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何剑雄

作品数：14 被引量：26H指数：3
供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金广西科技基础条件平台建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>

合作作者

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 3篇会议论文

领域

  • 9篇农业科学
  • 6篇生物学
  • 2篇医药卫生
  • 1篇自动化与计算...

主题

  • 6篇陆川猪
  • 6篇克隆
  • 6篇基因
  • 6篇川猪
  • 5篇小型猪
  • 5篇广西巴马小型...
  • 5篇巴马小型猪
  • 4篇生物信息
  • 4篇生物信息学
  • 4篇生物信息学分...
  • 3篇启动子
  • 2篇蛋白
  • 2篇低剂量
  • 2篇动物
  • 2篇多态
  • 2篇多态性
  • 2篇真核
  • 2篇糖尿
  • 2篇糖尿病
  • 2篇活性

机构

  • 14篇广西大学
  • 5篇广西壮族自治...
  • 1篇广西医科大学

作者

  • 14篇兰干球
  • 14篇何剑雄
  • 11篇郭亚芬
  • 6篇吴延军
  • 5篇谢炳坤
  • 5篇陈宝剑
  • 5篇谢婉
  • 4篇杨祝良
  • 3篇严雪瑜
  • 3篇蒋钦杨
  • 3篇李龙
  • 2篇杨秀荣
  • 2篇张名媛
  • 2篇吴敏
  • 2篇徐文文
  • 2篇梁晶
  • 2篇邹辉
  • 1篇郭晓萍
  • 1篇刘明君
  • 1篇蒋和生

传媒

  • 6篇基因组学与应...
  • 2篇黑龙江畜牧兽...
  • 2篇中国畜牧兽医
  • 1篇南方农业学报

年份

  • 1篇2019
  • 5篇2018
  • 7篇2017
  • 1篇2016
共 14 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
陆川猪GPR1基因真核表达载体构建及组织表达谱分析
2018年
试验旨在构建陆川猪G蛋白偶联受体1(G protein-coupled receptor 1,GPR1)基因真核表达载体,并对其组织表达谱进行分析。采用RT-PCR技术从10周龄陆川猪皮下脂肪组织中扩增出GPR1基因CDS区后,使用常规分子克隆手段构建含GPR1基因片段的真核表达载体pEGFP-N1-GPR1,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFPN1-GPR1进行鉴定,并以脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞24h后观察细胞荧光表达情况。收集所转染3T3-L1细胞并提取其总RNA,实时荧光定量PCR进一步检测GPR1真核表达载体表达情况;提取6头10周龄陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪总RNA,实时荧光定量PCR检测GPR1基因mRNA在陆川猪各组织中的表达量。结果表明,陆川猪GPR1基因CDS全长1 068bp,成功将其连接至pEGFP-N1真核表达载体,重组表达载体pEGFP-N1-GPR1质粒和空载pEGFP-N1质粒所转染3T3-L1细胞均能表现出绿色荧光,且空白对照组并未表现出绿色荧光。实时荧光定量PCR结果证实,GPR1基因在重组质粒试验组的表达量极显著高于空载质粒组(P<0.01)。GPR1基因在10周龄陆川猪肝脏中表达量最高,在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪中均有表达,在背最长肌中几乎不表达。本试验成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-GPR1,并获得了GPR1基因组织表达谱,为进一步研究GPR1基因对陆川猪脂肪沉积的影响提供参考。
谢婉何剑雄夏攀洁吴延军焦迪陈宝剑关志惠兰干球郭亚芬谢炳坤
关键词：陆川猪表达谱
广西巴马小型猪ANK1基因启动子克隆及其活性分析被引量：1
2017年
【目的】克隆广西巴马小型猪ANK1基因启动子,确定其活性核心区,为研究ANK1基因启动子与肉质性状的相关性及构建动物疾病模型打下基础。【方法】通过在线软件对ANK1基因启动子的转录因子结合位点进行预测,根据转录因子结合位点设计特异引物扩增不同长度的ANK1基因启动子片段,并利用双荧光素酶试剂盒检测其荧光值,以确定不同ANK1基因启动子片段的活性。【结果】发现ANK1基因启动子存在1个转录起始位点(TSS)、2个Cp G岛和多个转录因子结合位点,并以此作为ANK1基因启动子的分段依据,将其分割为P638、P791、P1113、P1163、P1648、P1694、P1796和P2074等8个不同长度的目的片段。成功克隆获得的8个ANK1基因启动子片段经KpnⅠ和HindⅢ双酶切、T4真核表达载体连接、细胞转染等方法构建8个双荧光素酶重组报告基因,双荧光素酶试剂盒检测结果显示,广西巴马小型猪ANK1基因启动子在P1796片段活性最强,与其他片段存在显著差异(P<0.05)。【结论】成功克隆获得广西巴马小型猪ANK1基因启动子的8个片段,且利用双荧光素酶试剂盒检测确定其核心启动子区域出现在P1796片段。
李龙司景磊夏攀洁綦文晶龙开旭夏利何剑雄吴敏兰干球
关键词：广西巴马小型猪启动子活性分析
高脂高糖饲料联合低剂量链脲佐菌素(STZ)诱导广西巴马小型猪2型糖尿病动物模型的建立被引量：9
2017年
本研究的目的是应用高脂高糖饲料联合低剂量STZ建立理想的广西巴马小型猪2型糖尿病模型。挑取8头雌性巴马小型猪体重为(21.64±0.62)kg分成对照组和实验组2组,每组4头。对照组标准饲喂9个月(control,CTR);实验组高脂高糖饲料饲喂6个月后按照60 mg/kg给予注射链脲佐菌素(STZ),接着高脂高糖饲喂至9个月(HFHC+STZ,HS);每个月检测空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯和胆固醇的变化。静脉注射葡萄糖耐实验检测葡萄糖利用率。高胰岛素血症与葡萄糖耐受损判定为胰岛素抵抗。结果显示:与对照组相比,实验组猪均发生二型糖尿病症状,包括胰岛素抵抗和葡萄糖耐受损。实验结束时,HS组与CTR组空腹血糖分别为(13.83±0.74 vs 4.28±0.09)mmol/L;空腹胰岛素分别为(40.67±0.80 vs 38.94±1.75)m U/L。本研究通过高脂高糖饲料联合低剂量STZ成功建立广西巴马小型猪2型糖尿病模型,为后续糖尿病的临床研究和药物治疗奠定了基础。
吴延军夏攀洁严雪瑜申玉建何剑雄杨祝良郭亚芬兰干球
关键词：广西巴马小型猪STZ2型糖尿病
陆川猪GPR1基因启动子甲基化及其mRNA表达分析被引量：3
2018年
为了探讨G-蛋白偶联受体1（GPR1）基因启动子甲基化对其在陆川猪和杜洛克猪背最长肌组织中差异表达的影响,试验采用实时荧光定量PCR方法检测GPR1基因mRNA在两个品种猪背最长肌中的表达水平,在线预测的方法预测GPR1基因启动子区CpG岛,亚硫酸氢盐测序（BSP）法分析猪GPR1基因启动子区CpG岛的甲基化水平。结果表明：GPR1基因在两品种猪背最长肌组织中的相对表达量差异显著,在陆川猪背最长肌中的相对表达量明显高于杜洛克猪;GPR1基因启动子区存在一个CpG岛,长度为103 bp,位于-1 031--929 bp处;GPR1基因启动子区CpG岛在两品种猪背最长肌中的整体甲基化水平差异不显著,但在-126,-116,-64,-10位点甲基化水平差异显著。说明GPR1基因启动子甲基化程度与肌内脂肪沉积存在一定关联。
谢婉焦迪何剑雄陈宝剑关志惠兰干球郭亚芬谢炳坤
关键词：陆川猪启动子甲基化表达量
广西3个猪种线粒体DNA D-loop序列遗传多样性及系统进化研究被引量：8
2016年
本研究旨在了解广西石头猪、德保猪和隆林猪的起源、群体遗传结构和亲缘关系。通过PCR扩增和测序技术获得3个群体61个个体的线粒体D-loop序列,采用DNASP 5.0进行多态性分析,MEGA 6.0计算各品种间的遗传距离及构建系统发育树。结果显示,3个猪种mtDNA D-loop区全长1 124~1 325 bp,石头猪和德保猪的中间重复序列变异仅存在A型,隆林猪存在A型和B型;石头猪mtDNA D-loop区8个多态性位点归纳出10种单倍型,德保猪8个多态性位点归纳出5种单倍型,隆林猪11个多态性位点归纳出9种单倍型;3种猪单倍型多样度分别为0.857、0.81和0.917,核算多样度分别为0.002 29、0.002 9和0.002 83。石头猪和德保猪可能有相同的母源血统,隆林猪可能有2种母系起源;3个品种猪单倍型多样性较为丰富,但核苷酸多样性匮乏,亟需进行科学保护。
綦文晶何剑雄郭晓萍兰干球谢文斌蒋钦杨杨秀荣郭亚芬
关键词：线粒体DNAD-LOOP系统进化
广西巴马小型猪内源性反转录病毒类型群体检测被引量：1
2018年
抽样检测广西巴马小型猪内源性反转录病毒（PERV）,了解广西巴马小型猪携带PERV的情况。为培育无PERV广西巴马小型猪提供依据。对广西巴马小型猪PERV-A、PERV-B基因亚型以及陆川猪PERV-C基因亚型进行基因克隆分析,三种亚型基因克隆片段与NCBI上的目的片段一致,确保了PCR分型方法检测PERV的准确性。根据通用的env基因分型方法检测广西巴马小型猪群体内PERV-A、PERV-B、PERV-C基因的存在情况。在50份巴马小型猪样品中,96%的样品中存在PERV-A亚型,100%的样品存在PERV-B亚型,所有广西巴马小型猪样品中都不存在PERV-C亚型;其中,有96%的样品同时存在PERV-A、PERV-B两种亚型,而在24份陆川猪样品中有58.3%存在PERV-C型。广西巴马小型猪没有检测到PERV-C亚型,可以作为无PERV小型猪的培养对象,具有很好的应用前景。
邹辉李禄彬崔悦悦夏琴吴延军何剑雄蒋钦杨郭亚芬兰干球
关键词：广西巴马小型猪猪内源性反转录病毒基因分型
陆川猪TLR2基因的克隆与相关生物信息学分析
目的 对陆川猪Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)基因进行克隆及相关生物信息学分析.方法 根据GenBank已公布的猪TLR2基因序列设计引物,以陆川猪肺脏组织总RNA为模板,RT-PC...
申玉建何剑雄司景磊徐文文张名媛梁晶兰干球郭亚芬蒋和生
关键词：陆川猪克隆
陆川猪GPR1基因的克隆及生物信息学分析被引量：2
2018年
本试验旨在对陆川猪G蛋白偶联受体1（G protein-coupled receptor 1,GPR1）基因进行克隆及相关生物信息学分析。本研究根据NCBI上公布的野猪GPR1基因序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到包含全长编码区在内的基因片段,应用生物信息学软件对陆川猪GPR1基因的理化性质,修饰结构,二级结构和三级结构进行分析。结果显示：GPR1基因编码区全长1 068 bp,编码355个氨基酸;与NCBI上公布的野猪（NM_001190244.1）、牛（NM_001206545.1）、人（NM_005279.3）、猕猴（AF100204.1）、小鼠（NM_146250.2）、大鼠（NM_012961.1）GPR1基因氨基酸序列的同源性分别为98.9%、90.4%、86.5%、86.2%、78.2%、77.4%。陆川猪的GPR1蛋白有七个跨膜螺旋结构,不存在蛋白信号肽。GPR1蛋白存在两个N糖基化位点和多个潜在磷酸化位点。本研究成功克隆陆川猪GPR1基因完整的编码区序列,为今后GPR1基因在陆川猪的脂肪沉积及脂肪代谢方面的研究提供了理论依据。
谢婉何剑雄陈宝剑关志惠郭亚芬兰干球谢炳坤
关键词：陆川猪克隆
陆川猪PLIN5基因的克隆和序列分析被引量：2
2019年
为了研究陆川猪背最长肌围脂滴蛋白5(PLIN5,Perilipin5)基因的结构和功能,试验对陆川猪PLIN5基因进行RT-PCR扩增,所得产物经转化获得含目的基因的重组质粒pMD19-T-PLIN5,经菌落PCR扩增和测序鉴定正确后利用生物信息学方法对陆川猪PLIN5基因的结构、理化性质及其编码蛋白信号肽、跨膜结构、亚细胞定位等进行分析,并探讨了陆川猪与其他物种PLIN5氨基酸序列的进化关系。结果表明:PLIN5基因编码区(CDS)序列长度为1 377 bp,编码458个氨基酸,与NCBI上公布的野猪PLIN5基因序列中的编码区存在4个碱基差异,均为错义突变;陆川猪PLIN5蛋白不存在信号肽,没有跨膜结构域,不存在N糖基化位点;二级结构中α-螺旋占47.16%,无规则卷曲占43.67%,延伸链占9.17%;陆川猪PLIN5基因在不同物种及进化过程中具有较高的保守性,该基因编码的蛋白符合一般Perilipin超家族的结构特征。
焦迪谢婉何剑雄陈宝剑关志惠兰干球郭亚芬谢炳坤
关键词：陆川猪克隆蛋白质肥胖生物信息学分析
猪ANK1基因单核苷酸多态性与启动子区域活性分析
2017年
本实验旨在通过构建猪ANK1基因启动子序列的双荧光素酶报告基因系统,分析ANK1基因启动子活性,寻找ANK1基因启动子的核心区域,为下一步研究猪ANK1基因启动子序列SNP与活性之间的关系提供依据。利用Methprimer和Ali Baba2.1软件预测分析ANK1基因启动子区序列,预测其转录结合位点和Cp G岛。利用直接测序法,对广西巴马小型猪和长白猪共64个样品的ANK1基因启动子核心区域的单核苷酸多态性进行研究。双荧光素酶实验结果表明所预测的序列具有启动子活性,并寻找到启动子的核心区域;同时发现了16个SNP位点,它们分别是:-19、-133、-147、-187、-228、-246、-332、-360、-369、-468、-549、-550、-615、-696、-725和-798。
李龙夏攀洁綦文晶申玉建朱思燃张广杰何剑雄严雪瑜杨祝良方程邹辉兰干球
关键词：启动子活性分析SNP
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