王伟伟
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 新型猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体的鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又名蓝耳病,是由PRRS病毒(PRRSV)感染所致的一种急性传染病。PRRSV是一把"双刃剑",在...
- 周恩民崔言顺肖一红石有斐王伟伟刘岳
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒新型细胞受体的鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的以妊娠母猪繁殖障碍及各年龄阶段猪呼吸道症状为主要特征的传染病。...
- 肖一红崔言顺石有斐王伟伟刘岳邱宏凯宋腾飞周恩民
- 文献传递
- PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定被引量：3
- 2011年
- 本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coliBL21中,在IPTG的诱导下进行表达。用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究。建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用。结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区。表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000。优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100。临界值为0.4。血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%。为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础。
- 马利宏肖一红吕军华王伟伟董施伟周恩民
- 关键词：PRRSVNSP2免疫学ELISA
- Marc-145细胞CD151蛋白主要抗原表位区的表达及其与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染关系的研究
- 2012年
- 为研究CD151与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的关系,根据GenBank中已发表的CD151蛋白的基因序列设计并合成一对特异性引物,从Marc-145细胞中扩增出294bp的CD151基因片段并克隆入pGEX4T-3载体,转化入大肠杆菌用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。表达蛋白纯化后用于免疫小鼠制备抗CD151蛋白血清,用ELISA和IFA检测抗血清的效价及特异性。将抗CD151蛋白血清与Marc-145细胞孵育后再感染PRRSV,观察细胞CPE验证该血清对PRRSV的阻断效果。结果表明成功构建了pGEX4T-3-CD151,获得了相对分子质量为37ku的重组CD151蛋白。制备的抗血清特异性结合Marc-145细胞并有效阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这些研究结果为进一步阐明CD151与PRRSV感染的关系提供一定的理论基础。
- 肖一红王伟伟张璐高继明马晓春周恩民
- 关键词：CD151MARC-145细胞PRRSV
- 新型猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体的鉴定
- 周恩民崔言顺肖一红石有斐王伟伟刘岳
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒新型细胞受体的鉴定
- 肖一红崔言顺石有斐王伟伟刘岳邱宏凯宋腾飞周恩民
- 波形蛋白与PRRSV核衣壳蛋白及新型受体蛋白的关系
- 根据GenBank中已发表的Marc-145细胞中波形蛋白的全基因序列使用DNA-Star软件设计一对特异性引物V1: 5'-CAGCCATGACCACCAGG-3',V2: 5'-AAGGTCAAGACGTGCCAG-...
- 王伟伟
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征受体波形蛋白原核表达
- 文献传递
- 波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究被引量：9
- 2011年
- 为了研究波形蛋白在介导PRRSV感染过程中的作用,根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,利用RT-PCR方法从Marc-145细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a,转化表达菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备血清,用病毒阻断实验验证PRRSV与波形蛋白及其抗体的关系。用ELISA方法确定了重组波形蛋白与PRRSV结构蛋白N蛋白和囊膜蛋白GP5蛋白之间的关系。结果表明,成功的从Marc-145细胞中扩增出全长的波形蛋白基因,将其克隆入pET-28a,诱导后得到高效表达,表达蛋白纯化后免疫小鼠抗体效价达到105,病毒阻断实验表明波形蛋白能部分阻断PRRSV感染,其抗血清能完全阻断PRRSV感染。ELISA结果表明波形蛋白能与N蛋白结合而不与GP5蛋白结合。此结果为PRRSV感染的细胞的受体机制增添了新的内容,为PRRSV感染过程中受体间的相互作用关系研究奠定基础。
- 王伟伟张璐马晓春高继明肖一红周恩民
- 关键词：波形蛋白N蛋白
