戴琨
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 供职机构：齐鲁工业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 重组大肠杆菌(BL21)产海藻糖合酶过程优化
- 海藻糖是一种特殊的二糖，具有良好的生物学功能，有较好的保湿功能、抗干旱功能、耐渗透压等性质，因此在食品、医药、化妆品、农业等领域得到广泛应用，并具有较好的安全性。目前有海藻糖葡糖基转移合成酶（呦TreT）途径、海藻糖合酶...
- 戴琨
- 关键词：海藻糖合酶大肠杆菌酶学性质发酵条件
- 乙酸对重组大肠杆菌BL21产酶的影响及作用机理研究被引量：2
- 2015年
- 旨在研究发酵过程中产生的乙酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET15b-Tre S的生长以及重组海藻糖合酶基因表达的影响,并对其作用机理进行探讨。通过外源添加乙酸(钠)的方法,研究了乙酸钠对重组菌BL21(DE3)/p ET15b-Tre S生长曲线的影响;利用环境扫描电子显微镜,观察了重组菌形态的变化情况;通过测定菌液的电导率值变化、菌液上清中OD260的变化,研究了乙酸(钠)对菌体细胞膜渗透性、完整性的影响;通过测定菌液上清中β-半乳糖苷酶的活性检测了乙酸钠对菌体细胞内膜的影响;利用荧光分析法检测了乙酸对菌体膜蛋白构象的影响;采用SDS-PAGE电泳研究了乙酸钠对菌体重组海藻糖合酶表达量的影响。结果表明,乙酸(钠)会对重组菌的生长产生一定的抑制作用,可以导致菌体细胞的表面出现凹陷、皱缩;并会影响细胞膜的渗透性、完整性,使得一些细胞内容物发生泄漏;影响细胞膜上的膜蛋白构象,对膜的结构造成一定程度的破坏;对重组海藻糖合酶的表达产生影响。乙酸(钠)对重组菌菌体的生长及重组海藻糖合酶基因的表达有影响,并且菌体细胞膜是其作用的一个靶点。
- 戴琨王腾飞郝昭程汤丹丹刘红娟王瑞明
- 关键词：乙酸重组大肠杆菌抑菌机理海藻糖合酶
- 10-HDA对金黄色葡萄球菌的抑菌机理研究被引量：10
- 2014年
- 利用倍半稀释法确定10-HDA对金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度为0.062 mg/m L。通过对金黄色葡萄球菌生长曲线、细胞膜通透性、细胞超微结构、细胞代谢、菌体蛋白表达的影响研究,探讨10-HDA对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果表明10-HDA可破坏金黄色葡萄球菌细胞的完整性,使细胞膜通透性增加,胞内大量离子以及具有紫外吸收的大分子物质泄漏,细胞代谢发生紊乱。原子力显微镜结果表明,10-HDA可破坏菌体细胞结构,导致细胞表面凹陷,形成褶皱。SDS-PAGE电泳结果显示,10-HDA对金黄色葡萄球菌蛋白表达有明显影响,可抑制部分蛋白的正常表达。结论:10-HDA通过使金黄色葡萄球菌细胞膜通透性增加,破坏菌体正常形态及代谢活力,进而使细胞生长受到抑制,最终导致死亡。
- 李俊霖杨晓慧王腾飞郝昭程戴琨王瑞明
- 关键词：10-HDA金黄色葡萄球菌抑菌机理细胞膜
- 拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2015年
- 硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat A,经Eco RⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒p PICZαA-At Fat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建At Fat A的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母At Fat A重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中这一比例仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。
- 郝昭程王腾飞李忠奎郝梓凯戴琨王瑞明
- 关键词：拟南芥毕赤酵母
- 响应面法优化大肠杆菌产海藻糖合酶发酵培养基被引量：5
- 2015年
- 以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HPO4。用最陡爬坡实验逼近以上三种因素的最大响应面区域后,采用Box-Behnken进行三因素三水平的设计以及响应面分析,获得最佳产海藻糖合酶的培养基。结果表明,发酵大肠杆菌的最佳培养基配方为:葡萄糖7.2g/L,酵母浸粉6.6g/L,蛋白胨10g/L,(NH4)2SO45g/L,K2HPO415.7g/L,KH2PO44g/L,Mg SO4·7H2O1.6g/L,微量元素混合液0.5m L/L。在此条件下进行产酶重复实验5次,海藻糖合酶酶活为65U/mg,比优化前提高了91.2%。
- 刘红娟王腾飞汤丹丹王升戴琨王瑞明
- 关键词：大肠杆菌海藻糖合酶PLACKETT-BURMAN设计响应面法
