吕坤
- 作品数：30 被引量：117H指数：7
- 供职机构：皖南医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型的建立及其意义被引量：13
- 2011年
- 目的建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型，观察人正常颈椎椎体和退变颈椎椎体终板软骨细胞的形态及表征。方法选择2010年7月至2011年7月49例颈椎骨折、脱位（19例）及颈椎病（30例）患者术中取出的颈椎终板软骨，用酶消化法分别分离培养人正常颈椎椎体终板软骨细胞（对照组）和退变颈椎椎体终板软骨细胞（颈椎病组）；用倒置显微镜和HE染色法观察细胞形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线；甲苯蓝染色及反转录-PCR（RT—PCR）法对终板软骨细胞进行鉴定；RT—PCR法检测终板软骨细胞特征性基因蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Ⅰ型胶原的表达。结果人颈椎椎体终板软骨细胞表达特征性蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Ⅰ型胶原，其生长情况及细胞表型类似于关节软骨细胞。对照组原代终板软骨细胞以多角形为主，增殖速度较快；而颈椎病组原代终板软骨细胞以梭形为主，细胞增殖速度较慢。颈椎病组原代终板软骨细胞表达的蛋白多糖基因（0．695±0．052）和Ⅱ型胶原基因（0．726±0．035）均低于对照组（0．950±0．032、0．907±0．078，t=7．263、3．681，P=0．002、0．021），Ⅰ型胶原基因则高于对照组（0．795±0．028比0．552±0．070，t=-5．560，P=0．005）。结论成功建立了人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型，为椎间盘退变机制研究提供了较好的细胞学基础，解决了以前一直以动物细胞模型为研究对象的局限性。
- 徐宏光彭红心程加峰吕坤
- 关键词：软骨细胞蛋白聚糖类胶原
- 过敏性哮喘患者外周血CD4^+ T细胞中miR-155的表达及临床意义被引量：12
- 2012年
- 目的:探讨过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155及其前体基因BIC的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测不同严重程度哮喘患者50例及健康对照20例外周血CD4+T细胞中BIC及miR-155的表达水平,并且与哮喘患者临床指标进行相关性分析;运用过表达或抑制,探讨miR-155在CD4+T细胞体外分化中的作用。结果:哮喘患者组BIC及miR-155的表达较对照组显著降低(P<0.01),中、重度哮喘患者的BIC表达均低于对照组(P<0.05),轻、中、重度哮喘患者的miR-155表达显著低于对照组(P<0.01);组间比较发现,轻、中、重度哮喘患者的BIC表达无统计学意义,而重度哮喘患者miR-155的表达较轻度哮喘组有明显下降(P<0.05);miR-155的表达与用力呼气第1秒量之间呈正相关(P<0.01);miR-155过表达促进CD4+T细胞向Th1分化,而抑制miR-155的表达则促进CD4+T细胞向Th2分化。结论:过敏性哮喘患者外周血CD4+T细胞中miR-155表达下调,其表达水平与哮喘严重程度相关,提示miR-155调控CD4+T细胞分化在哮喘中发挥重要作用。
- 张莺莺钟民张梦莹吕坤
- 关键词：过敏性哮喘MIR-155BIC
- 豆腐果苷对慢性应激小鼠海马神经元再生的影响被引量：3
- 2012年
- 目的研究豆腐果苷对慢性应激小鼠海马神经元再生的影响,探讨其抗抑郁作用的可能机制。方法给予小鼠多种慢性不可预知性应激刺激,建立小鼠抑郁模型,刺激前30 min给予豆腐果苷(10、20、40 mg.kg-1,ig),连续28 d。用免疫组化实验检测海马齿状回神经前体细胞分裂及脑源性神经营养因子(BDNF)表达,Western蛋白印迹法检测海马BDNF蛋白表达水平。结果免疫组化显示,慢性应激28 d小鼠海马齿状回神经前体细胞分裂减少,同时BDNF水平低下,均表现为阳性棕色颗粒缺失,豆腐果苷或盐酸氟西汀则明显增加神经前体细胞的分裂,并上调BDNF蛋白表达,提高BDNF水平。结论豆腐果苷对慢性应激小鼠的抗抑郁作用机制可能与促进海马齿状回神经前体细胞增殖,提高BDNF水平有关。
- 童九翠吕坤杨斌陈艾东贾元威钟民江思艳
- 关键词：豆腐果苷抗抑郁药慢性应激神经元再生脑源性神经营养因子
- 自噬在人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型中的表达变化及其意义被引量：3
- 2013年
- 目的 探讨自噬在人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型中的作用及意义.方法 选择2012年2至8月皖南医学院弋矶山医院脊柱外科住院接受颈前路椎体次全切除手术的颈椎病患者和颈椎骨折或脱位者48例.分为对照组（17例）和颈椎病组（31例）.将术中取出的颈椎椎体终板软骨用酶消化法分离终板软骨细胞并培养,建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型.甲苯胺蓝染色,倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态学变化,单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察自噬小体,激光共聚焦显微镜观察自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3蛋白）,运用反转录聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖及免疫印迹检测LC3蛋白的表达.结果 成功建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型.对照组原代终板软骨细胞以多角形为主,增殖速度较快,而颈椎病组原代终板软骨细胞以梭形为主,细胞增殖速度较对照组慢.两组细胞中MDC染色均可见自噬小体,激光共聚焦显微镜下均可见LC3蛋白位于胞内和核周.颈椎病组终板软骨细胞Ⅱ型胶原基因（0.628±0.254）及蛋白多糖基因（0.715 ±0.194）的表达均低于对照组（0.845 ±0.186,0.913 ±0.254,均P＜0.05）.对照组中LC3-Ⅱ/LC3-I较颈椎病组明显上调.结论 自噬在人颈椎终板软骨细胞退变过程中起着重要作用.调控终板软骨细胞中自噬的活性可能会改善椎间盘的退变.
- 熊寿良徐宏光王弘张敏俞云飞张巍涂成东赵泉来吕坤
- 关键词：椎间盘颈椎软骨细胞基因表达
- 高血压药物基因多态性分析对安徽皖南地区高血压患者个体化治疗的参考价值
- 2024年
- 目的:分析皖南地区高血压患者β受体阻滞剂、血管紧张素受体拮抗剂(ARB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、钙离子拮抗剂及利尿剂药物基因多态性分布频率,为高血压药物基因检测工作和个性化用药提供理论依据。方法:搜集2021年7月至2023年4月皖南医学院弋矶山医院839例高血压住院患者药物基因检测信息,分析各基因位点分布频率。结果:ACE(I/D)I/I、I/D及D/D基因型频率分别为42.1%、46.0%、11.9%;肾上腺素能受体β1(ADRB1)(1165G>C)G/G、G/C及C/C基因型频率分别为8.3%、40.0%、51.6%;血管紧张素Ⅱ受体1(AGTR1)(1166A>C)A/A、A/C及C/C基因型频率分别为90.2%、9.8%、0.0%;CYP2C9*3(1075A>C)*1/*1、*1/*3及*3/*3基因型频率分别为91.3%、8.7%、0.0%;CYP2D6*10(100C>T)*1/*1、*1/*10及*10/*10基因型频率分别为25.0%、36.6%、38.4%;CYP3A5*3(6986A>G)*1/*1、*1/*3及*3/*3基因型频率分别为7.0%、39.0%、54.0%;钠尿肽前体蛋白A(NPPA)(2238T>C)T/T、T/C及C/C基因型频率分别为97.9%、2.1%、0.0%。此外,皖南地区多个药物相关基因位点基因型分布频率与中国其他地区存在统计学差异(P<0.05)。结论:皖南地区高血压药物相关基因位点基因型分布频率具有一定偏向性,且与中国其他地区相比存在统计学差异,提示开展高血压药物基因多态性检测对皖南地区高血压药物个体化应用具有一定指导意义。
- 万淑君张梦莹张梦莹钟民钟民钟民吕坤
- 关键词：高血压药物基因多态性个体化用药
- 体外沉默血管内皮生长因子对D-(-)-MTX/A549耐药细胞株迁移侵袭能力的影响
- 2016年
- 目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因沉默对D-(-)-MTX/A549耐药细胞株迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:采用siRNA技术沉默D-(-)-MTX/A549耐药细胞株VEGF基因,细胞划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测VEGF、MMP-2 mRNA,Western blot检测p-ERK1/2蛋白的表达。结果:VEGF siRNA序列及阴性对照成功转染至D-(-)-MTX/A549后,VEGF mRNA表达水平明显下降,与阴性对照相比下降了2.29倍,差异具有统计学意义(P=0.002),表明转染成功。阴性对照组与空白组差异无统计学意义(P>0.05)。转染后,D-(-)-MTX/A549迁移和侵袭能力明显下降(P值均<0.05),D-(-)-MTX/A549耐药细胞MMP-2 mRNA、p-ERK1/2的蛋白达也较阴性对照水平明显下降(P值均<0.05)。结论:抑制VEGF基因表达可以抑制D-(-)-MTX/A549细胞的迁移和侵袭能力,这一过程可能涉及到MMP-2和p-ERK1/2信号通路。
- 陶绍能王莹莹戴云海程光华吕坤
- 关键词：血管内皮生长因子耐药细胞迁移细胞侵袭
- 心肌炎患者血清半乳糖凝集素-9白细胞介素-4γ干扰素水平变化及其临床意义被引量：1
- 2017年
- 目的观察心肌炎患者血清半乳糖凝集素-9（galectin-9）、白细胞介素-4（IL-4）、1干扰素（IFN-γ）水平改变，探讨其在心肌炎患者诊断及预后中的价值及其临床意义。方法收集2014—01—2016—12间我院诊治的心肌炎患者76例和30例年龄相仿的健康志愿者，根据病程将患者分成心肌炎A组（病程≤30d者49例）和心肌炎B组（病程〉30d27例）；ELISA法检测血清galectin-9、IFN-γ和IL-4。比较心肌炎组与正常对照组血清galectin-9、IFN-1和IL-4的差异。结果与正常对照组比较，心肌炎组血清galectin-9、IFN-1和IL-γ水平均显著升高，心肌炎B组galectin-9、IL-4、IFN-γ/IL-4水平显著低于心肌炎A组，但仍显著高于正常对照组。心肌炎组血galectin-9与IFN-γ、IL-4、IFNγ/IL-4、血清天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、肌酸激酶同工敏（CK—MB）、心肌肌钙蛋白1（cTnI）、左心房内径（LVD）呈显著正相关，与发病时间及LVEF呈显著负相关。结论本研究发现，心肌炎患者血清galectin-9水平升高，且galectin-9水平与IFN-1、IL-4、IFN-γ/IL-4呈正相关，提示血清galectin-9对心肌炎诊断及其预后随访有潜在的临床价值。
- 王德国吴勇宋骏张梦莹钟民吕坤
- 关键词：心肌炎
- M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1通过激活JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞的极化被引量：1
- 2023年
- 目的探究M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1对巨噬细胞极化的影响及机制。方法体外分离并培养BALB/c小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),IL-4诱导其向M2型巨噬细胞极化后,提取并鉴定M2细胞上清液所分泌的外泌体exosome(M2-exo),qRT-PCR检测M2外泌体中lncRNA的表达。将100μg/mL的M2-exo,对照组用等体积的PBS分别与M0巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR及Western blot检测各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α的表达,流式细胞术检测CD206^(+)细胞比例,Western blot检测各组细胞JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平。设计、合成lncRNA smart silencer特异性抑制lncRNA NR_028113.1的表达,转染M2细胞48 h后提取各组细胞(exo+NC和exo+smart silencer)上清液分泌的外泌体再与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α的表达以及CD206^(+)细胞比例和JAK2/STAT3信号通路蛋白磷酸化水平。结果lncRNA NR_028113.1在M2型巨噬细胞外泌体中高表达(P<0.05)。相比于PBS对照组,与M2-exo共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达均显著上调(P<0.05),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.05),CD206^(+)细胞所占比例显著增加(P<0.01),JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05)。抑制M2-exo中lncRNA NR_028113.1的表达后,共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达显著下调(P<0.05),iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.05),CD206^(+)细胞所占比例显著减少(P<0.05),JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平显著减少(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1可显著促进巨噬细胞向M2型极化,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路相关。
- 张梦莹张梦莹李志李雪琴李雪琴李雪琴吕坤
- 关键词：外泌体JAK2STAT3
- 循环机械压力诱导下兔椎间盘退变器官模型的建立及意义被引量：9
- 2014年
- 背景:力学因素是导致椎间盘退变(IDD)的重要诱因,建立力学相关性IDD的器官模型能为IDD机制的研究提供理想的模型基础。目的:建立兔椎间盘器官模型,并施以循环机械压力,探究循环机械压力载荷对IDD的影响。方法:6月龄新西兰大白兔随机分为加力组和对照组,静脉给予1.3 ml肝素(5000 U/ml),待肝素体内循环5 min后处死。无菌条件下完整取出带部分椎骨的腰段椎间盘,放入20%胎牛血清的培养液中培养。加力组应用加力器施以0.2 MPa压力值,每日加压1次,每次30 min。经过各个时段的培养后,苏木精-伊红(HE)染色观察椎间盘大体组织形态学变化;氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色及4',6-二眯基-2-苯基吲哚(DAPI)复染检测椎间盘细胞成活率;Realtime RT-PCR和Western-blotting检测蛋白多糖(AGN)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)的mRNA和蛋白表达。结果:对照组和加力组培养至第7 d的组织形态学无明显变化,培养至第14 d均表现为组织形态学破坏,且以加力组表现更为明显。对照组培养至第7 d的细胞成活率及AGN、COLⅡ表达与0 d相比无明显变化;对照组培养第14 d与0 d比较,培养第7 d加力组与对照组比较,培养第14 d加力组与对照组比较,均表现为细胞成活率明显下降,AGN、COLⅡ表达下调。结论:成功建立短周期兔椎间盘体外器官模型,并在此模型基础上阐明循环机械压力载荷可直接导致椎间盘退变样改变。
- 徐宏光章平治宋俊兴胡斌赵泉来吕坤钟民张梦莹所起凤
- 关键词：器官培养椎间盘退变
- 病毒性心肌炎血清外泌体来源的miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡
- 2023年
- 目的探讨病毒性心肌炎血清外泌体miR-320对心肌细胞凋亡的影响及机制。方法使用柯萨奇病毒B3(CVB3)腹腔注射,建立病毒性心肌炎小鼠模型;采用血清外泌体抽提试剂盒提取血清外泌体,与心肌细胞共培养,激光共聚焦显微镜观察心肌细胞摄取外泌体情况;使用miR-320抑制剂或模拟物转染心肌细胞,实时荧光定量PCR检测miR-320表达水平;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)和Bcl2相关X蛋白(BAX)表达水平;生物信息学预测miR-320靶基因并进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;荧光素酶报告基因检测miR-320与其靶基因磷脂酰肌醇3激酶调节亚基1(Pik3r1)的作用关系;Western blot法检测miR-320对蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路蛋白的影响。结果病毒性心肌炎血清外泌体促进心肌细胞凋亡并上调BAX水平,同时降低Bcl2水平;病毒性心肌炎小鼠心肌组织中miR-320显著上调,且miR-320成熟体和miR-320前体pri-miR-320表达在心肌细胞均明显上调;病毒性心肌炎血清外泌体处理的心肌细胞中miR-320水平显著上调,而转染miR-320抑制剂逆转了外泌体引起的miR-320上调及凋亡率升高;Pik3r1是miR-320的靶基因,其过表达逆转miR-320上调导致的心肌细胞凋亡;miR-320过表达抑制AKT/mTOR通路激活。结论病毒性心肌炎血清外泌体miR-320通过靶向Pik3r1抑制AKT/mTOR通路促进小鼠心肌细胞凋亡。
- 张欣张欣李雪琴李雪琴张苑吕坤
- 关键词：病毒性心肌炎外泌体心肌细胞
