林晓云
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 供职机构：温州医科大学更多>>
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- 沙眼衣原体主要外膜蛋白_(21-387)的原核表达及其免疫原性被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达和纯化,经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后,通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性,即通过ELISA法检测小鼠血清Ig G和生殖道分泌物Ig A抗体反应,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果:在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带;并经NiNTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白,免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清Ig G抗体和生殖道分泌物Ig A抗体,至第6周达到高峰,MOMP21-387组的Ig G和Ig A抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05);LDH检测结果显示,MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率,在10:1、20:1和40:1和80:1时均明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性,为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。
- 刘巧琼涂建欣林晓云熊一融朱珊丽陈韶张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白原核表达免疫原性
- 沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位的预测与鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的:预测并鉴定沙眼衣原体(Ct)Tarp蛋白的B细胞表位,为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。方法:利用生物信息学软件综合分析、预测筛选E血清型Ct Tarp蛋白的B细胞表位,获得6个潜在目的表位。将人工合成的表位肽段与弗氏佐剂充分乳化,经背部皮下多点注射途径免疫BALB/c小鼠(每次100μg/只,3只/组,共24只),间隔2周,共免疫3次。采用ELISA法检测免疫小鼠血清中Tarp蛋白特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a,以及阴道分泌物中Tarp蛋白特异性sIgA抗体;进一步采用间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Western blot法检测表位免疫的血清抗体与Tarp蛋白结合的特异性。结果:筛选并鉴定了Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位(aa171-186),该表位可以刺激小鼠产生较高水平的Tarp蛋白特异性IgG抗体和sIgA抗体,且抗体亚类以IgG1为主。免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Western blot法检测结果显示,该段表位肽免疫血清抗体可特异性识别Tarp蛋白。结论:获得了Ct Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位,为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。
- 冯燕朱珊丽林晓云薛向阳李文姝张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体B细胞表位小鼠
- 金黄色葡萄球菌蛋白A Z结构域的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2015年
- 目的:制备金黄色葡萄球菌蛋白A(Sp A)Z结构域的原核表达蛋白及其多克隆抗体,并对其进行特异性鉴定。方法:3段Sp A-Z结构域经柔性肽(GS)串联连接构成三串联体(Sp A-3Z),经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)载体,构建p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western Blot法分析鉴定;纯化的Sp A-3Z重组蛋白免疫日本大耳白兔,并分别于免疫前和免疫后采集血清,用ELISA法检测其多克隆抗体的反应和效价,并用Western Blot法分析多克隆抗体结合天然Sp A的特异性。结果:成功构建了p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒;该重组质粒在原核表达系统表达并获得纯化的Sp A-3Z重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示该蛋白的分子质量约为21 k Da,与理论分子量大小相符;日本大耳白兔经该蛋白免疫后可产生特异性的多克隆血清Ig G抗体,效价可达1:40 000;Western Blot法检测结果显示,在分子质量约42 k Da(天然Sp A蛋白)处出现单一条带,提示兔多克隆血清抗体可识别天然Sp A。结论:Sp A-3Z原核蛋白有较好的免疫原性和抗原性,制备的Sp A-3Z兔多克隆血清抗体Ig G效价高、特异性好,可进一步用于Sp A-Z相关的生物学和免疫学等功能研究。
- 林晓云侯柏龙熊一融叶璐璐杜王琪陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳
- 关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A多克隆抗体
- M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的 :制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法:将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增,以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫,收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清,用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测,进一步用免疫斑点实验检测兔多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果:M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体,效价达1:3 200,并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论:成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体,为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。
- 谭慧王冰冰卢徐涟侯柏龙林晓云刘巧琼张丽芳陈筱菲
- 关键词：多克隆抗体酶联免疫吸附试验
- EB病毒潜伏膜蛋白2多表位DNA联合多肽的免疫效应研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究HPV L1携带EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)多表位DNA联合多肽的免疫效应。方法BALB/c雌性小鼠随机分为4组。pcHPVL1-EBV LMP2DNA免疫组,肌肉注射pcDNA3.1(+)/HPVL1-EBV LMP2多表位DNA,每鼠每次100μg;DNA联合多肽免疫组:先用DNA免疫,每鼠每次50μg,同时皮下注射EBV LMP2多表位肽,每鼠每次5μg;DNA免疫对照组:肌肉免疫空载体pcDNA3.1(+),每鼠每次100μg;多肽免疫对照组:每鼠每次10μg皮下注射不相关多肽。共免疫4次,间隔2周。免疫后第7周收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA以及HPVL1特异性抗体IgG;免疫后第9周测定EBV特异性抗体IgG1与IgG2a亚类,同时采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定小鼠脾细胞CTL的杀伤活性。结果多肽联合DNA免疫组小鼠血清EBV LMP2特异性抗体IgG、IgA A值分别为1.573±0.025和0.436±0.033,单独DNA免疫组分别为1.282±0.051和0.317±0.022,差异有统计学意义(F=80.393,27.722,P<0.05);两免疫组小鼠血清HPV L1特异性IgG A值别为0.648±0.063和0.702±0.023,差异无统计学意义(F=1.952,P>0.05)。DNA免疫组IgG1和IgG2aA值别为0.723±0.023和0.594±0.084,差异无统计学意义(F=6.643,P>0.05),是混合Th1/Th2免疫反应类型;多肽联合DNA免疫组IgG1和IgG2aA值别为0.897±0.042和0.629±0.035,差异有统计学意义(F=72.306,P<0.05),是偏向Th2免疫反应类型。多肽联合DNA免疫组在效靶比为10︰1时,小鼠脾细胞CTL杀伤效应(杀伤率)为27.70%,DNA免疫组为21.50%,差异有统计学意义(F=51.559,P<0.05)。结论多肽联合DNA免疫可产生有效的CTL杀伤效应,更能发挥有效的体液免疫作用,其免疫策略可为EBV相关肿瘤的免疫治疗提供参考。
- 李文姝田晓娟林晓云刘建晓朱珊丽薛向阳张丽芳
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2多表位联合免疫
- 人宫颈癌SiHa细胞荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定被引量：6
- 2016年
- 目的:建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型,并对其成瘤特性进行分析和鉴定。方法:将5×10~6/mL、1×10~7/mL及5×10~7/mL 3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种,建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型,观察荷瘤裸鼠的成瘤率并测量肿瘤的大小,5周后取肿瘤组织经病理学方法观察其组织学特性,并采用PCR及免疫组织化学方法对肿瘤组织的HPV16E7 DNA表达进行检测。结果:3组裸小鼠接种SiHa细胞的成瘤率均为100%,5周后肿瘤大小分别达到(77.29±28.34)mm^3、(178.91±61.55)mm^3和(305.11±12.62)mm^3。3个浓度组间肿瘤体积大小差异有统计学意义(P<0.001)。病理学大体观察可见SiHa肿瘤的生长均以局部浸润为主;组织切片观察新生肿瘤细胞特点呈现体积大、核大深染及易见核分裂相的病理性特征;SiHa新生肿瘤组织经PCR检测证实了HPV16E7 DNA阳性,并经免疫组织化学检测证实了HPV16E7蛋白表达阳性。结论:成功建立了SiHa细胞荷瘤裸鼠模型,为人宫颈癌肿瘤靶向治疗及生物学特性研究提供了理想的动物模型。
- 侯柏龙杜王琪熊一融蔡一奇宋易玲林晓云薛向阳张丽芳
- 关键词：SIHA细胞
- HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备被引量：7
- 2014年
- 目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。
- 王冰冰涂建欣吕艳侯柏龙刘巧琼林晓云陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒E7蛋白多克隆抗体
- 基于HBcAg载体的沙眼衣原体主要外膜蛋白表位疫苗及其用途
- 本发明涉及乙型肝炎病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗及其用途。更具体而言，本发明涉及包括携带沙眼衣原体主要外膜蛋白的一种或数种表位的重组融合蛋白，所述的表位多肽以单表位或组合在一起的多个表位的形式插入到乙肝核心抗原(HBcAg)蛋...
- 张丽芳朱珊丽薛向阳李文姝陈韶陈俊林晓云
- 文献传递
