李竹石
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E。重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性。结果成功构建了pET-32-D1-E原核细胞表达重组质粒,DENV-1E蛋白获得高效表达;纯化后的重组蛋白免疫家兔获得的特异性抗血清效价为1∶25 600,Western blot证实其特异性良好。结论成功构建了DENV-1E蛋白的原核细胞表达载体,并制备了可用于DENV快速检测的高效多克隆抗体。
- 汪伟丁显平杨会强李竹石谭帅赵宇刘莉娜谭昌耀曾献武
- 关键词：登革病毒原核细胞
- 细胞色素c氧化酶亚基IV表达载体的构建及其在NB4细胞中的过表达
- 2012年
- 目的构建细胞色素c氧化酶亚基IV(COXIV)的表达载体并在NB4细胞进行过表达。方法 RT-PCR扩增COXIV编码序列并克隆到pcDNA6/His A质粒中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序;将鉴定正确的pcDNA6-COXIV表达载体转染到NB4细胞中,Western blot鉴定COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达。结果所构建的pcDNA6-COXIV表达载体转染NB4细胞后,COXIV蛋白表达水平显著高于对照细胞。结论 COXIV表达载体构建成功,可介导COXIV蛋白在NB4细胞中的过表达,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 李竹石史可鉴杨洋许彩民
- 关键词：细胞色素C氧化酶活性氧
- 生物制品中逆转录酶活性检查假阳性结果的原因分析及对策被引量：2
- 2012年
- 目的对造成生物制品中逆转录酶活性检查假阳性结果的原因进行分析和讨论,并探讨相应的对策。方法查阅生物制品中逆转录酶活性检查方法的相关文献,并结合实际工作中的检定结果进行分析总结。结果多种因素可造成逆转录酶活性检查结果的假阳性,可针对这些原因采取相应的策略。结论逆转录酶活性检查方法的进一步完善,对于生物制品的质量控制具有十分重要的意义。
- 李竹石杨会强李玉华
- 关键词：逆转录病毒逆转录酶
- 亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ的下调机制被引量：1
- 2009年
- 目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ(COX Ⅳ)表达的变化情况及其机制和意义。方法用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX Ⅳ蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化以及caspase-3的激活。caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化。瞬时转染干扰NB4细胞中COX Ⅳ表达后,流式细胞术检测细胞凋亡。结果亚硒酸钠诱导NB4细胞COX Ⅳ蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化。活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调与caspase-3激活。caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调。干扰COX Ⅳ表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加。结论在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX Ⅳ在蛋白水平显著下调。活性氧介导COX Ⅳ下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX Ⅳ表达下调,抑制COX Ⅳ能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性。
- 李竹石杨洋许彩民
- 关键词：凋亡细胞色素C氧化酶活性氧
- 登革病毒3型E蛋白的原核表达及抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的原核表达并纯化登革病毒3型（DENV-3）E蛋白，并用于制备其抗体。方法采用PCR技术克隆DENV-3E蛋白基因，插入原核表达质粒载体pET-32a（＋），转化大肠杆菌RoseRa（DE3），IPTG诱导表达。表达产物经纯化后，免疫家兔，制备DENV-3E蛋白抗血清，并用于Westernblot鉴定。同时，采用ELISA测定其抗体效价，并初步应用于DENV-3的检测。结果重组表达载体经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为65×103，主要以包涵体形式表达；用纯化的包涵体蛋白免疫家兔后，获得的特异性抗血清效价为1：20480，该血清可与DENV-3发生特异性反应。结论本研究原核表达并纯化了DENV-3E蛋白，制备了高滴度的特异性兔抗血清。制备获得的DENV-3E蛋白抗体可用于登革病毒的鉴定，为登革病毒相关研究奠定了基础。
- 林华杨会强李竹石杨健赵宇刘俐葛永红曾献武曹毅乔代蓉李玉华
- 关键词：登革病毒E蛋白原核表达多克隆抗体
- 乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:探索乙型脑炎病毒(JEV)疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸(E279)MK回复突变(M279K)对其毒力的影响。方法:用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含有SA14-14-2包膜蛋白M279K突变的全长cDNA质粒pACNR-JEV(M279K),并以其为模板体外转录RNA,将RNA电转染导入BHK21细胞得到恢复病毒rJEV(M279K),并比较恢复病毒和疫苗病毒在蚀斑大小以及对小鼠神经毒力等方面的差别。结果:酶切及测序表明质粒模板成功构建,除人为引入的突变外(碱基1813处T→A),无任何碱基突变,并发现rJEV(M279K)形成比疫苗株更小的蚀斑,但毒力与疫苗株无显著差异。结论:E279回复突变影响乙脑疫苗SA14-14-2病毒蚀斑大小,但并未明显增强疫苗株对小鼠的神经毒力。
- 杨健李玉华李竹石林华汪伟刘丽娜倪谦枝曾献武杨会强
- 关键词：乙型脑炎病毒疫苗回复突变
- 登革病毒1型E蛋白第三结构域的原核表达及其免疫原性
- 2014年
- 目的在大肠埃希菌中表达登革病毒(Dengue virus,DENV)1型(DENV-1)E蛋白第三结构域(EⅢ),并分析重组蛋白的免疫原性。方法利用PCR技术从质粒p MD-D1pr M/E中扩增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表达载体p ET-32a(+),构建重组表达质粒p ET-D1EⅢ,转化至E.coli Rosetta2(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备多克隆抗体,采用Western blot法检测抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体滴度,蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测中和抗体效价。用纯化的重组蛋白免疫经腹部皮下多点注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1(Hawaii株)经脑内攻击,分析重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果重组原核表达质粒p ET-D1EⅢ经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,主要以可溶性形式表达,占重组菌裂解上清蛋白量的52.37%;纯化的纯度可达90%以上,浓度达2 mg/ml;制备的多克隆抗体特异性强,效价高;重组蛋白能保护57.1%的小鼠免受致死剂量DENV的攻击。结论成功在E.coli Rossetta2(DE3)中高效表达了DENV-1 EⅢ蛋白,纯化的重组蛋白免疫家兔获得的多克隆抗体具有较强的特异性和较高的效价,且在小鼠免疫保护试验中显示出较好的保护力。本实验为进一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的开发奠定了基础。
- 汪伟李竹石谭帅赵宇刘莉娜刘俐蔡峰曾献武杨会强
- 关键词：登革病毒E蛋白原核细胞免疫原性免疫保护力
- 通过核质转运调节细胞凋亡的蛋白质
- 2009年
- 凋亡,也称Ⅰ型程序性细胞死亡,是细胞在面临严重威胁时发起的保护性主动死亡机制.凋亡对于个体的生长发育及各种生理功能具有不可或缺的作用.作为涉及整个细胞的复杂过程,凋亡的顺利进行有赖于众多凋亡相关因子的协调合作与精确调控.细胞受到凋亡刺激后,核内的某些蛋白质转运出核,将凋亡信号传递到核外,胞质内的多种蛋白质则转运入核,在细胞核这一信息整合的大本营直接发挥作用.这种双向交流机制在胞核与胞质间建立起密切的联系,同时使得相关蛋白质在特定场所发挥促进或抑制凋亡的作用,确保凋亡信号及时、通畅、有序地传递.因此,蛋白质的核质转运作为介导胞核与胞质物质交换、信号交流的关键机制,在凋亡过程中就显得尤为重要.本文主要就核质转运的机制、通过核质转运调节凋亡的蛋白质及其作用机理作一综述.
- 李竹石许彩民
- 关键词：凋亡核质转运核孔复合体
- 亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中MnSOD上调机制的研究
- 硒是具有抗癌作用的人体必需微量元素之一,大量证据表明,超营养剂量的硒能够诱导前列腺癌、肝癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、白血病等多种肿瘤细胞的凋亡。在本实验室的前期工作中已经发现,20μM亚硒酸钠(sodium seleni...
- 李竹石
- 关键词：亚硒酸钠凋亡MNSOD
- 文献传递
- 登革病毒4型E蛋白的表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 目的在原核细胞中表达登革病毒4型E蛋白及E蛋白III区,分别以两种蛋白免疫家兔,获得可检测登革病毒的多克隆抗体。方法将登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区编码序列克隆到pET-32a(+)质粒中,分别构建两种蛋白的表达载体,以IPTG诱导其在Rosetta细胞中的大量表达,并进行SDS-PAGE检测。分别以两种蛋白免疫家兔,制备出针对E蛋白与E蛋白III区的多克隆抗体,并对其进行Western blot鉴定。结果登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区在Rosetta细胞中以包涵体的形式大量表达;利用所制备的多克隆抗体对登革病毒进行检测,出现了预期的条带。结论本研究制备获得的多克隆抗体可用于登革病毒的检测,为登革病毒相关研究奠定了基础。
- 李竹石林华杨健杨会强曾献武赵宇刘俐刘莉娜康庄俞永新李玉华
- 关键词：E蛋白多克隆抗体
