马丹凤 作品数:18 被引量:57 H指数:6 供职机构: 湖南省儿童医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖南省自然科学基金 教育部重点实验室开放基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
高效液相一测多评法定量分析小儿清热化痰栓中8种主要成分含量 2022年 目的:采用高效液相一测多评(HPLC-QAMS)法,建立小儿清热化痰栓中马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、甘草苷、甘草酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷含量的检测方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长分别为237 nm(检测马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、甘草苷和甘草酸)和275 nm(检测连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷);流速1.0 mL/min;柱温30℃。以甘草苷为内参物,通过测定其与马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、甘草酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷的相对校正因子(RCF),计算各成分含量,同时与外标法(ESM)实测值进行对比,验证HPLC-QAMS法的可行性。结果:马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、甘草苷、甘草酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A和连翘苷质量浓度分别在4.08~102.00、0.77~19.25、4.59~114.75、1.35~33.75、2.74~68.50、1.61~40.25、7.73~193.25、2.19~54.75μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率及RSD分别为99.45%(0.96%)、97.49%(1.45%)、98.85%(1.08%)、99.13%(0.78%)、100.04%(0.76%)、98.63%(1.59%)、100.07%(0.60%)和96.99%(1.26%)。小儿清热化痰栓中各成分HPLC-QAMS法计算含量值与外标法实测含量值无明显差异。结论:所建立的HPLC-QAMS法操作简便易行,成本较低,可用于小儿清热化痰栓多指标成分的质量评价。 张传香 何苗 马丹凤 王海斌关键词:相对校正因子 复方七芍降压片对TNF-α诱导的与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞P2Y6信号通路相关因子表达的影响 被引量:3 2020年 目的观察复方七芍降压片对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞中炎症因子与P2Y6、MEK1/2、ERK1/2蛋白表达的影响,探讨其治疗高血压的机制。方法采用内皮细胞和平滑肌细胞构建共培养体系,利用炎症因子TNF-α建立高血压炎症微环境。将共培养好的细胞随机分为正常组、模型组、空白血清组、MRS2578组、厄贝沙坦药物血清组、复方七芍药物血清组、MRS2578+复方七芍药物血清组。MRS2578组和MRS2578+复方七芍药物血清组加入10μmol/L MRS2578。正常组和模型组加入等量培养液,余各组加入10%药物血清及空白血清。采用倒置显微镜观察内皮细胞和平滑肌细胞形态;采用ELISA检测细胞上清液炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-10水平;采用免疫荧光、Western blot、RT-qPCR技术检测内皮细胞P2Y6、MEK1/2、ERK1/2的表达。结果与正常组比较,模型组和空白血清组内皮细胞和平滑肌细胞数量明显减少,细胞轮廓不清晰,折光性降低,漂浮的死细胞团块增多;IL-1β含量显著增加,IL-10含量显著减少(P<0.01);P2Y6、MEK1/2、ERK1/2荧光强度、灰度值、mRNA水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,复方七芍药物血清组内皮细胞和平滑肌细胞折光性增强,细胞形态恢复正常;IL-1β水平明显降低(P<0.05);P2Y6、MEK1/2、ERK1/2荧光强度、灰度值、mRNA水平明显降低(P<0.01)。结论复方七芍降压片可明显调控TNF-α诱导的内皮炎症反应,改善内皮炎症导致的平滑肌细胞损伤,维持其正常功能,其机制可能与调控内皮细胞P2Y6受体及其下游信号通路MEK1/2、ERK1/2蛋白表达,改善炎症反应有关。 刘叶倩 李弘 龚姗 陈春茗 马丹凤 刘林 王志琪 曾勇 王宇红 任卫琼关键词:复方七芍降压片 血管重塑 UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中阿法替尼浓度及其药动学研究 被引量:2 2018年 目的:建立一种检测大鼠血浆中阿法替尼浓度的UPLC-MS/MS方法。方法:选择用乙腈沉淀的蛋白质样品进行样品处理并运用Waters XEVO TQD三重四级杆液质联用仪和CORTECS BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.6μm)分离分析物。流动相由乙腈和水(0.1%甲酸)组成,流速为0.4 ml·min^(-1),柱温为40℃,内标为来那替尼。采用正离子电喷雾多反应监测(MRM)模式对分析物进行定量,目标碎片离子为阿法替尼m/z 486.19→112.1,来那替尼(IS)m/z 557.3→112.15。结果:阿法替尼在1-200 ng·ml^(-1)范围内线性关系良好(r=0.998 1),定量下限为1 ng·ml^(-1)。日内精密度和日间精密度均≤9.51%,阿法替尼从血浆中回收率高于77.1%。大鼠灌胃给药和静脉给药阿法替尼后,t_(1/2)分别为7.19 h和2.69 h,C_(max)分别为97.78 ng·ml^(-1)和123.37 ng·ml^(-1),AUC_((0-∞))分别为1 505.4 ng·h·ml^(-1)和405.55 ng·h·ml^(-1)。结论:该方法准确可靠,操作简便,重复性好,适用于灌胃和静脉注射10和2 mg·kg^(-1)剂量的阿法替尼的药动学研究。 汤尘尘 张传香 谭金桃 马丹凤 王双虎 周云芳关键词:药动学 钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁大鼠血压及抑郁样行为的改善作用 被引量:1 2023年 目的观察钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁大鼠血压及抑郁样行为的改善作用。方法40只自发性高血压大鼠(SHR),随机均分为模型组、阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中、高剂量(6.345、12.69、25.38 g/kg)组,另取8只SD大鼠为正常组。以慢性不可预知性应激(CUMS)联合孤养大鼠的方法复制高血压并发抑郁模型。造模同时灌胃给药,每天1次,连续42 d。采用无创血压仪检测各组大鼠尾动脉血压,旷场实验、糖水消耗实验、强迫游泳实验检测各组大鼠总活动次数、糖水偏好率、强迫游泳不动时间,HE染色和尼氏染色观察海马区神经元的活性、排列情况以及神经元尼氏小体的数量,ELISA法检测大鼠海马组织单胺递质5-HT、NE、DA与炎性因子COX-2、MCP-1、TNF-α水平。结果造模42 d后,与模型组比较,阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中剂量组尾动脉收缩压降低(P<0.01),阳性对照组和钩藤降压解郁方中、高剂量组旷场实验总活动次数、糖水消耗率升高(P<0.01),强迫游泳实验不动时间缩短(P<0.01),海马神经元细胞状态好转,排列整齐,少见凋亡细胞,尼氏小体丰富,海马组织中单胺递质5-HT、NE、DA水平升高(P<0.01),炎性因子COX-2、MCP-1、TNF-α分泌减少(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方能通过减少海马组织炎性因子分泌,稳定单胺类神经递质表达,缓解海马神经元损伤,实现对高血压并发抑郁症大鼠血压及抑郁样行为的改善作用。 陈蕾 刘叶倩 赵红霞 黄铃格 李弘 龚姗 马丹凤 陈春茗 曾水清 易健 刘林 龙红萍 王宇红 任卫琼关键词:单胺递质 补骨脂对幼龄小鼠非酒精性脂肪性肝炎的影响及其机制 2022年 目的研究补骨脂对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的保护作用及其机制。方法选取正常饲料喂养C57BL/6J小鼠后代中刚断奶的雌性小鼠,为对照组(灌胃蒸馏水);选取高脂饲料喂养小鼠的后代中雌性小鼠随机分为模型组(灌胃蒸馏水)、低剂量组[补骨脂1.125 mg/(g·d)]、高剂量组[补骨脂2.25 mg/(g·d)]和维生素E组[维生素E 0.01 mg/(g·d)],每组6只,连续喂养8周。采用全自动生化分析仪检测小鼠血清ALT、AST、TG、TC水平;HE及苦味酸-天狼猩红(SR)染色观察肝组织病理变化;二氢乙啶(DHE)荧光探针法检测肝组织活性氧(ROS)水平;试剂盒测定NADPH氧化酶的活性;Western blot检测肝组织核转录因子-κB(p65)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K p85)、蛋白激酶B(Akt)及蛋白激酶C-α(PKC-α)等蛋白的表达。结果血清生化指标检测发现,模型组小鼠血清ALT、AST、TG、TC及HOMA-IR水平均高于对照组(均P<0.01)。治疗后,低、高剂量组及维生素E组血清ALT、AST、TG、TC及HOMA-IR水平均低于模型组(均P<0.05);HE及SR染色观察,模型组肝细胞肿胀,有大小不等的脂滴空泡,纤维化明显。低、高剂量组及维生素E组肝细胞脂肪变性减少,纤维化减少;且肝组织ROS和NADPH氧化酶含量均降低(均P<0.05);Western blot检测显示,模型组p-p65/p65、p-Akt/Akt、p-PKC-α/PKC-α及PI3K p85、P47phox蛋白水平较对照组升高(均P<0.01)。低、高剂量组及维生素E组p-p65/p65、p-Akt/Akt、p-PKC-α/PKC-α及PI3K p85、P47^(phox)蛋白水平下降(均P<0.01)。上述指标中,高剂量组对肝脏NASH的保护作用优于维生素E组和低剂量组(均P<0.05)。结论补骨脂能改善NASH模型小鼠肝功能,可能与抑制氧化应激、炎症反应及肝纤维化有关,这为防治儿童NASH提供了新思路。 张传香 何苗 马丹凤关键词:非酒精性脂肪性肝病 非酒精性脂肪性肝炎 补骨脂 肝纤维化 氧化性应激 HPLC波长切换法同时测定金衣万应丸中多种有效成分的含量 被引量:3 2018年 目的:建立同时测定金衣万应丸中儿茶素、表儿茶素、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅱ和胡黄连苷Ⅰ的HPLC波长切换法。方法:选用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.2%磷酸溶液(梯度洗脱);流速0.9 m L/min;柱温30℃;进样量20μL。结果:金衣万应丸中儿茶素、表儿茶素、胡黄连苷Ⅲ、胡黄连苷Ⅱ和胡黄连苷Ⅰ分别在6.12~122.40、3.78~75.60、3.35~67.00、12.76~255.20、8.94~178.80μg/m L浓度范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为98.40%(RSD=1.71%)、97.56%(RSD=1.24%)、96.94%(RSD=0.88%)、100.19%(RSD=0.99%)、98.97%(RSD=1.03%)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可为金衣万应丸多指标质量评价提供参考。 马丹凤 李素娟 刘雯关键词:波长切换法 儿茶素 表儿茶素 超临界CO_2萃取银杏叶中总黄酮醇苷的夹带剂工艺条件 被引量:6 2017年 目的探讨夹带剂在超临界二氧化碳CO_2中萃取银杏叶总黄酮醇苷的工艺条件。方法以夹带剂加入方式、夹带剂种类、夹带剂加入量及夹带剂流速为考察因素,总黄酮醇苷的提取率作为考察指标,用L9(34)正交表优化工艺条件,高效液相色谱法测定总黄酮醇苷含量。结果夹带方式选择预浸+动态萃取模式,以95%乙醇作为夹带剂,加入量300 ml,加入流速10 ml/min。在上述条件进行超临界萃取时,总黄酮苷醇提取率可达5.03%:萃取压力20 MPa,萃取温度60℃,出口温度70℃,用95%乙醇液态收集萃取物,动态萃取时间1 h。结论该实验优选的工艺明显提高超临界CO_2萃取银杏叶中总黄酮醇苷的提取效率。 刘雯 李素娟 马丹凤关键词:夹带剂 超临界CO2萃取 总黄酮醇苷 正交实验 复方七芍降压片对TNF-α诱导的与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞中炎症因子与AP-1、MCP-1蛋白表达的影响 被引量:13 2020年 目的观察复方七芍降压片对TNF-α诱导的与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞中炎症因子与AP-1、MCP-1蛋白表达情况,探讨复方七芍降压片抑制血管重塑的作用机制。方法利用炎症因子TNF-α联合血管内皮细胞和血管平滑肌细胞共培养体系构建高血压炎症环境。将共培养好的细胞随机分为7组,即正常对照组(A)、模型组(B)、空白血清对照组(C)、MRS2578组(D)、厄贝沙坦片含药血清组(E)、复方七芍降压片含药血清组(F)、MRS2578+复方七芍降压片含药血清组(G)。除正常对照组外,其余各组加入炎症因子TNF-α,浓度10 ng/mL;厄贝沙坦片含药血清组、复方七芍降压片含药血清组和MRS2578+复方七芍降压片含药血清组加入10%的含药血清;MRS2578组与MRS2578+复方七芍降压片含药血清组加入10μm的P2Y6受体阻断剂MRS2578;造模与给药干预24 h后,采用CCK8法检测内皮细胞及平滑肌细胞的存活率;采用ELISA法检测培养基上清液中炎症因子IL-8的水平;采用免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量法(qPCR)技术检测内皮细胞中AP-1、MCP-1的表达。结果与正常对照组比较,模型组和空白血清对照组内皮细胞及平滑肌细胞存活率明显降低(P<0.01),IL-8水平明显升高(P<0.01),内皮细胞中AP-1、MCP-1的荧光强度值、灰度值比值、mRNA水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,复方七芍降压片含药血清组内皮细胞及平滑肌细胞存活率明显升高(P<0.01),IL-8水平明显降低(P<0.05),内皮细胞中AP-1、MCP-1荧光强度值、灰度值比值、mRNA水平均明显降低(P<0.01)。结论复方七芍降压片能够改善因炎症因子TNF-α诱导的内皮细胞及平滑肌细胞的存活率,降低AP-1和MCP-1的活性,抑制内皮细胞炎症反应,改善内皮损伤,保护平滑肌细胞正常功能。 龚姗 李弘 刘叶倩 陈春茗 马丹凤 刘林 任卫琼关键词:AP-1 MCP-1 复方七芍降压片 基于UPLC-Q-TOF-MS/MS分析百蕊草醇提物的化学成分 被引量:8 2022年 为明确百蕊草醇提物中的化学成分,本研究采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对百蕊草醇提物的化学成分进行分析鉴定,在正、负离子模式下采集质谱数据,采用Agilent Mass Hunter B.07.00软件对采集的准分子离子峰信息进行分析,选择误差在5×10^(-6)内的分子式与TCM数据库初步比对,同时参考百蕊草相关文献、结合对照品比对、化合物精确相对分子质量、质谱碎片信息对化合物进一步鉴定。通过液质联用技术共鉴定了百蕊草醇提物54个化学成分,主要包括16个黄酮类、10个生物碱类、5个二萜类、5个有机酸类和其他类化合物,其中首次从百蕊草醇提物中发现氧化苦参碱、4-O-阿魏酰基奎宁酸、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-新橙皮苷等25个化学成分,并进一步探讨了生物碱类、黄酮类和二萜类化合物的质谱裂解规律。通过UPLC-Q-TOF-MS/MS技术快速对百蕊草醇提物的化学成分进行了较为系统而全面的分析,为其探究药效物质基础、临床应用及质量控制提供参考。 周思倩 方艳 谭金桃 田静 何苗 马丹凤 龙红萍关键词:百蕊草 醇提物 裂解规律 生物碱类 黄酮类 木犀草素调控JAK1/STAT3通路对抑郁症大鼠海马小胶质细胞极化的影响 被引量:8 2021年 目的基于小胶质细胞的极化探讨木犀草素发挥抗抑郁活性的相关机制。方法将72只雄性大鼠随机分为对照组,模型组,ABT-494组(10 mg/kg,JAK1抑制剂),木犀草素低、高剂量(30、60 mg/kg)组和木犀草素(60 mg/kg)+ABT-494(10 mg/kg)组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠采用慢性不可预知性温和应激(CUMS)联合孤养复制抑郁大鼠模型。建模成功后ig相应剂量的药物进行干预,1次/d,连续28 d。分别于造模前1 d、造模结束后和给药结束后,采用糖水偏好实验和强迫游泳实验对大鼠抑郁样行为进行评估;免疫荧光双染法检测大鼠海马齿状回(DG)小胶质细胞中离子钙结合衔接分子-1(Iba-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;ELISA检测海马组织炎性因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平;Western blotting检测海马组织Janus激酶1(JAK1)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量、糖水偏好度、海马组织IL-4、IL-10水平显著降低,强迫游泳时不动时间、海马DG区Iba-1/iNOS共表达的阳性细胞数、海马组织TNF-α、IL-6水平和p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3值显著增加(P<0.05);与模型组比较,ABT-494组、木犀草素+ABT-494组和木犀草素低、高剂量组大鼠体质量、糖水偏好度、海马组织IL-4、IL-10水平显著增加,强迫游泳时不动时间、海马DG区Iba-1/iNOS共表达的阳性细胞数、海马组织TNF-α、IL-6水平和p-JAK1/JAK1、p-STAT3/STAT3比值显著降低(P<0.05);且木犀草素和ABT-494联合使用后作用优于两者单独应用。结论木犀草素的抗抑郁作用可能与抑制JAK1/STAT3信号通路的激活,进而抑制小胶质细胞向M1型活化有关。 马丹凤 陈蕾 张传香 任卫琼关键词:木犀草素 抑郁症