李岩
- 作品数：16 被引量：43H指数：4
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用TaqMan探针定量检测孕妇血清胎儿游离DNA
- 2006年
- 目的:探讨应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应(Real timequantitativePCR)技术检测孕妇血清中胎儿游离DNA含量变化的可行性。方法:选择孕21三体男胎的妇女5例为实验组,对照组为孕正常男胎的妇女18例,孕正常女胎的妇女17例,提取其外周血血清中游离DNA,应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术检测Y染色体上的DYS14基因,以此确定母体血清中的胎儿游离DNA含量,并同时检测代表母体与胎儿总游离DNA的βactin基因作为对照。结果:孕21三体男胎组血清胎儿游离DNA含量明显高于孕正常男胎组,它们分别为90.7基因当量(genomeequivalents,GE)/ml及42.8GE/ml(P<0.01),孕21三体男胎组血清中的胎儿游离DNA含量为孕正常男胎组的2.1倍,孕正常女胎组血清中未检测到Y染色体上的DYS14基因。结论:TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术是一种敏感、特异、高效的检测方法,胎儿游离DNA含量变化有可能成为产前筛查唐氏综合征的候选指标。
- 迟洪滨程利南李岩刘银坤
- 关键词：胎儿游离DNA唐氏综合征产前筛查
- 非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的应用凝集素亲和技术寻找肝癌转移相关特征性血清糖蛋白凝集素亲和谱,并探讨其生物学意义。方法本研究利用含有13种肿瘤相关的凝集素集合芯片技术,比较研究了非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱,同时采用多重凝集素印迹方法验证凝集素芯片结果。计量资料数据采用双样本异方差t检验,进行两两比较。结果研究证明,与非转移人肝癌血清相比,转移性肝癌血清糖蛋白对麦胚凝集素(wheatgerm agglutinin,WGA)、黑接骨木凝集素(sambucus nigra lection,SNA)、红腰豆凝集素(phaseolus vulgariserythroagglutinin,PHAE)和欧曼陀罗凝集素(datura stramonium lectin,DSA)的亲和作用增强(P<0.05)。提示转移性肝癌血清糖蛋白出现了增多的唾液酸(sialic acid,sia)、N-乙酰葡萄糖胺(N-acetyl glucosamine,GlcNAc)、平分型GlcNAc及多天线、偏二天线糖链结构。结论血清糖蛋白聚糖链的变化与肿瘤侵袭和转移密切相关,为临床筛选肝癌侵袭及转移相关的糖标记提供了重要参考。
- 陈巧佩孙淳张舒康晓楠李岩郭坤孙璐秦雪刘银坤
- 关键词：肝癌肿瘤转移聚糖
- 人健康肝组织核心岩藻糖基化蛋白质的鉴定及生物信息学分析被引量：2
- 2008年
- 糖蛋白质组学方法鉴定人健康肝组织核心岩藻糖基化蛋白质,将有助于发现肝癌、慢性肝病相关异常核心岩藻糖基化蛋白质.应用凝集素亲和层析技术、双向电泳(2-DE)联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立人健康肝组织核心岩藻糖基化蛋白表达谱,图谱均点数为(130±3)个,挖取90个蛋白质点进行质谱鉴定,数据库搜索及去冗余后,共鉴定53种蛋白质,主要分布于pI5～9,分子质量为10～100ku区域处.Gene Ontology分类发现它们参与体内代谢等过程,应用NetNGlyc对它们进行糖基化位点预测,并通过蛋白质免疫沉淀联合凝集素亲和印迹对其中的结合珠蛋白前体,α烯醇化酶的核心岩藻糖基化进行了再验证.以上结果提示,凝集素层析、2-DE联合MALDI-TOF-MS/MS分析是一种鉴定某种特定类型糖蛋白的高通量检测方法,所建立的表达谱可用于发现疾病发生、发展中相关的异常核心岩藻糖基化蛋白质.
- 代智樊嘉周俭柏斗胜邱双健康晓楠崔杰峰郭坤李岩刘银坤
- 骨桥蛋白表达和翻译后修饰与肿瘤生物学行为的关系
- 2010年
- 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白。研究表明OPN在肿瘤中高表达,并通过与CD44突变体CD44v6及整联蛋白αvβ3作用参与肿瘤的发生发展。近年来发现OPN存在磷酸化、糖基化、硫酸化、唾液酸化等多种翻译后修饰,在肿瘤发生发展过程中,这些修饰状态的改变和生物学意义已成为研究关注的热点之一。
- 孙海艳李岩刘银坤
- 关键词：骨桥蛋白硫酸化唾液酸化
- 多重定量抗体芯片检测系统在肝癌早期诊断中的应用被引量：6
- 2012年
- 目的利用多重定量抗体芯片同时检测肝细胞癌（HCC）及肝硬化患者血清中肿瘤相关血清学标志物的水平，建立HCC早期诊断模型，以提高HCC早期诊断的准确度。方法运用双抗体夹心原理建立了相关指标的多重定量抗体芯片检测系统，8种肿瘤相关血清学标志物作为芯片检测目标：甲胎蛋白（AFP）和7种细胞因子包括肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、转化生长因子β1和血管内皮生长因子。应用该系统检测临床确诊的160例HCC和58例肝硬化（LC）患者血清，随机抽取其中60%为训练集（HCC96人；LC36人），40%为测试集（HCC64人；LC22人），通过对结果和临床资料进行回顾性研究，应用SPSS软件做logistic回归分析，利用训练集创建诊断模型，获得受试者工作曲线（ROC曲线下面积以及cutoff值，并在测试集中验证模型的诊断价值。结果AFP联合7种细胞因子在训练集中诊断的敏感度为93．3％，特异度为83．3％，准确度为90．9%；而在测试集中敏感度为89％，特异度为77．3％，准确度为86%，传统血清AFP值（cut off值为20ng／ml）诊断的敏感度为70%，特异度为59％，准确度为64%。结论多重定量抗体芯片检测系统具有较高敏感度和特异度，AFP联合7种细胞因子诊断模型对肝癌早期诊断优于传统AFP，具有潜在的临床应用价值。
- 高东梅孙璐郭坤李岩刘银坤康晓楠
- 关键词：肝细胞甲胎蛋白类
- 孕妇血清中胎儿游离DNA产前筛查Down’s综合征初探被引量：3
- 2006年
- 目的应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应（Real-time quantitative PCR）技术检测孕妇血清中胎儿游离DNA含量，探讨以其含量变化作为Down’s综合征产前筛查新指标的可行性。方法选择42例孕中期（16-19周）的妇女作为研究对象，其中7例为孕21三体男胎的妇女，18例为孕正常男胎的妇女，17例为孕正常女胎的妇女，提取其外周血血清中游离DNA，应用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术检测Y染色体上的DYS14基因，以此确定母体血清中的胎儿游离DNA含量，并同时检测代表母体与胎儿总游离DNA的β-actin基因作为对照。结果孕21三体男胎组血清胎儿游离DNA含量明显高于孕正常男胎组，它们分别为94．5基因当量（genome equivalents，GE）／ml及42．8GE／ml（P〈0．01），孕21三体男胎组血清中的胎儿游离DNA含量为孕正常男胎组的2．2倍。孕正常女胎组血清中未检测到Y-染色体上的DYS14基因。结论胎儿游离DNA可能成为产前筛查Down’s综合征的候选指标。
- 迟洪滨程利南李岩刘银坤
- 关键词：胎儿游离DNA母体血清
- 喜滴克对肝癌相关基因及AFP表达的调节被引量：8
- 2002年
- [目的]观察细胞分化剂喜滴克对肝癌相关基因及血清AFP水平的调节。[方法]人移植性高转移肝癌裸鼠模型LCI D20,随机分为对照组(C组) ,喜滴克低剂量组(L组) ,喜滴克中剂量组(M组) ,喜滴克高剂量组(H组)和喜滴克高剂量 +5 Fu组(H +CT组)。接种后第11天给药 ,连续20天 ,计算抑瘤率 ,测定血清AFP水平和观察腹腔转移。应用RT PCR方法 ,研究基因的表达。应用Western印迹检测整合素β1和E 钙粘素的表达 ,观测高转移人肝癌细胞株MHCC97对纤维连接蛋白的粘附抑制作用。[结果]不同剂量组的喜滴克均呈现一定的抑瘤作用。喜滴克治疗组血清AFP水平比对照组有明显下降 ;对原癌基因c myc、N ras、c jun、c fos及mmp 9基因的表达有明显的下调作用(P<0.01)。喜滴克亦能下调整合素β1蛋白表达和增加E 钙粘素的表达 ;有抑制高转移人肝癌细胞株MHCC97对纤维连接蛋白粘附的能力。[结论]喜滴克对肝癌相关基因及AFP表达的调节可能是其抑制肿瘤生长和转移的分子基础。
- 刘银坤李岩马晓明鲍卫华陈军薛琼高东梅张予叶胜龙汤钊猷
- 关键词：肝肿瘤原癌基因甲胎蛋白
- 小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞的基因芯片分析
- 2009年
- 弄清胚胎肝脏发育的分化调节机制,对指导干细胞在肝再生中的应用以及研究肝分化相关疾病分子机制具有重要意义.胚胎干细胞的全能性使得体外建立肝向分化模型成为可能,采用单层贴壁培养方式,分阶段加入成纤维细胞生长因子(FGF)、肝细胞生长因子(HGF)、制瘤素(OSM)等因子,诱导小鼠胚胎干细胞D3(mESC-D3)的肝向分化.分化细胞在光镜和电镜下呈现肝样细胞形态,RT-PCR、细胞免疫荧光检测以及PAS染色分析表明,这些细胞具有肝细胞特征性的基因表达和生化功能.采用干细胞分化相关基因芯片比较早期肝定向分化前后的基因表达差异,结果显示,48个差异表达基因中(大于2倍),20个上调、28个下调.进一步的生物信息学分析发现,它们集中体现在细胞外基质、细胞连接、FGF、BMP分子及Notch、Wnt信号通路上,提示这些改变可能与胚胎早期的肝向分化密切相关.
- 李岩李雪飞郭坤高东梅赵燕刘银坤
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞细胞分化基因芯片
- Stathmin对肝癌细胞HCCLM3增殖及其肿瘤相关基因表达的影响被引量：8
- 2011年
- 目的探讨人stathmin基因在肝癌发生、发展过程中的作用及其机制。方法化学合成stathmin序列特异性小干扰RNA，用脂质体Lipofectamine^TM2000转染人肝癌细胞株HCCLM3细胞。采用RT-PCR和Western blot技术检测stathmin的RNA干扰效率；用细胞计数试剂检测干扰细胞的生长增殖情况；用膜联蛋白V／碘化丙啶双标记流式细胞术检测细胞凋亡；并用荧光定量PCR检测肿瘤增殖凋亡的相关基因。均数两两比较用配对t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析。结果RNA干扰HCCLM3细胞后，stathmin的表达被显著抑制（P〈0．05），抑制率达90％；在RNA干扰24、48h和72h时，HCCLM3细胞的增殖抑制率分别为13．04％±0．10％、28．10％±0．41％和37．36％±2．15％（F=4．21，P〈0．05）；RNA干扰后，细胞凋亡比例从9．20％±0．64％上升至25．11％±1．62％（F=44．67，P〈0．01）；且RNA干扰组细胞癌基因c-myc、c-fos和增殖相关基因ki-67的mRNA表达水平明显下降，促凋亡基因caspase-3、bax和p53的mRNA表达水平升高（P值均〈0．05）。结论stathmin可能通过调节肿瘤增殖相关基因的表达水平来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡，参与肝癌的发生和发展进程。
- 甘淋李娟郭坤李岩舒宏王丽宋杰刘银坤
- 关键词：原癌基因蛋白质类RNA干扰
- 肝癌转移相关的骨桥蛋白表达及其糖基化的改变被引量：5
- 2011年
- 目的检测骨桥蛋白（OPN）在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的蛋白表达水平及其糖基化水平，探讨OPN糖基化改变与肝癌转移的相关陛及其意义。方法用免疫组织化学和Westemblot法检测人肝癌组织（非转移组6例、转移组7例）及不同转移潜能人肝癌细胞株（L02、Hep3B、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6）中OPN蛋白水平l采用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白，并采用多重凝集素印迹技术检测转移与非转移肝癌组织中OPN糖基化水平差异。数据统计采用t检验和方差分析。结果OPN在不同转移潜能肝癌细胞株的表达差异具有统计学意义（F=5．04，P〈0．01）。在肝癌组织中，转移组OPN蛋白表达水平明显高于非转移组（t=2．447，P〈0．05），相对吸光度值分别为0．69±0．21和0．45±0．14。免疫沉淀技术成功纯化肝癌组织中的OPN蛋白，后续的凝集素印迹结果显示：与非转移组相比，转移组OPN蛋白对凝集素朝鲜槐、红腰果E型、蔓陀罗、刀豆素A的亲和力较低（P值均〈0．05）。结论OPN蛋白表达水平与肝癌转移潜能增强呈正相关；OPN蛋白的α2，3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线、偏二天线的糖链、高甘露糖型N一糖等糖基化水平改变可能与肝癌转移潜能增高有关。
- 孙海艳李岩郭坤康晓楠孙淳王存刘银坤
- 关键词：肿瘤转移糖基化凝集素类骨桥蛋白
