- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
- 目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells,Tr...
- 陈俊豪左丽袁静毛佳璇孔维莹来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- 文献传递
- DENV-2感染的HUVEC和Balb/c小鼠受CYM-5442干预后免疫机制的研究
- 目的:利用2型登革病毒(Dengue Virus 2 Type,DENV-2)感染的人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与免疫细胞...
- 袁静
- 关键词：免疫调节TREG细胞单核细胞
- 文献传递
- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响被引量：3
- 2018年
- 目的研究人原代脐静脉内皮细胞（primary human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）被登革病毒2型（DENV-2）感染后，与调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）共培养，HUVEC与Treg细胞相互作用对各自主要炎性细胞因子的影响。方法用密度梯度离心法从人浓缩白细胞分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），磁珠阴性分选Treg细胞，流式细胞术检测CD4＋CD25＋CD127＋细胞纯度。HUVECs经DENV-2感染后，用Transwell与Treg细胞共培养，对照组用鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒，并与Treg细胞共培养，real-time RT-PCR分别检测HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α和Treg细胞的IL-10、TGF-β的mRNA转录水平；双抗体夹心ELISA法检测培养上清中上述细胞因子表达。结果感染后HUVECs中DENV-2 NS1基因转录水平逐渐上升，在24 h达到峰值（3.03±0.26，P〈0.01）后下降。流式细胞术检测经免疫磁珠阴性分选的Treg细胞纯度为（84.3±0.5）%。DENV-2感染后HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α mRNA转录均有上调，感染后24 h IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录量分别为16.64±2.64、26.80±5.81和5.25±0.42，而未感染组的转录水平分别为1.70±0.68、1.68±0.74、1.45±0.15，与Treg共培养后上述细胞因子在各时间点的转录有所降低，但仍高于未感染DENV-2的对照组。CYM-5442预处理后被感染的HUVECs IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录水平显著下降；共培养的Treg细胞所产生的IL-10、TGF-β也下调。结论被DENV-2感染的原代HUVECs能增强Treg细胞IL-10与TGF-β的分泌，同时Treg细胞产生的抑制性细胞因子能降低被感染的HUVECs炎性细胞因子的产生。
- 陈俊豪左丽袁静毛佳璇孔维莹来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- 2型登革病毒对原代人肝窦内皮细胞凋亡、自噬以及相关基因表达的影响被引量：2
- 2016年
- 目的研究2型登革病毒（DENV-2）感染原代人肝窦内皮细胞（HHSECs）后，HHSECs的凋亡、自噬，细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及Beclin-1 mRNA水平的表达，分析DENV-2致病过程中可能的作用机制。方法用DENV-2（MOI＝1）作用于HHSECs，Real-time PCR动态检测DENV-2 NS1部分序列；CCK-8法动态检测DENV-2对HHSECs的毒性作用。real-time PCR动态检测被感染HHSECs的ICAM-1、Beclin-1 mRNA的表达水平。流式细胞术检测被感染HHSECs的细胞凋亡率，以及LC3B和ICAM-1的表达。结果被DENV-2作用后的HHSECs有NS1部分基因序列的表达。DENV-2感染细胞后，CCK-8法检测细胞的抑制率分别为（10.90±1.24）%（12 h）、（16.40±0.42）%（24 h）、（17.00±0.46）%（36 h）、（29.60±0.26）%（48 h）。Real-time PCR检测HHSECs中Beclin-1及ICAM-1 mRNA的表达，以未感染组为对照，2^－△△Ct值于24 h达峰值，分别为46.77±2.55和40.97±4.91。流式细胞术动态观察被DENV-2感染的HHSECs的凋亡，于12 h较明显，凋亡率为13.17%；36 h时LC3B的表达率（35.50%）达到峰值；ICAM-1的表达率分别为9.17%（12 h）、14.7%（24 h）、12.7%（36 h）、11.6%（48 h）。结论HHSECs对DENV-2易感。DENV-2可激活HHSECs，诱导ICAM-1上调；可促进自噬的发生，于早期诱导HHSECs细胞凋亡。
- 戴雪婷左丽赵军袁静裴华孔维莹
- 关键词：登革病毒自噬BECLIN-1
- 登革病毒Ⅱ型感染人真皮微血管内皮细胞后通透性改变的机制研究
- 目的：了解登革病毒Ⅱ型(Dengue virus Type 2,DENV-2)感染原代人真皮微血管内皮细胞(Primary Human dermal micro-vascular endothelial cells,pH...
- 赵军左丽戴雪婷裴华袁静孔维莹
- 关键词：BECLIN-1
- 登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4＋ T细胞相互作用对黏附分子和抑炎细胞因子表达的影响
- 2017年
- 目的 探讨Ⅱ型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）与CD4＋T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1） mRNA和 CD4＋T细胞表达IL-10、TGF-β1 mRNA产生的影响,以进一步了解DENV感染的免疫学机制.方法 S1P1选择性激动剂CYM-5442处理HUVECs 24 h,用103半数组织培养感染剂量（TCID50）的DENV-2感染HUVECs后与人CD4＋T细胞共培养.于4、8、12、24、48及72 h,分别收集细胞样本,用real-time PCR检测DENV-2非结构蛋白1（NS1）、鞘氨醇激酶1（SPHK1）、ICAM-1、VCAM-1、IL-10、TGF-β1 mRNA表达变化.结果 HUVECs被DENV-2感染后,病毒NS1 mRNA的表达呈一定时效性,在24 h达到高峰.在DENV-2感染的不同实验组中,CYM-5442处理和未处理组,DENV-2 NS1 mRNA的表达均无明显差异.HUVECs被CYM-5442处理和DENV-2感染后,SPHK1 mRNA表达明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;在DENV-2感染的HUVECs与CD4＋T细胞共培养的情况下,HUVECs ICAM-1和VCAM-1 mRNA高表达,相对HUVECs仅被DENV-2感染组和未处理组差异有统计学意义（P〈0.01）,CD4＋T细胞TGF-β1 mRNA表达无明显差异,IL-10 mRNA表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 实验证明DENV-2能在HUVECs内复制增殖,CD4＋T细胞可抑制DENV-2增殖;CD4＋T细胞对DENV-2感染的HUVECs产生黏附分子VCAM-1和ICAM-1有明显的促进作用,CD4＋T细胞可促使HUVECs活化,增强炎症反应,这可能与DENV-2感染诱发血管通透性升高有关.DENV-2感染的HUVECs对CD4＋T细胞IL-10 mRNA表达有一定上调作用,对TGF-β1的表达没有明显的影响.
- 王克左丽张妮袁静孔维莹毛佳旋陈俊豪
- 关键词：人脐静脉内皮细胞CD4+T细胞
- 登革病毒Ⅱ型引起原代HDMECs通透性变化机制的初步研究被引量：2
- 2016年
- 目的:了解登革病毒Ⅱ型(Dengue virus Type 2,DENV-2)感染原代人真皮微血管内皮细胞(Primary Human dermal micro-vascular endothelial cells,p HDMECs)引起细胞通透性改变的机制。方法:用103TCID50的DENV-2感染p HDMECs;于4、8、12、24、48 h Real time-PCR、免疫荧光法及流式细胞术检测DENV-2 NS1部分序列及蛋白;Transwell法检测细胞通透性;Real time-PCR和双抗体夹心ELISA法检测IL-6和IL-8的变化;流式细胞术检测24、48、72 h细胞凋亡。结果:DENV-2感染的p HDMECs病毒NS1基因相对表达上调,但未检测到病毒NS1蛋白;DENV-2感染的p HDMECs通透性在24、48 h显著升高;p HDMECs被感染72 h后凋亡也无明显变化;IL-6和IL-8 mRNA分别在8、24 h相对表达上调[IL-6:(2.49±0.5)倍,P<0.05;IL-8:(6.82±1.69)倍,P<0.05];对照组和感染组分泌的IL-6于8 h分别为(869.6±50.7)、(1 248.8±86.9)pg/ml,P<0.05;IL-8于48 h分别为(967.6±156.6)、(1 331.0±86.3)pg/ml,P<0.05。结论:DENV-2能感染p HDMECs;p HDMECs被DENV-2感染后,细胞的通透性增加与凋亡无关,与促炎性细胞因子IL-6和IL-8明显上调关系密切。
- 赵军左丽戴雪婷裴华袁静孔维莹
- 关键词：登革病毒IL-8通透性
- DENV-2对原代HHSECs凋亡,自噬及其相关基因表达的影响
- 目的：研究Ⅱ型登革病毒(DENV-2)感染原代人肝窦内皮细胞(HHSEC)后,HHSECs的凋亡、自噬情况,以及ICAM-1和Beclin-1 mRNA水平的表达,并分析它们在登革病毒致病过程中可能的机制。
- 戴雪婷左丽赵军袁静裴华孔维莹
- 关键词：凋亡自噬BECLIN-1
- DENV-2诱导HUVECs自噬和影响细胞活力的研究被引量：6
- 2018年
- 目的:通过利用登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,研究病毒诱导HUVECs产生自噬和对细胞活力的影响。方法:利用DENV-2 NGC株感染HUVECs,Real-time PCR检测HUVECs中DENV-2 NS1基因部分系列的表达,给予自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)和自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理观察细胞自噬通量变化,激光共聚焦显微镜观察自噬体形成;CCK-8检测细胞活力;Western blot检测自噬通量标志性蛋白LC3、P62的蛋白表达量。结果:DENV-2感染HUVECs组病毒NS1基因在各时间点均有表达;被感染的HUVECs在24 h时细胞活力下降不明显,36、48 h细胞活力分别下降至未处理组82.46%和78.47%,差异具有显著统计学意义(P<0.05);HUVECs被DENV-2感染后,LC3-Ⅱ蛋白量表达明显增高,自噬底物P62表达明显降低,36、48 h时间点相较未处理组具有统计学意义(P<0.05),与RAPA处理组结果相似(P>0.05)。CQ处理组LC3-Ⅱ及P62蛋白量表达均明显升高,36、48 h时间点相较未处理组具有显著性差异(P<0.05)。HUVECs被DENV-2感染36 h,激光共聚焦显微镜观察到LC3-Ⅱ表达明显高于未处理组,自噬诱导剂RAPA处理HUVECs后,LC3-Ⅱ表达明显增加,自噬强度更加明显。DENV-2与CQ联合处理组相较DENV单独处理组,36 h细胞活力下降了13.61%,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:DENV-2感染可抑制HUVECs的生长;而DENV-2诱导HUVECs产生的自噬却有利于HUVECs的存活。
- 毛佳璇左丽孔维莹张妮王克袁静陈俊豪来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞自噬细胞活力
- 铁调素及其调节研究进展被引量：5
- 2018年
- 近年来,随着铁调节肽—铁调素(hepcidin)的发现,人们对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)贫血的病理生理机制的认识显著提高。在CKD患者中,铁调素的清除减少及慢性炎症状态的存在使得血清铁调素水平升高。对于铁调素多种影响因子及信号通路的研究发现为治疗慢性肾性贫血的药物研究开辟了新的方向。本文综述了近年来对铁调素调节机制的认识、铁调素与慢性肾性贫血的联系,以及当前针对调节铁调素的各种因子潜在的药物治疗新选择。
- 龙昌柱田丽娜袁静张祖隆
- 关键词：贫血铁调素慢性肾脏病
