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慢病毒介导的BAG-1L基因对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞的保护作用被引量：1: 2017年; 目的探讨慢病毒介导Bcl-2结合抗凋亡基因1L（BAG-1L）过表达对缺氧／复氧诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）损伤的保护作用，研究其对磷酸肌醇-3激酶／丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/AKT）通路的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞，取对数生长期细胞分为重组慢病毒感染组（感染携带BAG-1L基因及荧光蛋白基因的重组慢病毒）、载体对照组（感染携带荧光蛋白基因但不携带BAG-1L基因的慢病毒）及细胞对照组（未感染慢病毒）。感染48h后采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测靶细胞BAG-1L的表达；3组细胞经缺氧8h／复氧24h处理后，采用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性；采用别藻蓝蛋白标记的膜联蛋白V／7-氨基放线菌素D（Annexin V-APC／7-AAD）双染法检测细胞凋亡，并进行流式分析；采用Western Blot试验检测细胞BAG-1L、热休克蛋白70（HSP70）、AKT及磷酸化AKT（p-AKT）的蛋白表达。结果重组慢病毒感染48h后可观察到外源性BAG-1L特异性蛋白条带，而细胞对照组和载体对照组无此特异性蛋白条带。经缺氧，复氧处理后，重组慢病毒感染组细胞活性较细胞对照组和载体对照组均明显增高（A值：0．689±0．036比0．425±0．013、0．400±0．012），细胞凋亡明显减少[凋亡率：（26．97±1．82）％比（36．60±1．45）％、（35．77±3．74）％]，BAG-1L、HSPT0、P-AKT蛋白表达水平明显升高（BAG-1L蛋白（灰度值）：2．405±0．167比0．529±0．141、0．601±0．099，HSP70蛋白（灰度值）：0．997±0．123比0．634±0．091、0．584±0．106，p-AKT蛋白（灰度值）：1．234±0．118比0．661±0．210、0．712±0．199，均P〈0．01]；而AKT蛋白表达虽高于细胞对照组和载体对照组（灰度值：1．103±0．269比0．646±0．188、0.791±0．326），但差异无统计学意义（均P〉O．05）。细胞对照组和载体对照组各指; 王芸李庆淑贾超谢春雨宋砚坤张楠曲彦; 关键词：抗凋亡 P13K/AKT通路

HSP70沉默表达对缺氧状态下SH-SY5Y细胞凋亡的影响及机制研究: 2017年; 缺氧性脑病是人类死亡的重要原因，且发病呈逐年增高的趋势。虽然对缺氧性脑病的研究已涉及多方面，但因其发病机理复杂、部位特殊，仍无理想治疗药物。因此，寻求防治缺氧性脑病的方法已成为刻不容缓的任务。有研究表明，外源性HSP70表达可有效减轻神经元缺氧再复氧损伤的程度，但其作用机制尚不明确。本实验采用RNA干扰技术沉默HSP70，观察其对缺氧状态下神经细胞凋亡及BAG-1、Caspase-3、NF—κB表达的影响，进一步探讨HSP70在缺氧性脑病中的保护作用及机制。; 谢春雨谢伟峰李庆淑王芸宋砚坤张楠胡丹曲彦; 关键词：HSP70表达缺氧状态 SH-SY5Y 缺氧性脑病缺氧再复氧损伤 RNA干扰技术

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张楠

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