汪超
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划重庆市渝中区科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高氧肺损伤幼鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞蛋白质组学变化的相关研究被引量：2
- 2019年
- 目的通过蛋白质组学研究探讨高氧暴露后幼鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的损伤机制。方法将早产SD大鼠原代AECⅡ细胞分为常氧组和高氧组,分别置于常氧(21%O2)和高氧(95%O2)中培养24h,于倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达水平,以保证高氧模型的成功建立;收集AECⅡ细胞总蛋白,采用串联质谱标签(TMT)标记定量蛋白质组技术检测其蛋白谱,以高氧暴露后差异倍数(FC)>1.5、P<0.05双标准筛选差异蛋白,并对其进行生物信息学分析;依据分析结果,将AECⅡ细胞分为常氧组、高氧组及高氧+MW167组〔细胞置于含95%O2的氧舱前30min加入10μmol/L的γ泌肽酶抑制剂MW167〕,培养24h后,用CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测细胞活性,用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Notch通路下游蛋白毛状蛋白(Hes1)和促凋亡蛋白Bax的mRNA表达。结果①光镜下观察,常氧组细胞明显增殖、延展,胞质颗粒物质丰富;高氧组细胞核固缩,胞质内颗粒物质明显减少。与常氧组相比,高氧组细胞caspase-3蛋白表达明显增高,Bcl-2蛋白表达明显降低(caspase-3/GAPDH:1.352±0.086比0.769±0.080,Bcl-2/GAPDH:0.614±0.060比1.361±0.078,均P<0.01)。②蛋白质组学鉴定出差异蛋白162个,其中高氧暴露后上调的差异蛋白主要参与各种刺激的应答,定位于胞外区;高氧暴露后下调的差异蛋白主要与物质合成相关,定位于细胞基质区域。对差异蛋白通路富集分析(KEGGPathway分析)结果表明,细胞色素P450代谢、线粒体氧化磷酸化、Notch信号通路等可能与高氧损伤AECⅡ细胞机制相关。③与常氧组比较,高氧组AECⅡ细胞活性显著下降,Hes1、BaxmRNA表达水平明显升高〔细胞活性(A值):0.060±0.003比1.058±0.017,Hes1mRNA(2^-ΔΔCt):2.235±0.606比1.144±0.107,BaxmRNA(2^-
- 鲁雪汪超张超肖长雪梁木林许峰
- 关键词：高氧蛋白质组学
- 小香猪放射性创面模型的制备被引量：2
- 2017年
- 目的制备一种小香猪放射性创面的动物实验模型并观察病理变化，以期用于开展放射性创面相关疾病的在体研究。方法选取8头成年巴马小香猪，按随机数字表法均分为正常对照组、实验组，实验组又分为10，20及30Gy组，每组16个创面。实验组采用X射线直线加速器进行照射，并在照射部位使用打孔器制备边长4cm的全层皮肤缺损，制备小香猪放射性创面模型。每隔1周观察创面愈合情况；采用RT-PCR检测35d各组创面组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和转化生长因子-β（TGF-β）的表达变化；Westernblot方法检测35d后各组创面组织血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）和Ⅰ型胶原的表达变化；HE染色观察35d后各组创面组织病理学变化。结果正常皮肤创面在35d达到愈合状态，但20Gy组和30Gy组在63d仍未愈合，随着射线剂量增加创面愈合程度逐渐减弱。RT—PCR检测结果显示，TNF-αmRNA表达水平正常对照组为0．315±0．007，10Gy组为0．984±0．211，20Gy组为1．140±0．088，30Cy组为0．471±0．030；TGF-βmRNA表达水平正常对照组为0．402±0．018，10Gy组为1．707±0．147，20Gy组为1．933±0．078，30Gy组为0．968±0．084。与正常对照组比较，20Gy组TNF-α和TGF-βmRNA表达水平明显升高（P〈0．05）。Westernblot检测结果显示，20Gy组与正常对照组比较，CD31和Ⅰ型胶原的表达均受到抑制（P〈0．05）。HE染色结果显示，35d后20Gy组创面组织上皮化和肉芽组织再生受到影响。结论经过20GyX射线局部照射后制备的小香猪皮肤全层缺损创面能真实有效地模拟放射性创面，可开展放射性创面相关疾病病理生理及治疗干预的在体实验研究。
- 李晓明刘苹汪超杨佳佳张波
- 关键词：溃疡动物
- 负压创面治疗术对大鼠脂肪干细胞迁移行为的影响
- 2017年
- 目的探讨负压创面治疗术(NPWT)对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)迁移行为的影响。方法 8头体质量为(20±2)kg巴马小香猪,分别接受假手术(A组,n=16)、持续负压吸引(B组,n=8)和间歇负压吸引(C组,n=8),治疗72h后观察3个月。细胞水平观察NPWT对ADSCs迁移行为的影响,提取大鼠ADSCs,采用8h持续负压吸引和间歇负压作用于ADSCs,Transwell检测ADSCs迁移能力,MTT检测细胞增殖能力,Western blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。结果 B组和C组创面愈合效果明显优于A组;与A组比较,B、C组ADSCs细胞迁移数量差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),而细胞增殖差异均无统计学意义(P>0.05);HIF-1α表达与ADSCs细胞迁移结果一致。结论 NPWT通过上调HIF-1α蛋白表达进而促进大鼠ADSCs迁移。
- 李晓明刘苹汪超杨佳佳姚仕采张波
- 关键词：脂肪干细胞迁移
- 过表达KLF4对小鼠成骨细胞成骨分化的影响
- 2017年
- 目的探讨重组腺病毒介导的肠富集Krüppel样因子(Krüppel like factor 4,KLF4)基因转染后对小鼠成骨细胞成骨分化的影响。方法采用酶消化法分离培养小鼠原代成骨细胞,经成骨诱导培养21 d后行茜素红染色。利用pHBAd-EF1-MCS-GFP系统构建携有KLF4的重组腺病毒载体(Ad-KLF4)。不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)Ad-KLF4转染成骨细胞后流式细胞仪检测转染效率。将成骨细胞随机分为对照组(未转染组)、KLF4组(Ad-KLF4转染)和GFP组(Ad-GFP转染)。Western blot检测小鼠成骨细胞中KLF4蛋白的表达;MTT检测细胞增殖;Real-time PCR检测成骨相关基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、核心蛋白结合因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)的表达。结果倒置显微镜下可见成骨细胞呈多边形、立方形等,茜素红染色示大量红色钙化结节的形成。经酶切鉴定、基因测序成功构建携带KLF4基因的重组腺病毒载体(Ad-KLF4)。成骨细胞经最佳MOI(100 PFU/m L)处理后,与对照组及GFP组比较,KLF4组可检测到KLF4蛋白及mRNA水平显著上升(P<0.01);成骨细胞增殖明显上升(P<0.05,P<0.01);成骨分化相关基因ALP、RUNX2、BSP的表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论腺病毒介导的KLF4基因转染成骨细胞后可促进成骨细胞增殖,抑制其成骨分化,从而抑制骨形成。
- 杨佳佳刘苹徐倩刘志华李晓明汪超张波邓蔓菁
- 关键词：KLF4过表达腺病毒载体成骨细胞小鼠
- 体内外微环境对大鼠脂肪来源干细胞干性维持的影响及机制研究
- 背景：脂肪来源干细胞（Adipose-derived stromalcells, ADSCs）是应用于组织工程和细胞治疗的一类重要的间充质干细胞（Mesenchymal stromalcells, MSCs）。然而，伴随...
- 汪超
- 关键词：脂肪来源干细胞胰岛素样生长因子2脂肪组织生物学特性
