王云
- 作品数：8 被引量：4H指数：2
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- HearNPV HA2的功能分析
- HearNPV ORF2(简称 HA2)蛋白为 WASP 家族的同源蛋白,在 Arp2/3复合物存在的情况下,可以在体外诱导肌动蛋白单体聚合成具有分支结构的肌动蛋白纤维。为了分析 ha2在 HearNPV 病毒形态发生中...
- 王倩王云宋建华梁昌镛陈新文
- 文献传递
- 甲型肝炎病毒病毒样颗粒的制备被引量：2
- 2013年
- 目的制备甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus,HAV）病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）,为研制HAV VLPs疫苗奠定基础。方法利用RT-PCR法从HAV HM175-clone4株中扩增P1-2A、P2和P3基因片段。将P1-2A和P3基因亚克隆至pFastBacDual载体,构建重组表达质粒pFastBacDual-P1-P3,转化大肠杆菌DH10BacTM,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-P1-P3,转染昆虫细胞sf-9进行重组杆状病毒的包装。重组杆状病毒vAcP1P3扩增后,感染昆虫细胞Tn-5,培养72 h后,收获表达产物,经原位免疫荧光、EIA、Western blot法及透射电镜检测HAV VLPs的表达。表达产物经超滤及蔗糖密度梯度离心纯化。结果重组表达质粒和重组穿梭质粒分别经双酶切和PCR鉴定证明构建正确。第2、3、4代重组杆状病毒的滴度分别为1.58×105、2.13×107、3.98×107TCID50/ml。vAcP1P3转染sf-9细胞72 h后,可见HAV蛋白的表达;vAcP1P3转染Tn-5细胞后,表达的HAV抗原主要存在于沉淀中,且含量明显高于野生型杆状病毒沉淀样品（P〈0.001）;Wentern blot结果表明,与野生型杆状病毒组相比,HAV VLPs样品中VP3的含量相对较少,HAV VLPs样品可见相对分子质量约30 700的VP1片段及相对分子质量约27 700的VP3片段;透射电镜观察可见大小约50 nm的VLPs颗粒,略大于天然HAV颗粒。纯化的HAV蛋白主要存在于40%~50%的蔗糖梯度中,提示有VLPs形成。结论成功制备了HAV VLPs,为甲肝新型疫苗的研制奠定了基础。
- 沈智俊吴杰解庭波吕宏亮王云陈新文严家新沈智俊
- 关键词：甲型肝炎病毒病毒样颗粒杆状病毒表达系统
- 草地贪夜蛾Sf9细胞系Arp2/3-p40/ARPC1亚基基因的克隆与功能研究被引量：2
- 2012年
- 杆状病毒感染诱导的昆虫宿主细胞肌动蛋白聚合主要由病毒编码的Wiskott Aldrich综合征蛋白(Wiskott Aldrichsyndrome Protein,WASP)同源蛋白P78/83激活宿主细胞内的Arp2/3复合物,进而引起肌动蛋白单体(G-actin)聚合成为纤维状肌动蛋白(F-actin)。为了研究Arp2/3复合物在病毒感染过程中所发挥的作用,我们克隆了昆虫Sf9细胞的Arp2/3复合体P40亚基基因,并对其预期产物进行了生物信息学与功能分析。我们发现在病毒感染过程中,P40亚基由细胞质转移到核膜的内缘,与本实验室过去报道的病毒感染后期核内F-actin的分布相吻合,提示P40可以很好地用于研究Arp2/3复合体的亚细胞定位情况;通过免疫共沉淀(Co-IP)实验,还证实病毒感染可以促进P40和P78/83的相互作用,提示某些未知病毒因素参与调控了由P78/83和Arp2/3复合体介导的肌动蛋白聚合过程。
- 韩士里穆敬芳张永丽陈新文王云黎路林
- 关键词：P40肌动蛋白聚合
- AcMNPV BV/ODV-C42的功能分析
- BV/ODV-C42(C42)是杆状病毒家族中一个高度保守的基因。为了研究该基因的功能,我们利用 Red 重组系统构建了缺失 BV/ODV-C42的重组 AcMNPV Bacmid (Ac-C42KO)。转染 Sf9细胞...
- 王云王倩宋建华梁昌镛石慧陈新文
- 文献传递
- HA2的功能分析
- HearNPV ORF2(简称 HA2)蛋白为 WASP 家族的同源蛋白,在 Arp2/3复合物存在的情况下,可以在体外诱导肌动蛋白单体聚合成具有分支结构的肌动蛋白纤维。为了分析 ha2在 HearNPV 病毒形态发生中...
- 王倩王云宋建华梁昌镛陈新文
- 文献传递
- 肿瘤细胞中杆状病毒蛋白Ac34对CRM1出核通路的抑制作用研究
- 2022年
- 目的:探讨Ac34蛋白在肿瘤细胞中对CRM1出核通路的抑制作用及其对肿瘤细胞生长的影响,为非供价结合的CRM1抑制剂的研发寻找新的方向。方法:选取多种CRM1在其中高表达的肿瘤细胞系:Hela细胞,Huh 7细胞和Hep G2细胞,通过瞬时共表达梯度浓度的Ac34质粒和携带有NES序列的荧光蛋白,激光共聚焦显微镜下观察荧光蛋白的细胞定位及检测Ac34对CRM1出核转运通路的抑制作用,并用WST-1 kit检测Ac34对肿瘤细胞增殖活力的影响。结果:Ac34可以使含有出核序列(NES)的荧光蛋白在Hela细胞的细胞核中发生聚集,且Ac34对肿瘤细胞增殖活力无影响。结论:Ac34在肿瘤细胞中可以抑制CRM1介导的蛋白质核输出,Ac34对肿瘤细胞增殖活性无影响。
- 李景琦胡雪王云周缘刘锦龙白慧敏
- 关键词：ACMNPV抗肿瘤效应
- 杆状病毒BV/ODV-C42介导P78/83入核及其在病毒组装中的功能研究
- 王云
- 关键词：ACMNPV
- AcMNPV肌动蛋白核定位基因的亚细胞定位
- 2012年
- 当前细胞核内肌动蛋白的功能是一个研究热点,核内存在肌动蛋白并参与细胞核内发生的许多生命活动。杆状病毒是迄今唯一报道的利用核内肌动蛋白进行复制增殖的病原微生物,为核内肌动蛋白的结构与功能的研究提供了独特的系统。有报道显示AcMNPV的ie-1,pe38,ac4,he65,ac102和ac152基因与肌动蛋白单体的核转运有关,然而关于这六个基因的亚细胞定位及其在肌动蛋白入核过程中的功能并没有深入的研究。本文首次揭示了这六个基因的亚细胞定位,IE1和AC152是全细胞分布,PE38和AC102也为核质分布,但主要分布在细胞核中,而AC4和HE65定位于细胞质。但AC102和IE1可以分别介导AC4和HE65入核。同时我们发现当使用外源强启动子OpIE2,在转染ie-1或pe38之后表达ac4和he65可以部分招募肌动蛋白单体入核,而时序性共转染这四个基因则可招募最多肌动蛋白单体入核。对肌动蛋白核定位基因在细胞中的定位分析为进一步了解杆状病毒介导肌动蛋白入核的分子机理提供支持。
- 王倩陈继征王云王学军陈新文
- 关键词：ACMNPV肌动蛋白核转运
