杜坤
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 活性位点邻近的Ω-loop对胰蛋白酶热稳定性和活性的影响
- 在医药科研等领域，胰蛋白酶作为一种非常重要的工具酶，应用十分广泛。通常，胰蛋白酶以从哺乳动物胰液中提取为主，工艺简单，但容易携带病原菌，导致产品质量不均一。因此，开发一种高效稳定的胰蛋白酶的生产方法成为当前工业所迫切的需...
- 杜坤
- 关键词：胰蛋白酶糖基化热稳定性
- 文献传递
- 一种突变型Sus scrofa猪源胰蛋白酶及其编码基因及获取方法和应用
- 本发明涉及一种突变型Sus scrofa猪源胰蛋白酶及其编码基因及获取方法和应用，对原有的野生型Sus scrofa猪源胰蛋白酶酶进行突变，得到热稳定性显著提高的突变酶，提供编码上述胰蛋白酶突变体的编码基因、氨基酸序列和...
- 黄鹤杜坤郭超刘冶
- 文献传递
- 活性位点邻近的?-loop对胰蛋白酶热稳定性和活性的影响被引量：3
- 2017年
- 以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近?-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的柔性区Fragment 41~46(即?-loop所在区域)。然后根据删除?-loop结构中不同的氨基酸数目,确立了三个突变R1Q、K3Q及C5Q;通过重叠延伸PCR技术构建突变菌株,发酵表达后,进行了酶热稳定性和活性分析。结果表明,R1Q、K3Q及C5Q的活性在一定程度上均有提高,在热稳定性上R1Q和K3Q有所提高,C5Q有所下降,其中R1Q突变体酶的最高活性较野生型提高了1.42倍,同时,失活半衰期和最适反应温度较野生型也分别提高了213.3 min和11.8℃。实验结果证明,在删除该?-loop中的异亮氨酸后,得到了突变型R1Q酶,成功实现酶双功能的共同进化。该策略有潜力应用于其他工业酶分子的热稳定性和活性改造,为推动生物酶的工业化应用奠定基础。
- 杜坤甘一如黄鹤
- 关键词：热稳定性活性
- 一种胰蛋白酶及其制备方法与应用
- 本发明涉及生物技术领域，提供了一种胰蛋白酶及其制备方法与应用。本发明所述胰蛋白酶其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述胰蛋白酶稳定性、活性高，且耐高温。本发明所述制备方法工艺简单，成本降低，获得胰蛋白酶纯度...
- 黄鹤杜坤
- 文献传递
- 一种突变型Sus scrofa猪源胰蛋白酶及其编码基因及获取方法和应用
- 本发明涉及一种突变型Sus？scrofa猪源胰蛋白酶及其编码基因及获取方法和应用，对原有的野生型Sus？scrofa猪源胰蛋白酶酶进行突变，得到热稳定性显著提高的突变酶，提供编码上述胰蛋白酶突变体的编码基因、氨基酸序列和...
- 黄鹤杜坤郭超刘冶
- 一种胰蛋白酶及其制备方法与应用
- 本发明涉及生物技术领域，提供了一种胰蛋白酶及其制备方法与应用。本发明所述胰蛋白酶其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述胰蛋白酶稳定性、活性高，且耐高温。本发明所述制备方法工艺简单，成本降低，获得胰蛋白酶纯度...
- 黄鹤杜坤
- 文献传递
