陈俊豪
- 作品数：8 被引量：13H指数：3
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- 登革病毒感染的人脐静脉内皮细胞与人CD4＋ T细胞相互作用对黏附分子和抑炎细胞因子表达的影响
- 2017年
- 目的 探讨Ⅱ型登革病毒（DENV-2）感染的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）与CD4＋T细胞的共培养对HUVECs表达细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1） mRNA和 CD4＋T细胞表达IL-10、TGF-β1 mRNA产生的影响,以进一步了解DENV感染的免疫学机制.方法 S1P1选择性激动剂CYM-5442处理HUVECs 24 h,用103半数组织培养感染剂量（TCID50）的DENV-2感染HUVECs后与人CD4＋T细胞共培养.于4、8、12、24、48及72 h,分别收集细胞样本,用real-time PCR检测DENV-2非结构蛋白1（NS1）、鞘氨醇激酶1（SPHK1）、ICAM-1、VCAM-1、IL-10、TGF-β1 mRNA表达变化.结果 HUVECs被DENV-2感染后,病毒NS1 mRNA的表达呈一定时效性,在24 h达到高峰.在DENV-2感染的不同实验组中,CYM-5442处理和未处理组,DENV-2 NS1 mRNA的表达均无明显差异.HUVECs被CYM-5442处理和DENV-2感染后,SPHK1 mRNA表达明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;在DENV-2感染的HUVECs与CD4＋T细胞共培养的情况下,HUVECs ICAM-1和VCAM-1 mRNA高表达,相对HUVECs仅被DENV-2感染组和未处理组差异有统计学意义（P〈0.01）,CD4＋T细胞TGF-β1 mRNA表达无明显差异,IL-10 mRNA表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 实验证明DENV-2能在HUVECs内复制增殖,CD4＋T细胞可抑制DENV-2增殖;CD4＋T细胞对DENV-2感染的HUVECs产生黏附分子VCAM-1和ICAM-1有明显的促进作用,CD4＋T细胞可促使HUVECs活化,增强炎症反应,这可能与DENV-2感染诱发血管通透性升高有关.DENV-2感染的HUVECs对CD4＋T细胞IL-10 mRNA表达有一定上调作用,对TGF-β1的表达没有明显的影响.
- 王克左丽张妮袁静孔维莹毛佳旋陈俊豪
- 关键词：人脐静脉内皮细胞CD4+T细胞
- DENV-2诱导HUVECs自噬和影响细胞活力的研究被引量：6
- 2018年
- 目的:通过利用登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,研究病毒诱导HUVECs产生自噬和对细胞活力的影响。方法:利用DENV-2 NGC株感染HUVECs,Real-time PCR检测HUVECs中DENV-2 NS1基因部分系列的表达,给予自噬诱导剂雷帕霉素(RAPA)和自噬抑制剂氯喹(CQ)预处理观察细胞自噬通量变化,激光共聚焦显微镜观察自噬体形成;CCK-8检测细胞活力;Western blot检测自噬通量标志性蛋白LC3、P62的蛋白表达量。结果:DENV-2感染HUVECs组病毒NS1基因在各时间点均有表达;被感染的HUVECs在24 h时细胞活力下降不明显,36、48 h细胞活力分别下降至未处理组82.46%和78.47%,差异具有显著统计学意义(P<0.05);HUVECs被DENV-2感染后,LC3-Ⅱ蛋白量表达明显增高,自噬底物P62表达明显降低,36、48 h时间点相较未处理组具有统计学意义(P<0.05),与RAPA处理组结果相似(P>0.05)。CQ处理组LC3-Ⅱ及P62蛋白量表达均明显升高,36、48 h时间点相较未处理组具有显著性差异(P<0.05)。HUVECs被DENV-2感染36 h,激光共聚焦显微镜观察到LC3-Ⅱ表达明显高于未处理组,自噬诱导剂RAPA处理HUVECs后,LC3-Ⅱ表达明显增加,自噬强度更加明显。DENV-2与CQ联合处理组相较DENV单独处理组,36 h细胞活力下降了13.61%,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:DENV-2感染可抑制HUVECs的生长;而DENV-2诱导HUVECs产生的自噬却有利于HUVECs的存活。
- 毛佳璇左丽孔维莹张妮王克袁静陈俊豪来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞自噬细胞活力
- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
- 目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells,Tr...
- 陈俊豪
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- 文献传递
- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响被引量：3
- 2018年
- 目的研究人原代脐静脉内皮细胞（primary human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）被登革病毒2型（DENV-2）感染后，与调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）共培养，HUVEC与Treg细胞相互作用对各自主要炎性细胞因子的影响。方法用密度梯度离心法从人浓缩白细胞分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），磁珠阴性分选Treg细胞，流式细胞术检测CD4＋CD25＋CD127＋细胞纯度。HUVECs经DENV-2感染后，用Transwell与Treg细胞共培养，对照组用鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒，并与Treg细胞共培养，real-time RT-PCR分别检测HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α和Treg细胞的IL-10、TGF-β的mRNA转录水平；双抗体夹心ELISA法检测培养上清中上述细胞因子表达。结果感染后HUVECs中DENV-2 NS1基因转录水平逐渐上升，在24 h达到峰值（3.03±0.26，P〈0.01）后下降。流式细胞术检测经免疫磁珠阴性分选的Treg细胞纯度为（84.3±0.5）%。DENV-2感染后HUVECs的IL-6、IL-8、TNF-α mRNA转录均有上调，感染后24 h IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录量分别为16.64±2.64、26.80±5.81和5.25±0.42，而未感染组的转录水平分别为1.70±0.68、1.68±0.74、1.45±0.15，与Treg共培养后上述细胞因子在各时间点的转录有所降低，但仍高于未感染DENV-2的对照组。CYM-5442预处理后被感染的HUVECs IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA转录水平显著下降；共培养的Treg细胞所产生的IL-10、TGF-β也下调。结论被DENV-2感染的原代HUVECs能增强Treg细胞IL-10与TGF-β的分泌，同时Treg细胞产生的抑制性细胞因子能降低被感染的HUVECs炎性细胞因子的产生。
- 陈俊豪左丽袁静毛佳璇孔维莹来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- DENV-2感染的HUVECs与巨噬细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响被引量：5
- 2019年
- 目的观察原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革热2型病毒(dengue virus 2, DENV-2)感染后,与人外周血巨噬细胞(macrophages, M?)共培养,两种细胞主要炎性因子产生的变化。方法密度梯度离心法从人体外周血浓缩白细胞中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),贴壁得到单核细胞,通过巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激,流式细胞术检测CD14+CD11b+细胞纯度,得到M?。DENV-2感染HUVECs,real-time PCR检测HUVECs细胞内病毒NS1 mRNA表达量变化。HUVECs被DENV-2感染后,通过Transwell法与M?共培养,对照组用鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒。Real-time PCR分别检测HUVECs产生的IL-6、IL-8 mRNA和M?产生的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA的逆转录水平;ELISA双抗体夹心法检测培养上清中上述细胞因子的表达。结果HUVECs DENV-2被感染后,细胞内NS1基因转录水平逐渐上升,24 h时达峰值(2.66±0.53,P<0.05)后下降。流式细胞术检测M?纯度为(89.16±2.07)%。HUVECs被DENV-2感染后IL-6、IL-8 mRNA转录水平均上调,24 h mRNA转录量达到峰值;IL-6为16.10±0.17,IL-8为29.76±0.58。未感染组转录水平IL-6为1.46±0.67,IL-8为1.60±0.54。M?被感染后IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA表达量均有明显上升,在24 h mRNA IL-6表达量为45.82±3.72,IL-8为52.34±1.69(12 h),TNF-α为28.94±1.75,IL-1β为30.96±1.44;未感染组转录水平IL-6为1.16±0.22,IL-8为1.15±0.21,TNF-α为1.11±0.09,IL-1β为1.47±0.31。HUVECs与M?共培养后上述细胞因子在各时间点的转录水平有所下降,依然明显高于未感染对照组。CYM-5442预处理后,共培养组感染的HUVECs IL-6、IL-8的mRNA转录水平明显下降(P<0.01),M?中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA转录水平也有下调(P<0.01)。结论DENV-2能够感染原代HUVECs,且被DENV-2感染的HUVECs能够活化M?并促使其分泌大量的IL-
- 来涛左丽罗玉毛佳璇陈俊豪周恩正
- 关键词：登革热病毒人脐静脉内皮细胞巨噬细胞免疫调节
- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
- 目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells, T...
- 陈俊豪左丽
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- 文献传递
- DENV-2感染的HUVECs与调节性T细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响
- 目的:研究人原代脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被DENV-2感染后,与调节性T细胞(regulatory T cells,Tr...
- 陈俊豪左丽袁静毛佳璇孔维莹来涛罗玉
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞TREG细胞
- 文献传递
- DENV-2作用于HUVECs和人巨噬细胞对黏附分子表达的影响被引量：1
- 2019年
- 目的:研究登革Ⅱ型病毒(DENV-2)感染人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人巨噬细胞,且感染后共培养对主要黏附分子表达的影响。方法:水平密度梯度离心法提取浓缩白细胞中的外周血单核细胞(PBMC),贴壁分离单核细胞,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激5~7 d,流式细胞术鉴定细胞表面CD14和CD11b分子。用10 3 TCID50 DENV-2分别感染HUVECs和人巨噬细胞,且感染后两者共培养,qRT-PCR检测细胞内不同时间点DENV NS1、VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA相对表达量。双抗体夹心ELISA法分别检测不同时间点各组培养上清液中可溶性分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达水平变化。结果:流式细胞术鉴定人巨噬细胞纯度为(92.15±1.24)%。DENV-2感染HUVECs后病毒基因NS1的相对表达量呈先升后降趋势,在24 h达到峰值后下降,DENV-2感染人巨噬细胞的DENV NS1基因相对表达量呈先递减后增加趋势,共培养组HUVECs的NS1 mRNA各时间点表达水平均高于HUVECs单独感染组。DENV-2感染巨噬细胞后,ICAM-1 mRNA相对表达量于4、8 h高于巨噬细胞未感染组,12、24、48、72 h相对表达水平与未感染组相比差异无统计学意义;E-selectin mRNA相对表达量于4 h明显高于巨噬细胞未感染组,8 h与未感染组相比表达量无统计学意义差异,12、24、48、72 h与未感染组相比表达量下调;但未检测到VCAM-1 mRNA的表达。共培养组HUVECs的ICAM-1和VCAM-1 mRNA相对表达量与HUVECs单独感染组相比8 h后均上调,且均在24 h达峰值。感染后的HUVECs E-selectin mRNA于4 h表达水平最高,且各组相对表达量均低于共培养组。共培养组中感染DENV-2的HUVECs培养上清液中ICAM-1表达量均高于HUVECs单独感染组;共培养组中感染DENV-2的HUVECs中E-selectin表达量随时间呈先增后降趋势,且在24 h表达量达峰值;但未检测到培养上清液中VCAM-1的表达。结论: DENV-2能在HUVECs和人巨噬细胞中复制且能激活内皮细胞,被DENV-2感染
- 罗玉左丽来涛张妮周恩正陈俊豪
- 关键词：登革病毒人脐静脉内皮细胞人巨噬细胞黏附分子
