方义湖
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：江西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠Hes1腺病毒干扰载体构建及功能鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的构建高滴度大鼠Hes1腺病毒干扰载体(Ad-Hes1-shRNA)。方法设计3对Hes1-shRNA寡核苷酸序列,通过定向克隆构建pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA干扰质粒,将pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA和pHBAd-BHG共转染293T细胞,以包装Ad-Hes1-shRNA,利用改进TCID50法进行病毒滴度测定。Ad-Hes1感染H9c2心肌细胞,Western blot检测Hes1表达。结果 pHBAd-U6-CMV-Hes1-shRNA构建成功,Ad-Hes1-shRNA包装顺利,滴度为1.0×10^(11) PFU/mL,并可在H9c2心肌细胞内发挥干扰效应。结论 Ad-Hes1-shRNA包装成功,在心肌细胞中具有Hes1的干扰效应。
- 周学亮方义湖赵勇邹斌徐华吴起才刘季春
- 关键词：腺病毒科RNA干扰寡核苷酸序列分析HES1质粒构建
- 大鼠Hes1腺病毒表达载体构建及功能鉴定
- 2017年
- 目的构建高滴度大鼠Hes1腺病毒过表达载体(Ad-Hes1)。方法以大鼠cDNA文库为模板,PCR法扩增Hes1,通过定向克隆构建pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒,再以pShuttle-CMV-Hes1为基础,构建pAdeno-Hes1病毒质粒,将pAdenoHes1转染293细胞,包装Ad-Hes1,利用改进TCID50法进行病毒滴度测定。Ad-Hes1感染H9c2心肌细胞,Western blot检测Hes1表达。结果pShuttle-CMV-Hes1穿梭质粒、pAdeno-Hes1病毒质粒构建成功,总滴度为1.6×1011 PFU,Ad-Hes1可在H9c2心肌细胞内正常表达,其MOI值为30。结论 Ad-Hes1包装成功,为进一步研究Hes1的心肌保护作用奠定实验基础。
- 周学亮方义湖赵勇邹斌徐华刘季春
- 关键词：腺病毒科HES1质粒构建
- Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤作用的研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤作用的分子机制。方法采用Noteh1胞内结构域（NIICD）慢病毒表达载体（Lv—N1ICD）及N1ICD慢病毒干扰载体（Lv—N1ICD—shRNA）分别感染H9e2心肌细胞，建立体外心肌缺血再灌注（H／R）、缺血预适应（IPC）及缺血后适应（IPost）模型，从而分为对照组、缺氧／复氧（H／R）组、缺氧／复氧＋N1ICD感染（H／R＋N1ICD）组、缺血预适应（IPC）组、缺血预适应＋NIICD干扰（IPC＋N1ICD—shltNA）组、缺血后适应（IPost）组、缺血后适应＋N1ICD干扰（IPost＋N1ICD-shRNA）组。采用凋亡检测试剂盒、活性氧（ROS）检测试剂盒分别检测细胞凋亡、细胞内ROS；采用免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β／糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β／GSK-3B）的表达。结果心肌细胞凋亡率在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD—shRNA组分别为（5．34±1．70）％、（47．03±4．10）％、（33．89±12．25）％、（35．85±3．17）％、（51．12±8．22）％、（37．35±3．82）％、（47．90±3．08）％，差异有统计学意义（F=18．47，P〈0．05）。心肌细胞ROS在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD—shRNA组分别为624．66±79．52、1221．87±63．66、913．12±115．82、935．85±201．62、1204．03±113．82、967．15±106．11、1296．59±222．38，差异有统计学意义（F：8．77，P〈0．05）；心肌细胞p-GSK-3β／GSK-3β比值在对照组、H／R组、H／R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD—shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD-shRNA组分别为0．58±0．12、0．62±0．20、1．24±0．09、1．16±0．12、0．72±0．15、1．16±0．12、0．75±0．12，差异有统计学意义（F=11．21，P〈0．05）。结论Notchl作为内源性心肌保护因子，通过促进GSK-3磷酸化，抑制心肌�
- 周学亮方义湖赵勇邹斌许起荣徐华饶长秀刘季春
- 关键词：受体NOTCH1心肌缺血再灌注损伤线粒体
