华欣春
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金吉林省自然科学基金吉林省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Coprinopsis cinerea漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中表达的研究
- 漆酶(Laccase EC1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,1883年日本吉田首次在日本漆树的分泌物中发现而得名,之后分别在真菌、细菌、高等植物中都发现了漆酶,但主要存在于植物和真菌中。由于漆酶的作用底物非常广泛...
- 华欣春
- 关键词：漆酶基因RT-PCR信号肽毕赤酵母分泌表达
- 文献传递
- Coprinopsis cinerea漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2012年
- 通过反转录反应从Coprinopsis cinerea okayama 7#130中克隆得到laccase 1,应用SignalP 3.0 Server软件分析其氨基酸序列后,设计不含信号肽序列的新引物扩增得到漆酶基因,构建重组酵母表达载体pPIC9K-lac1,电击转化毕赤酵母GS1115,并用甲醇诱导表达,之后研究重组酶的酶学性质。克隆得到的laccase 1碱基数为1 593 bp,编码530个氨基酸,其中信号肽包含18个氨基酸。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示重组蛋白大小约为65 kDa。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为4.3。成功分泌表达的漆酶活力达到1.108 U/mL。
- 华欣春陈丽丽毕云枫沈明浩
- 关键词：漆酶基因毕赤酵母分泌表达
- 一株嗜热梭菌β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达
- 2012年
- 以嗜热梭菌(Symbiobacterium thermophilum IAM 14863)基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因,同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a-Glu,转化至E.coli BL21(DE3)PLYS中并进行表达。结果表明:该基因大小为1 101 bp,共编码366个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明该基因在E.coli BL21(DE3)PLYS中得到了有效表达,相对分子质量约为60 kDa,纯化后重组酶活力为103 U/mL;酶学性质实验结果表明:酶最适pH值为5左右,最适反应温度为55℃,且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH值稳定性。
- 蒋海芹毕云枫华欣春陈丽丽徐雪霏沈明浩
- 关键词：纤维素克隆原核表达
- Thermotoga neapolitana α-葡萄糖苷酶基因克隆及表达被引量：4
- 2011年
- 本文拟克隆新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)的一种α-葡萄糖苷酶基因(TNAG),其GenBank注册号为lcl27401。首先以T.neapolitana DSM 4359基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因并完成T克隆,在NCBI数据库中比对结果表明:目的基因与Thermotoqa sp.RQ2等氨基酸序列相似度高于99%。再将目的基因连接至表达载体pET-32a(+),并导入大肠杆菌Rosetta中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE显示表达蛋白的大小约为72KDa。热纯化后酶液测活反应的最适温度为80℃,最适pH在5.0左右。
- 陈丽丽陈萍华欣春蒋海芹刘琼毕云枫
- 关键词：Α-葡萄糖苷酶克隆
