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人TPO全长分子在大肠杆菌中的表达及其活性分析被引量：1: 1997年; 利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯＳ－７细胞中表达的人ＴＰＯ３５３个氨基酸全长分子分别做ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内活性分析，结果表明，原核与真核系统表达的ＴＰＯ均具有明显促进血小板生成的作用。这为进一步研究ＴＰＯ的糖基化与其生物学活性及半衰期关系打下基础。; 刘丽田生礼王艳华芦兴武孟岩谢宝树; 关键词：血小板生成素

血小板生成素糖基化与其体内生物学活性关系的研究被引量：3: 1999年; 为探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其体内生物学活性的关系，给血小板缺乏症小鼠模型腹腔分别注射相同活性单位酵母系统表达的人ＴＰＯ成熟肽或大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ－端结构域蛋白，连续给药５ｄ，每天一次，末次给药后３ｄ，比较两种ＴＰＯ组动物外周血血小板数量、骨髓巨核细胞培养单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）、骨髓有核细胞ＤＮＡ含量。结果高、中、低剂量的ＴＰＯ成熟肽组动物的血小板数、巨核细胞集落数和骨髓ＤＮＡ含量均明显高于ＴＰＯＮ－端结构域蛋白的相应组（Ｐ＜０．０１）。显示酵母系统表达的ＴＰＯ成熟肽比大肠杆菌表达的ＴＰＯＮ－端结构域有明显的生物学活性，这可能与它们的糖基化程度及半衰期有关。; 刘丽王颖王颖田生礼孟岩芦兴武孟岩冷爱军; 关键词：血小板生成素糖基化生物学活性

正常人前列腺组织PSP mRNA的表达: 1999年; 用ＲＴ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ序列测定法分析５名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在这５名正常前列腺组织中均同时存在ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｃＤＮＡ，且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致。这可能对ＰＳＰ进一步的基础研究和应用有一定的意义。; 刘丽刘建香刘庆鑫刘立忠王颖孟岩谢宝树冷爱军苏旭刘树铮; 关键词：MRNA 前列腺组织

人TPON端结构域在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析被引量：1: 1997年; 在利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码人血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤ－ＮＡ的基础上，综合ＴＰＯ结构与功能的研究信息，在大肠杆菌中表达了成熟肽Ｎ端结构域．目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的３０％；包涵体经变性、复性、凝胶过滤、离子交换层析等步骤处理后，所得产物给Ｂａｂｌ／ｃ小鼠腹腔连续注射８ｄ，第９ｄ摘眼球采血，计数血小板的数量．结果表明，ＴＰＯＮ端结构域具有明显促进血小板生成的作用．; 刘丽田生礼王艳华孟岩芦兴武谢宝树; 关键词：血小板生成素 N端结构域

人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析被引量：10: 1998年; 外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上，获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα，对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计，使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析，分子量约为６６ｋＤ处蛋白条带可被ＴＰＯ抗体识别；表达量约为０．１ｇ／Ｌ；Ｎ端氨基酸序列分析结果与设计的一致；表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（ｍｅｇａｋａｒｙ－ｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）具有明显的刺激作用．; 田生礼刘丽芦兴武孟岩谢宝树刘立忠王颖冷爱军; 关键词：血小板生成素分泌表达活性测定

酵母系统表达TPO与E.coli表达TPO N端结构域生物半衰期比较: 1998年; 为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系，首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后，两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Ｗｉｓｔｅｒ大鼠尾静脉注射，利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）和ＴＦ１细胞测定不同时间点实验动物血浆中ＴＰＯ浓度或生物学活性，求出两种ＴＰＯ的生物半衰期（ｔ１／２）值．结果显示，以相同浓度和相同活性单位给药，ＴＰＯ成熟肽的ｔ１／２均比其Ｎ端结构域的长，前者分别是后者的１．６５倍和１．２７倍．; 刘丽田生礼王颖王颖孟岩芦兴武孟岩冷爱军; 关键词：血小板生成素糖基化生物半衰期

人TPON端结构域在毕赤酵母中的分泌表达及产物鉴定被引量：4: 1998年; 目的在酵母系统中分泌表达人ＴＰＯＮ－端结构域，对其生物学活性进行初步研究，为与其它ＴＰＯ分子进行ＴＰＯ糖基化生物学意义的研究打基础。方法将编码人ＴＰＯ成熟肽Ｎ端１９５个氨基酸的ｃＤＮＡ与酵母整合型载体ｐＰＩＣＺαＡ重组，构建的重组质粒用ＤｒａⅠ消化成线性ＤＮＡ，转染酵母细胞ＧＳ１１５，使ＴＰＯ基因整合到酵母染色体上；用ＴＰＯ抗体筛选获得遗传性分泌稳定表达的重组酵母细胞株；用ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定ＴＰＯ产物及分子量；用对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）的方法测定活性。结果获得了ＴＰＯＮ－端结构域在酵母系统中的分泌表达，表达产物可被ＴＰＯ抗血清识别，分子量约为２２０００；其产物对小鼠骨髓细胞形成ＣＦＵ－Ｍｅｇ具有明显的刺激作用。; 田生礼刘丽孟岩芦兴武谢宝树刘立忠冷爱军王颖; 关键词：血小板生成素毕赤酵母 N端结构域分泌

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孟岩