陈飞燕
- 作品数：7 被引量：32H指数：4
- 供职机构：南京中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 京大戟提取物pekinenin D通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的:通过观察京大戟提取物pekinenin D对肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法:采用MTT法分析不同剂量的pekinenin D对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;原位末端标记法(TUNEL)和Annexin V/PI双染法检测对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响;采用RT-PCR检测pekinenin D对PI3K/AKT/m TOR mRNA的影响;应用生物膜干涉技术(BLI)分析pekinenin D与PI3K启动子是否存在相互作用。结果:MTT结果显示3.988ug/ml的pekinenin D可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,抑制率过半,并且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法结果显示,随着pekinenin D剂量的增加,SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有明显统计学意义。TUNEL法检测结果表明,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加。流式细胞术分析显示,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D均可使细胞被阻滞于S期,RT-PCR显示pekinenin D显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达量。采用BLI技术分析发现pekinenin D与PI3K的启动子存在一定亲和力。结论:pekinenin D具有抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用,显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达,其机制可能是与PI3K的启动子相结合从而抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。
- 陶伟伟陈飞燕陈飞燕单鑫单鑫董宇李琳陈刚段金廒
- 关键词：细胞凋亡PI3KAKTMTOR
- 京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响被引量：10
- 2016年
- 目的研究京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌SMMC-7721细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探讨其治疗肝癌可能的影响机制。方法采用MTT法分析不同浓度的pekinenal对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;采用原位末端标记法(TUNEL)、Annexin V/PI双染法和电镜观察对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响。结果 MTT结果显示,pekinenal可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈浓度依赖性。Annexin V/PI双染法结果显示,随着pekinenal浓度的增加,肝癌SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。TUNEL法检测结果表明,不同浓度的pekinenal作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加(P<0.01)。给药后电镜观察,与对照组比较,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞质包涵体形成,部分细胞核呈现凋亡表现,并且随着药物浓度增加,凋亡现象越明显。流式细胞术分析显示,不同浓度的pekinenal均可使细胞被阻滞于S期。结论 pekinenal对人肝癌细胞增殖有明显地抑制作用,并存在着明显的浓度依赖关系;pekinenal可能是通过抑制癌细胞DNA的合成,将人肝癌细胞周期阻滞在S期,抑制其增殖,通过诱导人肝癌细胞发生凋亡等,发挥其抗肝癌作用。
- 陈飞燕陶伟伟陈扣玉张嘉卿王雨青陈刚段金廒
- 关键词：京大戟SMMC-7721细胞增殖细胞周期
- T7噬菌体展示人肺癌cDNA文库筛选丹参-人参组分复方靶点研究被引量：3
- 2016年
- 目的通过噬菌体展示技术筛选丹参-人参组分复方(丹参总酚酸、人参总皂苷、人参多糖)的作用靶点。方法经过T7噬菌体展示人肺癌c DNA文库的4轮淘选,获得阳性噬菌体克隆,随机挑选10个克隆进行DNA提取和测序。基因序列用Ex PASy网站的Translate tool查找开放阅读框(ORF)。选取代表性多肽用生物膜干涉技术检测亲和力。结果 4轮淘选后阳性噬菌体克隆得到高度富集,10个样品中7个有相同的DNA序列,长度为471 bp(序列1),另外3个完全一致,长度为58 bp(序列2)。序列1得到4个ORFs,序列2未进行分析。丹参-人参组分复方和多肽His-MNTGRFGKTTSSPALTLGNFQKPL亲和力最高,K_D=4.57×10^(-8)mol/L,人参多糖、丹参总酚酸和多肽亲和力分别为K_D=7.23×10^(-8)mol/L、K_D=7.66×10^(-8)mol/L,人参总皂苷与多肽没有典型的结合和解离效应。结论本研究获得了与丹参-人参组分复方高亲和力多肽,为丹参-人参组分复方肺癌靶向治疗研究提供依据。
- 李变英陈飞燕陈建平毕蕾高静陈卫平
- 关键词：靶点
- 人参总皂苷亲和"垂钓"脑内蛋白质靶点的研究被引量：5
- 2016年
- 目的:预测人参总皂苷在脑内的蛋白质作用靶点。方法:采用直接亲和法亲和"垂钓"出脑内可能与人参总皂苷相互作用的蛋白质;然后采用SDS-PAGE凝胶电泳对"垂钓"出的蛋白质进行分离、染色、挖取蛋白质斑点胶块,并采用MALDI-TOF/TOF串联二级质谱对未知蛋白质进行鉴定;采用生物膜层干涉技术(BLI)测定人参皂苷和疑似蛋白14-3-3之间的相互作用,来进一步确认疑似蛋白14-3-3是否与人参皂苷有直接的分子间相互作用,以及哪种人参皂苷单体与14-3-3蛋白的亲和力最强。结果:亲和"垂钓"和质谱共鉴定获得5个预测蛋白,分别为:14-3-3蛋白、肌动蛋白、肌酸激酶B型、ATP合成酶、未知蛋白质;动力学分析显示14-3-3蛋白与原人参二醇、原人参三醇存在分子间相互作用,并且KD值分别为7.8×10-4和5.62×10-4。结论:14-3-3蛋白是人参总皂苷脑内的作用靶点之一,人参皂苷体内代谢产物原人参二醇、原人参三醇可能是14-3-3蛋白的激活剂。
- 陈飞燕欧阳柳凤江玉翠顾玲陈翠花徐雁赵玉男
- 关键词：人参总皂苷原人参二醇
- 人参水提液通过免疫调节TAMs影响A549增殖被引量：8
- 2016年
- 目的探讨人参水提液(1 g/m L人参水提液中Rg1、Re、Rb1的量分别为1.4、1.17、1.42 mg/m L)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)的表型调节进而间接抑制肺癌细胞A549的增殖。方法采用佛波酯、IL-4、IL-13联合处理人急性单核细胞白血病细胞THP-1来建立TAMs的体外模型;RT-PCR技术、流式细胞技术、ELISA用于分析2.5、5、10、20、40 mg/m L人参水提液及药物处理6、12、24、48 h对TAMs的表型调节;用Transwell上下室共培养体系和上清共培养体系观察TAMs对A549增殖的抑制。结果人参水提液能显著上调TAMs中M1型标志物IL-12及i NOS的表达水平;人参水提液双向调控M2型标志物(下调甘露糖受体CD206和上调IL-10)的表达水平。经人参水提液调节的TAMs能够显著抑制A549增殖且呈剂量依赖性。结论人参水提液能调节肿瘤微环境中TAMs的表型进而抑制A549的增殖,这可能与人参水提液提高了TAMs中M1型巨噬细胞的比例有关。
- 江玉翠毕蕾高静陈飞燕陈卫平
- 关键词：肿瘤相关巨噬细胞免疫调节肺癌A549细胞
- 丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA的筛选与鉴定被引量：6
- 2016年
- 通过将人肺癌A549细胞分为正常对照组和给药组,采用实时定量PCR对MDR1的表达水平进行测定。运用microRNA芯片对给药组和对照组进行microRNA表达谱分析;采用Targetscan预测上调microRNA中与多药耐药基因MDR1相关的miRNA以及实时定量PCR的方法对筛选出的miRNA进行验证,研究丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA。实验结果表明,与对照组相比,给药组MDR1的表达水平明显下调;microRNA芯片对人肺癌A549细胞的给药组和对照组进行了miRNA表达谱分析,共筛出426个差异表达的miRNA;然后对差异表达上调的miRNA进行靶基因预测,发现有4个明显上调的miRNA与多药耐药基因MDR1相关。对4个miRNA进行实时定量PCR验证,结果与芯片一致。因此认为丹酚酸A下调肺癌多药耐药基因MDR1可能是通过影响miRNA表达进而调控靶基因,对进一步阐明中药逆转多药耐药作用机制提供了实验依据。
- 陈飞燕毕蕾钱磊高静江玉翠陈卫平
- 关键词：丹酚酸A多药耐药肺癌A549细胞
- 人参总皂苷多克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证。方法首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量;然后通过过碘酸钠法构建人参总皂苷和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原制备得到人参总皂苷多抗;使用Protein A/G琼脂糖纯化和抗原柱双纯化抗体;最后用免疫细胞化学和生物膜层干涉(biological membrane layer interference,BLI)技术验证抗体。结果得到高纯度的人参总皂苷;SDS-PAGE表明抗原GTS-BSA偶联物制备成功;ELISA法检测受试组效价为(29.52±4.31),亲和树脂纯化后得到较纯多抗;生物膜层干涉技术表明人参总皂苷多抗与人参总皂苷、人参皂苷Re、Rg1、Rh1、Rh2、原人参二醇、F1、化合物K、原人参三醇的亲和力分别为3.99×10^(-7)、4.69×10^(-9)、2.59×10^(-9)、2.40×10^(-6)、1.62×10^(-4)、2.64×10^(-7)、1.66×10^(-10)、1.08×10^(-7)和1.32×10^(-6);免疫细胞化学(ICC)从细胞学水平上验证了抗体的有效性。结论人参总皂苷多抗的效价和特异性较高,可为下一步研究人参总皂苷在脑中的分布做好铺垫。
- 顾玲欧阳柳凤陈飞燕江玉翠陈翠花徐雁赵玉男
- 关键词：人参总皂苷免疫细胞化学
