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刘雪松

作品数：1 被引量：3H指数：1
供职机构：成都军区昆明总医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇乙型
  • 1篇特异
  • 1篇特异性
  • 1篇特异性RNA...
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞系
  • 1篇疗法
  • 1篇基因
  • 1篇基因疗法
  • 1篇肝癌
  • 1篇肝癌细胞
  • 1篇肝癌细胞系
  • 1篇肝炎
  • 1篇肝炎病毒
  • 1篇癌细胞
  • 1篇癌细胞系
  • 1篇RNA干扰
  • 1篇病毒

机构

  • 1篇复旦大学
  • 1篇成都军区昆明...

作者

  • 1篇刘明秋
  • 1篇边中启
  • 1篇郑兆鑫
  • 1篇严维耀
  • 1篇刘霜
  • 1篇焦晔
  • 1篇肖安
  • 1篇刘雪松

传媒

  • 1篇中华医学杂志

年份

  • 1篇2012
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
靶向preC／C基因特异性RNA干扰对乙型肝炎病毒在肝癌细胞系中复制与表达的影响被引量：3
2012年
目的探讨靶向乙型肝炎病毒（HBV）preC／C基因的小干扰RNA（siRNA）在人类肝癌细胞系Huh-7细胞和HepG2．2．15细胞中抗病毒基因治疗效果。方法根据GenBank中HBV（GenBank登录号U95551）基因组序列，设计合成靶向HBVpreC／C基因的3个长2l核苷酸（nt）的siRNA，设计1个对照的非同源长2Int的siRNA，分别克隆到pU6质粒中，构建3个shRNA表达载体pU6-C1，pU6-C2，pU6-C3和对照pU6-C4；为了检测siRNA功能建立报告基因系统，以pT-HBVl．3为模板，PCR合成目的基因preC／C，克隆到绿色荧光蛋白（EGFP）表达载体（pEGFP-N1）中构建携带EGFP报告基因的重组质粒pEGFP．preC／C（E-C）。将构建的3个shRNA表达载体与E-C共转染Huh-7细胞，或将该3个shRNA表达载体共转染HepG2．2．15细胞。首先，在Huh-7细胞中使用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测EGFP融合表达细胞计数，评估该shRNA在转染后不同时间对EGFP融合报告基因表达的抑制效应；接着在HepG2．2．15细胞中，运用ELISA检测转染后24、48、72和96h细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达量；免疫荧光技术检测转染后72h细胞内HBsAg和HBcAg的表达水平；实时荧光定量PCR（real-timePCR）进一步检测HBVmRNA转录产物cDNA的拷贝变化。结果发现siRNA表达质粒与E．C共转染Huh-7细胞后48h，与pEGFP-N1单质粒转染相比，pU6-C1，pU6-C2或pU6-C3共转染组使EGFP表达水平降低了80％，而对照pU6-CA或pU6共转染组无显著降低EGFP的表达，差异有统计学意义（P〈0．01）；免疫荧光技术检测发现HepG2．2．15细胞内HBsAg和HBcAg表达显著降低，real-timePCR发现pU6．C1、pU6-C2或pU6．C3共转染HepG2．2．15细胞后48h，使mRNA转录产物的cDNA含量分别降低了73．9％±1，2％（P=0．029）、48．2％±1．8％和35．8％±1．4％（P：0．037，0．040），而不论pU6-CA或pU6对照共转染组均不能降低cDNA含量，差异均有统计学意义（均P〈0．01）；pU
边中启刘霜刘明秋肖安焦晔严维耀郑兆鑫刘雪松
关键词：肝炎病毒乙型RNA干扰基因疗法
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