目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促肝细胞凋亡中的作用.方法:动物水平:实验分为4组,每组12只小鼠.正常对照组:5周龄♂鼠(SPF级C57BL/6J)饲以普通饮食;Apo E-/-对照组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以普通饮食;Apo E-/-高蛋氨酸组:5周龄♂纯合子Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食(普通饮食中加入1.7%蛋氨酸);Apo E-/-叶酸和维生素B12干预组:5周龄♂纯合子A p o E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食加0.006%叶酸和0.0004%维生素B12.喂养14 wk后,全自动生化分析仪测定血清Hcy水平;透射电镜、DAPI染色观察肝组织凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.细胞水平:分为3组:正常对照组(0μmol/L Hcy);高同型半胱氨酸(hyperhomocysteinemia,HHcy)组(100μmol/L Hcy);干预组(100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12);干预肝细胞48 h.Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术检测肝细胞凋亡水平的变化;实时定量聚合酶链反应(q RTPCR)及Western blot分别检测MST1 m RNA和蛋白表达水平.结果:动物水平:(1)各组小鼠喂养20 wk后,测定血清Hcy水平,Apo E-/-高蛋氨酸组血清H c y水平分别是正常对照组和A p o E-/-对照组的2.3倍和1.9倍(P<0.01).干预组血清Hcy水平较Apo E-/-高蛋氨酸组降低28%(P<0.01),提示造HHcy模型成功;(2)电镜结果显示,A p o E-/-高蛋氨酸组小鼠肝细胞出现凋亡的倾向,染色质凝聚浓缩或边缘化,线粒体肿胀或浓缩、嵴断裂或变短,粗面内质网和滑面内质网明显肿胀、断裂、连贯性破坏、核糖体脱落,糖原溶解;(3)DAPI染色后观察,正常对照组和Apo E-/-对照组中细胞核大小均一、核圆,核膜光滑;Apo E-/-高蛋氨酸饮食组一些细胞出现核膜皱缩、细胞核呈现出各种不规则形状,提示可能存在凋亡;Apo E-/-干预组较Apo E-/-高蛋氨酸组细胞核损伤有所减轻;(4)与正常对照组和Apo E-/-对照组相比,Apo E-/-高蛋氨
目的探讨rs893006和rs11942223位点与高尿酸血症的关系,为高尿酸血症的群体遗传学研究以及防治提供依据。方法在某体检机构确定364例高尿酸血症患者为病例组,按性别、民族、年龄进行1∶1匹配,选择364例健康个体为对照组,采用Sequenom Mass ARRAY i PLEX GOLD技术检测两组中单核苷酸多态性,通过多因子降维法(multifactor dimensionality reduction,MDR)分析基因位点和体质指数(body mass index,BMI)的交互作用。结果病例组的肌酐、总胆固醇、甘油三酯、收缩压和BMI较对照组高,差异均有统计学意义(均有P<0.05)。在男性中,rs893006位点基因型频率和等位基因频率在两组中的差异均有统计学意义(X_1~2=6.372,P=0.041;X_2~2=4.935,P=0.026);在男性不同遗传模型中,rs893006位点的G等位基因为保护因素,携带GG+GT基因型发生高尿酸血症的风险是TT基因型的0.405倍。采用MDR分析表明:BMI和rs893006及rs11942223位点之间可能存在较弱的协同作用,rs893006和rs11942223位点可能存在明显的拮抗作用,携带高危基因型群体发生高尿酸血症的风险是低危基因型群体的1.99倍(X^2=12.499,P<0.001)。结论 rs893006位点基因的多态性与男性高尿酸血症的发病有关联,位点rs893006和rs11942223与BMI之间存在交互作用。
目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten, PTEN)启动子区DNA甲基化的影响。方法原代培养血管平滑肌细胞(VSMCs),100 M Hcy刺激48h后,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTEN mRNA表达水平的变化,western blot检测PTEN蛋白表达变化;生物信息学分析PTEN启动子区CpG岛,巢式降落时甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测PTEN DNA甲基化水平。结果与正常对照组相比(0 M Hcy),给予100 M Hcy刺激后,VSMCs中PTEN mRNA及蛋白表达水平均降低;其启动子区存在数个CpG岛,其DNA甲基化水平升高。结论 Hcy可下调VSMCs中PTEN的表达,而PTEN DNA启动子区的高甲基化可能在这一过程中起到关键调控作用。
