曾兴
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学第五临床学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SASH1基因通过p53信号通路调节乳腺癌细胞增殖被引量：4
- 2016年
- 目的探讨SASH1基因对乳腺癌细胞增殖的作用及其与p53基因的关系。方法购买134例乳腺癌组织芯片(上海芯超科技有限公司,芯片型号:HBre-Duc150Sur-01),用SASH1和p53抗体进行组织芯片免疫组织化学染色分析。构建重组质粒SASH1-PEGFP-C3(GFP-SASH1)、HA-p53-pcD NA3.0(HA-Tp53),定点突变SASH1基因上581、594、605、610位点(D581V-SASH1、W594L-SASH1、F605S-SASH1、V610E-SASH1)和p53基因上175、248、273位点(R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53)。实验分组如下:(1)将0、0.5、1.0、2.0、4.0μg的HA-Tp53单独转染或分别与2.0μg的GFP-SASH1共同转染至HEK-293T细胞,用Western blot检测p53对GFP-SASH1和endo-SASH1表达的影响。(2)将0、0.5、1.0、2.0、4.0μg的GFP-SASH1单独转染或分别与2.0μg的HA-Tp53共同转染至HEK-293T细胞,用定量RT-PCR检测p53 mRNA及蛋白表达。(3)2.0μg的HA-pcD NA3.0(空载体),野生型p53(wt-p53),突变型R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53单独转染或分别与2.0μg的GFP-SASH1共同转染至HEK-293T细胞,用Western blot检测GFP-SASH1和endo-SASH1表达。(4)将2.0μg的空载体,野生型-SASH1,突变型D581V-SASH1、W594L-SASH1、F605S-SASH1、V610E-SASH1单独转染或与2.0μg的HA-Tp53共同转染HEK-293T细胞,另设未经处理细胞为空白对照,Western blot检测HA-Tp53和endo-Tp53表达。用Spearman相关系数法对SASH1与p53免疫组织化学结果进行分析,用单因素方差分析方法比较SASH1与p53的表达量,两两比较采用LSD-t法。结果在134例人乳腺癌组织芯片中,SASH1和p53的表达呈正相关(r=0.319,P<0.001)。其中,SASH1(-)4例、(+)42例、(++)67例、(+++)20例、(++++)1例,p53(-)82例、(+)36例、(++)10例、(+++)6例。随着HA-Tp53转染剂量的增大,外源性SASH1(GFP-SASH1)和内源性SASH1(endo-SASH1)的表达水平都增高(F=205.369、178.238,P均<0.001)。随着GFP-SASH1转染剂量的逐渐增大,HA-Tp53 mRNA及蛋白表达量逐渐增加(F=67.481、506.538,P均<0.001)。突变型SASH1使内源性和外源性p53表达上
- 邝中淑曾兴王萍罗黄超马江淑陈梅李艳周定安郑晓东
- 关键词：乳腺肿瘤P53基因
- SASH1-IQGAP1-E-cadherin信号轴可能调节乳腺癌转移被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨SASH1(SAM-and SH3-domain containing 1)基因作为一个新的抑癌基因,在调节乳腺癌转移过程中的分子作用机制。方法:免疫组织化学法检测人乳腺癌组织中SASH1、含IQ模序的GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase activating protein 1,IQGAP1)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平,并分析三者之间的相关性,以及SASH1和IQGAP1表达与乳腺癌患者临床指标的相关性。构建重组质粒HA-IQGAP1-pcDNA3.0和pEGFP-C3-SASH1,并将其转染人胚胎肾细胞HEK-293T,然后采用免疫沉淀-蛋白质印迹法分析SASH1与IQGAP1的相互作用。结果:人乳腺癌组织中,SASH1与IQGAP1的表达存在相关性(P<0.05),而且二者分别与E-cadherin的表达明显相关(P值均<0.001);另外,SASH1和IQGAP1蛋白表达分别与乳腺癌的肿瘤直径和肿瘤分级有相关性(P值均<0.05),但与淋巴结转移无相关性(P值均>0.05)。成功构建重组质粒HA-IQGAP1-pcDNA3.0和pEGFP-C3-SASH1;重组质粒转染HEK-293T细胞后,发现SASH1与IQGAP1之间存在蛋白-蛋白相互作用。结论:SASH1与IQGAP1结合后可发生蛋白-蛋白相互作用,并且与E-cadherin的表达密切相关。推测SASH1可能与IQGAP1和E-cadherin形成一条新的调节乳腺癌转移的信号轴。
- 李述贺勇曾兴陈思蒙陈礼闻李璐李修红吴娜唐小淋曾晓华周定安
- 关键词：钙黏着糖蛋白类
