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张健: 作品数：52 被引量：97H指数：6; 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学自动化与计算机技术更多>>

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DNA聚合酶δ相互作用蛋白1能促进GFP蛋白的降解: 2014年; 目的证明过表达DNA聚合酶δ相互作用蛋白1(PDIP1)能否促进外源性GFP蛋白的降解。方法将HEK293细胞共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1,利用荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度,然后利用Western blot法检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系,再利用氯化铵与MG132分别进行干预,并检测GFP与PDIP1蛋白表达量的关系。结果共转染表达质粒pEGFP-C3与pCMV-myc-PDIP1的HEK293细胞绿色荧光强度明显低于单转pEGFP-C3质粒的细胞;随着PDIP1蛋白表达量的增大,GFP蛋白的表达量减少;利用MG132干预可以明显抑制PDIP1对GFP的降解,而氯化铵干预没有显示明显的效应。结论过表达PDIP1可以促进外源性GFP蛋白的降解,且这一降解是通过蛋白酶体途径进行的,提示PDIP1可能参与细胞内某些蛋白的泛素化降解。; 张波周芳亮卢芳国严杰张健; 关键词：绿色荧光蛋白降解 HEK293细胞

小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达: 2008年; 从小鼠(C57BL/6)10.5 d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为ShhN端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础.; 刘如石任道龙徐甜韩梅胡翔肖鲜张健; 关键词：SHH 基因克隆原核表达

运用染色质免疫沉淀技术筛选AP-2α的靶基因: 2008年; 在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域.染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,简称ChIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法.对与ChIP有关的实验条件进行了优化,获得了较优的实验条件,并运用ChIP实验筛选出了转录因子activatorprotein-2alpha(AP-2α)的未知靶基因,对于进一步研究AP-2α的功能和调控网络打下了基础.; 贺爱兰肖湘文孙一兵刘如石胡翔周建林张健; 关键词：靶基因 AP-2Α

脂肪细胞分化过程中AP-2α、C/EBPα和miR-122反馈环的研究: <正>AP-2α是非常重要的转录因子,基因敲除实验已经证实其与腹壁、神经管、神经、骨骼、眼睛、心脏和血管等组织器官的发育密切关联,但它对脂肪组织和细胞发育分化的影响还未受重视。有文献报道,AP-2α是调节脂肪细胞分化的关...; 李文向双林张健; 文献传递

人HTR1E基因在不同细胞系和多种组织中的表达及其功能: 2007年; 人的HTR1E基因是五羟色胺受体(HTR)家族中的一员.这个家族里面的基因都和精神分裂症、抑郁症以及人的自杀活动有关.但是对于其具体的作用机制目前研究不多.采用实时定量PCR方法分析了HTR1E基因在各个组织和不同细胞系中的表达情况,亚细胞定位发现HTR1E位于细胞膜上,萤光素酶实验分析确定HTR1E可以抑制原癌基因erbB2启动子的转录活性.这些研究结果为进一步研究HTR1E基因在疾病发生中的作用奠定了一定的基础.; 吴艳阳孙一兵刘如石甘露刘明俊贺爱兰胡翔周建林张健; 关键词：表达谱实时定量PCR 转录活性

生命科学网络信息资源及其获取被引量：2: 2003年; 随着生命科学的发展和网络技术的进步 ,生命科学网络信息资源的类型不断增加 ,数量急速增长。; 刘庆文胡翔周建林张健; 关键词：网络信息资源信息分布信息检索搜索引擎信息服务

苎麻微卫星DNA标记: 本发明涉及一种苎麻的DNA分子遗传标记，提供了15个苎麻微卫星位点的DNA序列及扩增上述15个苎麻微卫星位点的引物序列和扩增方法，15个苎麻微卫星位点用于苎麻品种分类、遗传关系分析和标记辅助育种，重复性好，是一种可靠有效...; 揭雨成蒋彦波周建林张健; 文献传递

过表达TRAF2降解外源性绿色荧光蛋白被引量：1: 2012年; TRAF2是机体免疫与炎症反应中具有重要作用的蛋白,有E3连接酶活性;GFP是一种受到激发光照射后可产生绿色荧光的蛋白,常用于蛋白质的细胞共定位研究,并显示与GFP融合表达靶蛋白在细胞中的位置.我们实验发现共转染表达质粒pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3,可引起转染细胞绿色荧光减弱.Western印迹实验证明TRAF2可以降解GFP,并且这种降解是通过蛋白酶体途径进行的.为进一步确定这种降解的特异性,在HEK293细胞中共转pCMV-myc-TRAF2与pEGFP-C3-LNX后,发现随着TRAF2表达量增加,融合蛋白GFP-LNX减少;而共转质粒pCMV-myc-TRAF2与pCMV-myc-LNX后,未发现LNX蛋白表达减少,表明TRAF2对GFP的降解具有相对特异性.GFP是人类细胞中并不存在的蛋白,TRAF2能够将其降解可能意味着TRAF2参与了细胞抗病原体感染的过程.; 张波周芳亮卢芳国严杰王成周建林张健; 关键词：绿色荧光蛋白降解

内生枯草芽孢杆菌B-001菌株抗菌肽纯化与性质被引量：8: 2007年; An antagonistic peptide,H16,produced by endophytic Bacillus subtilis B-001 was purified via ammonium sulphate precipitation,DEAE-Sepharose FF chromatography,FPLC Phenyl FF chromatography and HPLC C18 chromatography.The peptide showed strong antagonistic activity to Ralstonia solanacearum.LC-ESI-MS analysis showed molecular weight of the peptide was 7 367.4 Da,which was the same with that by SDS-PAGE.It was thermostable and not sensitive to proteinases.; 易有金刘如石孙吉康张健罗宽; 关键词：枯草芽孢杆菌抗菌肽烟草青枯病菌株青枯雷尔氏菌化学防治

KCTD10基因的表达、抗体制备及其在常见细胞系中的表达: 2006年; 人类KCTD10(channe l tetram erisation dom a in-conta in ing 10)基因属于PD IP1(polym erase de lta-interactingprote in 1)基因家族。最近的研究表明,小鼠KCTD10能同时和PCNA以及DNA聚合酶δ相互作用,并受肿瘤坏死因子α诱导;可能在诸如DNA修复、DNA复制、细胞周期调控以及人类的多种疾病中发挥重要作用,但对其确切功能和作用机制研究不多。克隆人的KCTD10基因到pQE-N3原核表达载体,在原核细胞株BL21(DE3)中表达并获得融合表达产物。获得的融合蛋白产物通过免疫新西兰大白兔获得兔抗KCTD10多克隆抗体。采用western印迹技术,用该抗体检测KCTD10基因的原核和真核表达产物,证明该抗体有较好的针对KCTD10蛋白的专一性,可用于对KCTD10的结构与功能研究。同时利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在N IH3T3细胞系中表达较高,而在HeLa、HepG2、SW 480、PanC1、MCF7等癌细胞系中表达较低,由此推测KCTD10可能在癌症的发生中起到一定的作用。; 张文峰周爱东杨利平李红张健; 关键词：WESTERN印迹实时定量PCR