何阳阳
- 作品数：11 被引量：48H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黄连碱在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症药物中的应用
- 本发明公开了一类如通式(I)所示的黄连碱及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的药物用途。本发明的优益之处在于：黄连碱具有降低狼疮小鼠体内自身抗体表达水平、改善免疫功能的药理作用；具有降低狼疮小...
- 方莲花秦海林杜冠华张志辉袁天翊阎雨何阳阳陈俞材
- 文献传递
- 人白介素-6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL-6R拮抗剂筛选模型,并用Z'-因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体p ABHis-IL6R,并对IL-6R进行了分泌表达。所表达的IL-6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rh IL-6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z'-因子为0.53,满足高通量筛选的要求。ab47215能够剂量依赖性地阻断IL-6R与其配体的结合,其IC50=(0.55±0.11)μg/ml。结论建立了一种新颖而简便的IL-6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。
- 阎雨何阳阳张畅庞晓斌杜鹏孙志伟王双杜冠华
- 关键词：拮抗剂酶联免疫吸附测定
- 水杨酸甲酯糖苷在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症药物中的用途
- 本发明公开了一类如通式(1)所示的水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的药物用途。本发明中，水杨酸甲酯糖苷具有降低狼疮小鼠体内自身抗体和炎症因子的表达水平、改善免疫功能的...
- 杜冠华方莲花张东明何阳阳阎雨林溢煌吴平张慧芳
- 文献传递
- 表皮生长因子受体胞外区在哺乳动物细胞HEK293T中的分泌表达和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:融合表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法:通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果:经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5 nmol/L。结论:利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。
- 张畅唐珮何阳阳杜鹏孙志伟王双庞晓斌
- 关键词：表皮生长因子受体胞外区真核表达分泌表达结合活性
- 开胸法检测肺高血压小鼠模型右心室血液动力学指标被引量：3
- 2016年
- 目的右心导管法检测小鼠右心室血液动力学指标，操作时间长，成本高且成功率低。本研究旨在建立一种呼吸机辅助的开胸直视操作检测小鼠右心室血液动力学指标的方法，并用以评估小鼠病理生理条件下的血液动力学状态。方法雄性8周龄C57BL／6小鼠16只，采用完全随机设计法将小鼠分为对照组和低氧组，每组8只。低氧组小鼠在模拟海拔5500m环境的低压低氧舱（氧浓度10％）内持续饲养，对照组小鼠饲养于常压常氧环境中。3周后对两组小鼠进行血液动力学检测，气管插管，开胸，采用0．7mm×19mm密闭式留置针，从心尖处进针5mm测量右心室压力。结果开胸法检测小鼠右心室血液动力学指标，从气管插管到获得右心室血流参数耗时5～10min，成功率100％。对照组和低氧组小鼠在麻醉状态下心率差异无统计学意义[（306．4±11．5）次／min比（320．4±16．0）次／min，P〉0．05]。低氧组小鼠右心室收缩压高于对照组[（22．6±1．0）mmHg（1mmHg=0．133kPa）比（17．1±1．0）mmHg，P〈0．01]，右心室平均压高于对照组[（12．4±0．3）mmHg比（9．6±0．8）mmHg，P〈0．01]，右心室内压最大上升速度和下降速度的绝对值均显著大于对照组[（639．7±47．7）mmHg/s比（421．3±30．6）mmHg／s和（-496．5±40．6）mmHg／s比（-324．3±24．0）mmHg／s，P均〈0．01]。结论开胸方法检测小鼠右心室血液动力学指标，操作简便、成功率高，可以很好地反映小鼠在不同病理生理条件下的血液动力学状态。
- 袁安慧何阳阳杨淑慧李素琪叶珏胡帅邱家勇荆志成王晓建
- 关键词：高血压肺性血液动力学现象
- 高效液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中伐地那非浓度的可行性研究
- 2020年
- 目的建立一种基于高效液相色谱串联质谱技术的测定大鼠血浆中伐地那非浓度的方法,并评估其可行性。方法采集正常Sprague-Dawley大鼠血浆样本。采用Phenomenex Synergi Polar-RP 80 A色谱柱(2.0 mm×50 mm,4μm),柱温30℃,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液,流速为0.4 ml/min;质谱采用API 4000Qtrap三重四极杆质谱仪的正离子多反应监测模式监测,伐地那非和内标监测离子质荷比分别为489.3(Q1通道)/151.2(Q3通道)和466.4(Q1通道)/234.2(Q3通道);西沙必利为内标,检测大鼠血浆中添加的伐地那非浓度。然后评估该方法检测伐地那非浓度的专属性、线性及定量范围、精密度和准确度、基质效应、稳定性。结果在选定的色谱和质谱条件下,伐地那非和内标的保留时间分别为2.62和2.80 min,峰形良好。该方法在0.2~200 ng/ml浓度范围内线性良好。该方法检测伐地那非的批内精密度(%CV)和准确度(%DEV)分别在1.5%~9.7%和-6.8%~6.6%之间。批间精密度和准确度分别在3.1%~8.4%和-3.7%~4.6%之间。均在要求的范围内。本样品处理方法,伐地那非的提取回收率在88.2%~104.6%之间,符合提取回收率的考察要求。该样品处理方法,伐地那非各质控浓度经内标归一化的基质效应因子(MF)分别为1.04、0.85、1.04,变异系数(%CV)在1.7%~10.7%之间,符合基质效应的考察要求。伐地那非的短期稳定性、长期稳定性、4次冻融循环稳定性的偏差都在±15%以内,变异系数均在5%以内。结论本研究建立的高效液相色谱串联质谱法特异性好、准确性高,可用于检测大鼠血浆伐地那非浓度。
- 张汝姣何阳阳姜栋刘少飞张宇佳郑稳生吴松荆志成
- 关键词：伐地那非高效液相色谱-串联质谱法血药浓度
- 系统性红斑狼疮的细胞因子疗法研究进展被引量：12
- 2013年
- 系统性红斑狼疮是困扰着人类健康的一种自身免疫性疾病,通常发生在免疫系统自身耐受性崩溃之后,免疫系统中大量的炎症介质如细胞因子参与了该病的进程,细胞因子疗法有望成为治疗系统性红斑狼疮的新的治疗手段。本综述以细胞因子作为切入点,阐述了与系统性红斑狼疮病理进程密切相关的细胞因子的作用,以及针对该疾病的细胞因子疗法的研究进展,认为以疾病不同时期的不同细胞因子的表达水平划分疾病的活性指数,根据活性指数选择不同的细胞因子抑制剂进行个性化的治疗,或许能够取得更好的疗效。
- 何阳阳阎雨杜冠华
- 关键词：细胞因子系统性红斑狼疮细胞因子疗法自身免疫性疾病
- 水杨酸甲酯糖苷在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症药物中的用途
- 本发明公开了一类如通式(1)所示的水杨酸甲酯糖苷类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗系统性红斑狼疮及其并发症的药物用途。本发明中，水杨酸甲酯糖苷具有降低狼疮小鼠体内自身抗体和炎症因子的表达水平、改善免疫功能的...
- 杜冠华方莲花张东明何阳阳阎雨林溢煌吴平张慧芳
- 文献传递
- 基于CHO细胞定点整合技术的新型抗体呈现系统的构建
- 2012年
- 目的建立一个以CHO定点整合系统为基础的高通量抗体筛选平台,筛选获得抗VEGF高亲和力突变体抗体。方法设计并构建了基于CHO细胞定点整合系统的通用minibody展示载体,将3株亲和力已知的抗VEGF抗体(A6,A63,A657)和1个抗VEGF轻链抗体库分别呈现在CHO细胞的表面,通过Western印迹、Bia-core3000、流式细胞分析等对该展示系统进行验证和评价,并通过流式细胞分选技术对抗体库进行了细胞筛选。结果成功实现了抗VEGF抗体在CHO细胞表面的展示,流式细胞分析抗体的亲和力与Biacore测定全抗体亲和力结果一致;通过筛选获得3株抗VEGF高亲和力突变体抗体。结论建立了基于CHO定点整合技术的新型抗体库展示系统,为抗体的亲和力成熟、分子改造等突变库的构建和筛选提供了新的技术支持。
- 何阳阳刘敏李春张畅孙志伟刘志刚王双庞晓斌
- 关键词：抗体库CHO细胞高通量筛选
- 过氧化氢诱导人肺动脉内皮细胞损伤模型的建立及其氧化应激机制被引量：2
- 2017年
- 目的 建立过氧化氢（H2O2）诱导的人肺动脉内皮细胞（PAEC）损伤模型,探讨氧化应激促使PAEC结构和功能改变的分子机制.方法 采用不同浓度（25、50、100、200、400、800、1 600、3 200和6 400 μmol/L）的H2O2刺激PAEC,分别作用4、24 h后,采用CCK-8法测定PAEC活力并绘制存活曲线,采用流式细胞术检测PAEC凋亡情况,利用小分子荧光探针检测PAEC内活性氧（ROS）生成和线粒体活性,采用Western blot法检测PAEC内信号分子的磷酸化水平.结果 （1）不同浓度H2O2对PAEC活力的影响：H2O2作用4h后,PAEC的活力随着H2O2浓度的增加而降低.同时,经过计算H2O2作用4和24h后,H2O2抑制PAEC活力的IC50值分别为397.00和488.77 μmol/L.（2）H2O2对PAEC凋亡的影响：400 μmol/L的H2O2作用4h后,PAEC晚期凋亡和坏死的比率分别为（22.58 ±3.69）％和（11.86±4.27）％,而阴性对照PAEC晚期凋亡和坏死的比率仅为（3.41±1.44）％和（1.94±1.15）％,P均〈0.05.H2O2处理后PAEC存活率仅为（7.98±3.21）％,明显低于阴性对照（48.89±8.08）％,P〈0.01.但H2O2处理后PAEC与阴性对照PAEC的早期凋亡率差异并无统计学意义.（3）H2O2对PAEC内线粒体活性和ROS生成的影响：H2O2处理后PAEC ROS生成量和线粒体活性均明显高于阴性对照（P均〈0.01）.（4） H2O2对PAEC内信号传递分子蛋白含量的影响：H2O2作用后30 min,PAEC内Akt含量与阴性对照PAEC比较差异无统计学意义,而p-Akt含量则明显高于阴性对照PAEC（P 〈0.01）,同时p-JNK和p-p38含量亦均明显高于阴性对照PAEC（P均〈0.01）.结论 400μmol/L H2O2可明显损伤人PAEC,其机制可能涉及Akt、MAPK等多条信号通路.
- 叶珏何阳阳颜艺赵隽涵连天宇王晓建阎雨张思瑾杨淑慧荆志成
- 关键词：肺动脉内皮细胞氧化性应激
