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人白介素-6受体小分子拮抗剂高通量筛选模型的建立被引量：1: 2014年; 目的建立新的白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)小分子拮抗剂高通量筛选模型。方法PCR扩增IL-6R胞外区基因,将其克隆至真核表达载体构建重组质粒p ABHis-IL6R,瞬时转染HEK293T细胞进行分泌表达。利用Western印迹实验、受体配体结合实验对表达产物进行活性验证。利用二者的相互作用以及Fc片段与酶标二抗结合的特性建立基于ELISA法的IL-6R拮抗剂筛选模型,并用Z'-因子检测与已知拮抗剂ab47215对该模型的稳定性与可靠性进行评估。结果成功构建了真核表达载体p ABHis-IL6R,并对IL-6R进行了分泌表达。所表达的IL-6R能够被特异性抗体识别,能够与其配体rh IL-6特异性地结合,并表现出良好的量效关系。经测算得出,该模型的Z'-因子为0.53,满足高通量筛选的要求。ab47215能够剂量依赖性地阻断IL-6R与其配体的结合,其IC50=(0.55±0.11)μg/ml。结论建立了一种新颖而简便的IL-6R拮抗剂筛选模型,为寻找高效、低毒的小分子拮抗剂奠定了基础。; 阎雨何阳阳张畅庞晓斌杜鹏孙志伟王双杜冠华; 关键词：拮抗剂酶联免疫吸附测定

地塞米松治疗LPS诱导急性肺炎模型小鼠病理学评价方法的建立被引量：15: 2013年; 目的用地塞米松作为阳性药物,对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导急性肺炎小鼠模型建立的病理学评价方案进行验证,以期获得炎症和感染性疾病廉价易行的初步药效学评价模型。方法使用鼻腔吸入法制备小鼠LPS诱导急性肺炎模型,利用不同时间点肺炎模型小鼠肺损伤HE染色结果建立病理学分级标准,使用地塞米松作为阳性治疗药物对病理学评价方法进行验证。结果对LPS吸入后不同时间点的小鼠进行全肺取样和病理学检测,建立了0—5级肺组织损伤病理学分级评价标准,采用该标准对地塞米松作为阳性治疗药物的治疗效果进行评价,与LPS对照组相比差异显著。结论获得了针对LPS诱导急性肺炎小鼠模型建立的病理学评价方案,该方案以地塞米松作为阳性对照药物,可以用于抗炎药物的初步筛选和药效学研究。; 杨东仇玮祎张畅曾大地王双孙志伟赵德明; 关键词：地塞米松急性肺炎小鼠模型病理评分

新型重组全人源抗EGFR单克隆抗体药效和药理学机制研究: 生长因子受体(EGFR)是受体酪氨酸激酶(RTKs)ErbB家族成员,对细胞的增殖、分化、迁移和损伤修复均具有重要作用.EGFR在多种实体肿瘤中高表达,并且其高表达和异常激活影响肿瘤恶性生长的细胞功能网络,包括存活、增殖...; 王双仇玮祎张畅于晓妍曾大地孙志伟; 关键词：单克隆抗体药物表皮生长因子受体药理学机制; 文献传递

基于CHO细胞定点整合技术的新型抗体呈现系统的构建: 2012年; 目的建立一个以CHO定点整合系统为基础的高通量抗体筛选平台,筛选获得抗VEGF高亲和力突变体抗体。方法设计并构建了基于CHO细胞定点整合系统的通用minibody展示载体,将3株亲和力已知的抗VEGF抗体(A6,A63,A657)和1个抗VEGF轻链抗体库分别呈现在CHO细胞的表面,通过Western印迹、Bia-core3000、流式细胞分析等对该展示系统进行验证和评价,并通过流式细胞分选技术对抗体库进行了细胞筛选。结果成功实现了抗VEGF抗体在CHO细胞表面的展示,流式细胞分析抗体的亲和力与Biacore测定全抗体亲和力结果一致;通过筛选获得3株抗VEGF高亲和力突变体抗体。结论建立了基于CHO定点整合技术的新型抗体库展示系统,为抗体的亲和力成熟、分子改造等突变库的构建和筛选提供了新的技术支持。; 何阳阳刘敏李春张畅孙志伟刘志刚王双庞晓斌; 关键词：抗体库 CHO细胞高通量筛选

全人源P选择素抗体在急性肺炎治疗中的应用: P-selectin是细胞黏附分子选择素家族成员之一,通过与其配体相互作用参与体内多种生理和病理过程。P-selectin在诸多疾病如心血管疾病、炎症反应、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生发展中发挥着重要作用。通过阻断P-s...; 仇玮祎王双李鹤张畅俞炜源孙志伟; 文献传递

表皮生长因子受体胞外区在哺乳动物细胞HEK293T中的分泌表达和鉴定被引量：3: 2012年; 目的:融合表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法:通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果:经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5 nmol/L。结论:利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。; 张畅唐珮何阳阳杜鹏孙志伟王双庞晓斌; 关键词：表皮生长因子受体胞外区真核表达分泌表达结合活性

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张畅