蛋白,成功制备了8株mAb,Western blot证明了其特异性。经过体内抑瘤实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的mAb4F12。该mAb可抑制HUVEC细胞增殖并诱导其凋亡。结论成功表达了β3蛋白,并制备了有活性的mAb,抗体具有抑制肿瘤生长的作用,这可能是通过抑制血管内皮细胞的增殖和诱发凋亡实现的。
- 马淑花甘愉张毅朱明洁胡晶莹杨瑶琴赵新泰
- 关键词：整合素Β3单克隆抗体肿瘤治疗
- 小细胞肺癌2F7单抗ScFv的高效表达及复性研究被引量：4
- 2003年
- 目的在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv。方法利用:PCR方法将2F7单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一人工设计的柔性连接肽(Linker)连接,再将单链抗体基因重组到原核表达载体pQE31中,构建单链抗体高效表达载体pQE-2F7-ScFv。将pQE-2F7-ScFv质粒转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和稀释复性。结果 获得了2F7单链抗体的高效表达,表达蛋白大小约27.4kD,以包涵体形式存在。包涵体蛋白在经过变性、纯化和稀释复性后,获得了有功能的单链抗体。结论 成功地构建和表达了小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体,并对其进行了纯化和复性,将进一步促进2F7单抗小分子抗体的应用。
- 马钢张毅胡晶莹朱明洁赵新泰
- 关键词：SCFV复性小细胞肺癌单链抗体
- 抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体（mAb），对其进行特性鉴定，为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480bp的原核表达载体pQE30ANXI，异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达，并用Ni—NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白I作为抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化，制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体，用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ImAb的杂交瘤细胞，分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3，所产抗体，均为IgGl亚型，轻链均为K链，亲和力为（2．3～3．03）×10^8L／mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs，为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。
- 蔡幸胡晶莹莫忠根朱明洁赵新泰
- 关键词：杂交瘤
- 应用免疫PCR法检测肺癌细胞株方法的建立
- 1998年
- 肺癌是全球范围内发病率最高的恶性肿瘤之一。流行病学资料显示，肺癌患者占世界肿瘤患者的１１．８％，而目前临床诊断中约有１０％“肺部块影”通过常规Ｘ线、ＣＴ、支气管镜、痰涂片等检查仍不能明确诊断。免疫－ＰＣＲ法是９０年代兴起的一种新的抗体依赖性的抗原检测...
- 林琳黄震宇张中华杨瑶琴胡晶莹朱明洁许凯黎
- 关键词：免疫-PCR抗原检测肺癌细胞株
- 抗人小细胞肺癌单克隆抗体及应用
- 本发明提供了一种抗人小细胞肺癌的特异性单克隆抗体2F7。该单克隆抗体具有稳定性好和与小细胞肺癌抗原结合的特异性强的特点。本发明还提供了2F7免疫球蛋白、及其片段和免疫偶联物以及含有上述免疫球蛋白、片段或免疫偶联物的药物组...
- 林琳张毅杨瑶琴莫忠根朱明洁胡晶莹赵新泰
- 文献传递
- miR-103/MTHFR轴抑制肝细胞癌中LINE-1基因的甲基化水平
- 2022年
- 目的:研究肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中长散在核元件1(long interspersed nuclear element-1,LINE-1)基因的甲基化状态,并探讨调控DNA整体甲基化的可能因素。方法:使用Taqman实时荧光定量PCR方法检测LINE-1基因的甲基化水平,用实时荧光定量PCR检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-103和亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)mRNA的表达水平,采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测MTHFR蛋白的表达水平。利用癌症基因组图谱(e Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析HCC组织中不同miRNA的表达水平,利用miRDB等靶基因预测数据库预测miR-103的靶基因,采用荧光素报告基因实验检验miR-103与其靶基因MTHFR的直接相互作用。将miR-103-mimics、miR-103-inhibitor及各自阴性对照(negative control,NC)或过表达miR-103/MTHFR慢病毒颗粒转入肝癌BEL-7402细胞中,检测不同处理对LINE-1基因甲基化的影响。结果:HCC组织中LINE-1基因甲基化水平较癌旁组织下降,且这种低甲基化与预后差相关。TCGA数据库分析结果显示,miR-103是HCC组织中高表达且表达上调的miRNA之一,miR-103表达高的患者较表达低者预后差,这种表达上调在176例患者的样本中得到验证。miR-103过表达可直接抑制MTHFR的表达,导致LINE-1基因甲基化水平降低。HCC患者癌组织较癌旁对照组织的MTHFR mRNA和蛋白水平降低。MTHFR过表达的细胞中LINE-1基因甲基化水平升高。结论:LINE-1基因的甲基化水平受miR-103/MTHFR轴调控,在HCC组织中降低且与患者预后相关;miR-103在HCC组织中高表达,提示miR-103/MTHFR/DNA整体甲基化可能是HCC进展中的重要变化过程。
- 刘玉玲梁顺顺徐慧莉胡晶莹张源洲罗晓莹
- 关键词：肝细胞癌DNA甲基化MTHFR
- 五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡
- 2011年
- 目的探索五行汤经钙离子/溶酶体途径介导的SGC-7901细胞凋亡机制。方法吖啶橙染色检测溶酶体膜完整性,胞浆蛋白免疫印迹法检测凋亡途径蛋白变化,Annexin V结合实验和CCK-8法检测不同抑制剂对细胞凋亡和存活的影响。结果凋亡细胞的溶酶体膜渗漏,溶酶体释放蛋白酶Cathepsin D和Cathepsin B至胞浆。天冬氨酸蛋白酶Cathepsin D抑制剂对五行汤诱导的细胞凋亡无影响;半胱氨酸蛋白酶Cathepsin B、L、S抑制剂可明显减少细胞凋亡(P<0.05),且对细胞的保护作用呈浓度依赖性。结论五行汤经钙离子/溶酶体途径介导SGC-7901细胞凋亡。
- 莫非胡晶莹甘愉赵仰星朱明洁赵新泰段友容
- 关键词：细胞凋亡钙离子溶酶体
