王虓宇
- 作品数：10 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项昆明市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗毒种的遗传稳定性被引量：5
- 2016年
- 目的分析Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliomyelitis vaccine,sabin strain,s IPV）毒种（亚主种子、工作种子）及疫苗代次病毒（SO＋4）的遗传稳定性。方法比较疫苗株SabinⅠ、Ⅱ型及PfizerⅢ型亚主种子、工作种子及疫苗代次病毒的感染性滴度及D抗原含量的变化情况,并对上述病毒进行全基因组测序。结果各代次Sabin株病毒滴度均维持在7.62-8.62 lg CCID50/ml,D抗原含量均维持在30-128 DU/ml。与Gen Bank上登录的SabinⅠ（AY184219.1）、Ⅱ（AY184220.1）、Ⅲ型（AY184221.1）减毒株原始种子（SO）基因序列相比,Sabin株亚主种子（SO＋2）、工作种子（SO＋3）及疫苗代次病毒（SO＋4）均未出现碱基突变。结论 s IPV毒种及疫苗代次病毒的全基因序列与原始种子相比,均未发生变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性。
- 邓燕朱云梁海孝杨璐洁罗娜王虓宇王海杨卉娟徐明珏杨净思孙明波
- 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗全基因组测序
- 两种凝胶过滤介质纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒效果的比较被引量：2
- 2017年
- 目的比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗原及蛋白含量,计算比活性、蛋白去除率及抗原回收率,确定病毒峰收集范围。取抗原含量最高的病毒收获液,利用DEAE Sepharose FF离子交换填料进行纯化后,检测Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量。结果 Sepharose 6FF填料按6%柱体积上样进行凝胶纯化,纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液抗原回收率均值分别为78.69%、78.03%和78.37%,与Sepharose CL-6B填料按3%柱体积上样(77.29%、78.60%和77.36%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种填料纯化的各型收获液再经离子交换纯化后,蛋白去除率、比活性、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求,两种填料纯化的各型收获液比活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用Sepharose 6FF纯化的各型病毒纯化液抗原回收率和比活性与Sepharose CL-6B无明显差异,但可以减少纯化的上样次数,大幅提高纯化效率,可用Sepharose 6FF替换Sepharose CL-6B。
- 王虓宇朱云沈武玲平玲蔡玮孙明波
- 关键词：脊髓灰质炎病毒层析纯化凝胶过滤离子交换
- 一种成人青少年用无细胞百白破联合疫苗及其制备方法
- 本发明属于疫苗制备技术领域，本发明提供了一种成人青少年用无细胞百白破联合疫苗及其制备方法。本发明提供的联合疫苗以0.85～0.95wt％浓度的氯化钠溶液为溶剂，包括如下浓度的组分：百日咳毒素10～20μg/mL，百日咳丝...
- 梁疆莉孙明波马艳顾琴蔡路奎李婧妍姬秋彦姬光高娜王虓宇廖宏玮胡文著温嘉纳
- DTacP-sIPV或DTacP-IPV/Hib基础免疫大鼠后加强免疫百白破联合疫苗Tdap的体液免疫评价被引量：1
- 2021年
- 目的观察组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(DTacP-sIPV)或无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTacP-IPV/Hib)基础免疫大鼠后加强免疫破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗(Tdap)是否产生免疫加强效果,为候选青少年及成人Tdap疫苗提供临床前研究参考。方法将自主研发的DTacP-sIPV和已上市的DTacP-IPV/Hib按0、1、2月3剂免疫程序分别免疫Wistar大鼠,检测免疫前和每剂次免疫后各组大鼠血清中各组分抗体水平。基础免疫完成10个月后,用候选Tdap加强免疫1次,并检测加强免疫前和免疫1个月、6个月后血清中各组分抗体水平。结果3剂次基础免疫1个月后,DTacP-sIPV组抗白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)、抗破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)、抗百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、抗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)和抗百日咳黏附素(pertactin,PRN)抗体的几何平均滴度(GMT,Log2)分别为17.41、18.34、18.11、19.93、13.91,血清阳转率均达到100%;基础免疫10个月后,抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.17、14.26、13.60、14.51、10.39,血清阳转率维持在89%以上。Tdap加强免疫1个月后,DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA抗体的GMT分别为16.49和17.26、16.80和17.63、16.70和17.74、18.48和19.26,血清阳转率均达到100%,组间差异无统计学意义(P均>0.05);抗PRN抗体的GMT分别为13.07和11.00,血清阳转率为100%和88%,DTacP-sIPV组高于DTacP-IPV/Hib组(P<0.05)。Tdap加强免疫6个月后,DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.74和14.87、15.07和15.14、14.84和15.73、16.62和16.37、11.44和9.96,血清阳转率维持在88%以上。结论候选疫苗Tdap在基础免疫接种DTacP-sIPV和DTacP-IPV/Hib的Wistar大鼠模型加强免疫中可诱导产生良好的体液免疫应答,但抗体滴度�
- 蔡路奎李婧妍顾琴马艳高娜姬秋彦温嘉纳廖宏玮王虓宇姬光胡文著史荔孙明波梁疆莉
- 关键词：TDAP免疫
- 一种白喉杆菌的培养基组合及白喉类毒素的制备方法
- 本发明涉及一种白喉杆菌的培养基组合及白喉类毒素的制备方法，属于微生物培养技术领域，培养基组合包括复苏培养基、传代培养基、产毒培养基以及Ⅰ号生长液、Ⅱ号生长液；白喉类毒素的制备方法包括复苏培养、传二代培养、传三代培养、产毒...
- 温嘉纳杨净思王虓宇梁疆莉廖宏玮姬光高娜顾琴蔡路奎马艳胡文著赵婷
- 去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素纯化液中内毒素TritonX-114液相分离法的建立及其效果评价被引量：1
- 2022年
- 目的建立去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)纯化液中内毒素的TritonX-114液相分离法,并评价其效果。方法以影响TritonX-114液相分离法效果的TritonX-114加入量、4℃混匀时间、37℃分层时间、25℃16743×g离心时间为试验因素,每个因素设计3个水平,通过正交试验设计12组试验。每组试验获得的样品均检测蛋白回收率,以蛋白回收率最高的条件为最佳。采用最佳条件去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素,检测FHA蛋白含量、内毒素含量及TritonX-114残留量。结果TritonX-114液相分离法最佳条件:TritonX-114加入量为1%,4℃混匀时间为30 min,37℃分层时间为60 min,25℃16743×g离心时间为10 min。最佳条件下去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素后,内毒素含量均<0.25 EU/mL,TritonX-114残留量均值为0.183%,蛋白回收率均值为91.04%。结论TritonX-114液相分离法能够有效去除无细胞百日咳疫苗FHA纯化液中的内毒素,且方法耗时短,操作简便。
- 温嘉纳王虓宇张光贤陈林涛张晓华赵宸李娜孙明波梁疆莉
- 关键词：百日咳疫苗内毒素丝状血凝素
- 生物反应器微载体系统培养Sabin株脊髓灰质炎病毒条件的优化被引量：2
- 2017年
- 目的优化生物反应器微载体系统培养Sabin株脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)的条件,以提高Sabin株PV产量。方法应用搅拌式生物反应器培养PV,对其进行Vero细胞培养密度、病毒培养温度及病毒接种MOI条件的优化,收获病毒液后,检测病毒D抗原含量和感染性滴度,并进行全基因组深度测序。结果 9.0 g/L微载体培养Vero细胞得到病毒D抗原含量显著高于低微载体浓度培养结果(P<0.01);病毒D抗原含量在34℃培养时最高(P<0.01);病毒D抗原含量在MOI 0.050接种时最高(P<0.05),MOI 0.010和MOI 0.005时无明显差异。SabinⅠ型480、525和Ⅲ型Pfizer株472、2 493位点突变率随着细胞培养密度(微载体浓度)的增加而增加;提高病毒培养温度以及改变病毒MOI,大多数毒力相关位点突变率无明显变化。结论提高细胞培养密度、以MOI 0.050接种病毒以及34℃培养病毒均有利于提高病毒产量。
- 章孟学周健杨耀云胡文著杨璐洁王虓宇赖超彭佳孙明波杨卉娟
- 关键词：生物反应器脊髓灰质炎病毒
- DTacP-sIPV联合疫苗在模拟运输振动条件下的稳定性评价
- 2024年
- 目的评价组分无细胞百日咳-白喉-破伤风(百白破)(diphtheria,tetanus,component acellular pertussis,DTacP)-Sabin株灭活脊髓灰质炎病毒(Sabin strain inactivated poliovirus,sIPV)联合疫苗在模拟运输振动条件下的稳定性.方法选取3批DTacP-sIPV,设计振动条件模拟疫苗运输过程进行稳定性评价.分别于振动前和振动后取样,按照中国药典2020年版三部和内部制造检定规程要求进行成品检测(包括外观、装量、pH、渗透压摩尔浓度、铝含量、游离甲醛含量、戊二醛含量、鉴别、sIPVD抗原含量、百白破效价、无菌、内毒素含量、特异性毒性、异常毒性和毒性逆转检测)、sIPV效力试验、Zeta电位测定、上清液中抗原测定及电子显微镜观察.结果振动前后,3批DTacP-sIPV的检测结果均符合质量标准要求,百白破效价与D抗原水平以及sIPV效力试验结果差异无统计学意义(t值分别在0.21~0.73、0.05~1.34和0.16~1.90,P值均>0.05);Zeta电位以及上清液中抗原(百日咳毒素、丝状血凝素、黏附素)含量与振动前结果差异无统计学意义(t值分别为0.49和0.20~0.80,P值均>0.05);电子显微镜观察结果与振动前比较无明显变化.结论DTacP-sIPV联合疫苗在模拟运输振动条件下稳定性良好.
- 李婧妍蔡路奎梁疆莉高娜王虓宇顾琴姬光姬秋彦杨净思
- 关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗联合疫苗
- 4种天然环二核苷酸作为黏膜佐剂的效果比较
- 2022年
- 目的比较4种不同来源的天然环二核苷酸(cyclic dinucleotide,CDN)作为黏膜佐剂诱导小鼠产生免疫应答的差异,以期筛选黏膜免疫候选疫苗佐剂。方法用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)作为抗原,分别以4种不同的CDN(c-di-GMP、c-di-AMP、3',3'-cGAMP、2',3'-cGAMP)作为佐剂,于第0、14、28天滴鼻免疫小鼠,20μL/只,每个鼻孔10μL。第3次免疫后第14天,ELISA法检测小鼠血清、鼻灌洗液(nasal lavage fluid,NLF)及肺灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的IgA和IgG水平;ELISpot检测小鼠肺组织和脾组织中分泌IgA、IgG、IFNγ、IL-4或IL-17的细胞数量。结果4种CDN作为黏膜佐剂均能有效提高免疫后小鼠血清、NLF及BALF中IgA和IgG水平;其中,3',3'-cGAMP相较于c-di-AMP可有效提高NLF中IgG水平;与2',3'-cGAMP相比,c-di-AMP和3',3'-cGAMP均可提高血清中IgA的产生;而c-di-GMP在血清中诱导产生的IgG2a水平高于2',3'-cGAMP。c-di-AMP和c-diGMP相较于2',3'-cGAMP和3',3'-cGAMP,能诱导有效的Th1相关免疫反应。结论4种不同来源的CDN可增强小鼠系统性免疫和黏膜免疫应答,c-di-AMP和c-di-GMP能促进Th1和Th17细胞类型的免疫反应,可作为黏膜免疫候选佐剂。
- 蔡秋宇江文文王虓宇蔡路奎蔡路奎孙明波史荔
- 关键词：佐剂体液免疫细胞免疫黏膜免疫
- 一种白喉杆菌的培养基组合及白喉类毒素的制备方法
- 本发明涉及一种白喉杆菌的培养基组合及白喉类毒素的制备方法，属于微生物培养技术领域，培养基组合包括复苏培养基、传代培养基、产毒培养基以及Ⅰ号生长液、Ⅱ号生长液；白喉类毒素的制备方法包括复苏培养、传二代培养、传三代培养、产毒...
- 温嘉纳杨净思王虓宇梁疆莉廖宏玮姬光高娜顾琴蔡路奎马艳胡文著赵婷
