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3种新型人肿瘤坏死因子衍生物在大肠杆菌中的表达与活性检测被引量：9: 2000年; 目的　研制高抗瘤活性的新型肿瘤坏死因子。方法　在总结前人有关hTNF α结构与功能关系研究的基础上 ,应用PCR技术构建了 3种多位点同时突变的hTNF α新型编码基因 ,分别在大肠杆菌中进行表达 ,并用DNA序列分析和Westernblot进行鉴定 ,L92 9细胞检测体外抗瘤活性。结果　 3种衍生物均在大肠杆菌中获得高效表达 ,活性测定结果表明 ,3种衍生物对L92 9细胞的细胞毒活性分别比原型hTNF α提高 5 76、6 41和 15 3倍。结论　 3种衍生物的抗瘤活性有了较大的提高。; 徐春晓倪道明张振龙王春荣赵秀芬; 关键词：肿瘤坏死因子聚合酶链反应大肠杆菌

肿瘤坏死因子α单克隆抗体和多克隆抗体的研制和鉴定被引量：2: 1995年; 以rhTNF－α作为免疫原，通过杂交瘤技术建立了15株稳定分泌rhTNF－α单克隆抗体的细胞株，对其所分泌单抗的生物学特性进行了鉴定，并探索了其纯化工艺。制备了高纯度兔抗rbTNF－α多克隆抗体，其中和细胞毒能力达到或超过SIGMA公司同类产品水平。该抗体对LPS所致的免发热有明显的抑制作用。利用单抗和多抗建立了ELISA双抗体夹心法，敏感性高，稳定性好，特异性强，适宜于临床检测大量样品。; 张振龙倪道明陈晓龙窦金福孟子玉王春荣; 关键词：肿瘤坏死因子Α 单克隆抗体多克隆抗体

重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究被引量：3: 1999年; 本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物（命名为ｈＴＮＦＤ）的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、ＩＰＴＧ使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等，并在５０Ｌ发酵罐进行了中试规模的放大培养，菌体的收获量湿重可达１６４３ｇ／Ｌ，ｈＴＮＦＤ表达量占总蛋白的６０％，纯化的衍生物比活为１０１×１０１０Ｕ／ｍｇ，比原型ｈＴＮＦα提高了４６５倍，具有潜在的临床应用价值。; 徐春晓倪道明张振龙王春荣樊晓翔邓婉明; 关键词：肿瘤坏死因子衍生物发酵

金属硫蛋白的提纯被引量：4: 1999年; 金属硫蛋白(MT)是一类广泛分布、富含半胱氨酸,可结合金属的低分子量非酶蛋白质。它在金属中毒、微量元素代谢调节和抗射线、自由基损伤等方面有重要作用。本研究提纯了兔肝MT_1和MT_2(rlMT_1、rlMT_2)。方法是:先给家兔多次皮下注射CdCl_2诱导MT合成,之后取肝作匀浆,经冷乙醇提取制得MT粗提液。该粗提液通过Sepbaclx G—50 柱(4.5×95cm)和DEAE-cellulose DE52 柱(2.5×4cm)层析,使分离出rlMT_1和rlMT_2两种亚型。鉴定表明,rlMT_1和rlMT_2的分子量均约14KD,纯度为SDS—PAGE分析呈单一条带,与Sigma标准品的分子量和纯度一致。氨基酸组成中,半胱氨酸和硫基含量都接近每分子20个,不含芳香族氨基酸和组氨酸。本次研究为探寻MT检测工作,推动我国MT的研究奠定了良好基础。; 张亨山赵金垣陈晓龙张振龙王春荣倪道明史德林黄文萱刘宏马东星; 关键词：金属硫蛋白分离纯化

抗金属硫蛋白的单克隆抗体被引量：4: 1997年; 为促进金属硫蛋白（ＭＴ）研究的深入发展，通过免疫小鼠、细胞融合、克隆和筛检，共制备出４Ｂ１和４Ｅ８两株分泌抗兔肝金属硫蛋白亚型Ⅱ（ｒｌＭＴ２）单克隆抗体的杂交瘤细胞。鉴定结果表明：所分泌的两种单抗在培养上清和腹水的效价均分别达到１１．６×１０４和１２．５×１０７，并可与兔肝不同亚型ＭＴ和人胎肝ＭＴ进行同程度特异性反应。另外，它们与ｒｌＭＴ２结合的亲和力均在１０１１／ｍｏｌ以上，但所识别的ｒｌＭＴ２分子表位不同。提示：这两种单抗可用于组建双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法，对生物样品中总的ＭＴ作定性、定量分析。; 张亨山赵金垣张振龙王春荣刘采云陈晓龙刘宏马东星张琰萍史德林倪道明; 关键词：金属硫蛋白单克隆抗体效价表位分析 ELISA

不同形式金属硫蛋白异构体对小鼠免疫效果的观察被引量：5: 2000年; 用MT_1和MT_2各三种形式,间隔2～3周免疫Balb/c小鼠3～4次,结果表明:偶联形式MT_1和MT_2抗血清效价分别达到和超过1:25600;单位形式MT_1和MT_2抗血清效价为1:6400和1:25600,而自聚体形式的MT_1和MT_2的免疫效价仅在1:60以下。; 张亨山赵金垣刘彩云王春荣张振龙仉道明史德林刘宏马东星; 关键词：金属硫蛋白异构体免疫效价

兔肝金属硫蛋白亚型的提纯与鉴定被引量：3: 1996年; 兔肝金属硫蛋白亚型的提纯与鉴定张亨山１赵金垣１陈晓龙２张振龙２王春荣２倪道明２史德林２黄文萱２马东星１刘宏１金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）自３０多年前被发现与定名以来，现已知其普遍存在于动、植物和微生物体内，含有丰富的半胱氨酸，可结...; 张亨山赵金垣陈晓龙张振龙王春荣倪道明史德林黄文萱马东星刘宏; 关键词：金属硫蛋白提纯肝脏

抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定: 1997年; 抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定张亨山②赵金垣张振龙③王春荣③刘采云③陈晓龙③刘宏马东星史德林③倪道明③黄文萱③（北京医科大学第三附属医院职业病研究中心，北京１０００８３）金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是一种广泛分布、富含巯基的金...; 张亨山赵金垣张振龙王春荣张振龙王春荣王春荣王春荣史德林陈晓龙黄文萱; 关键词：单克隆抗体

检测金属硫蛋白夹心法ELISA的建立和初步应用被引量：8: 1997年; 采用两种能识别兔肝金属硫蛋白Ⅱ分子上不同抗原决定簇的单克隆抗体建立了夹心法ＥＬＩＳＡ。鉴定表明，该法测定兔ＭＴ的灵敏度为２０ｎｇ／ｍｌ，批内和批间变异系数分别为１２．２％和９．３％；用于测定人体ＭＴ也有较好的灵敏性和可靠性。; 张亨山赵金垣张振龙王春荣陈晓龙刘宏马东星史德林倪道明张琰平王芳; 关键词：金属硫蛋白单克隆抗体 ELISA

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王春荣