官秀梅
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 流体剪切应力对晚期内皮祖细胞生物学功能的影响被引量：8
- 2014年
- 目的研究流体剪切应力处理对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)体外及体内生物学功能的影响。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以3~4代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,对其施以1.2 Pa剪切应力处理。采用EdU标记技术、黏附能力测定实验、改良的Boyden小室、Annexin V/PI、β-半乳糖苷酶检测法、Matrigel法、荧光定量RT-PCR等方法分别检测剪切应力对晚期EPCs增殖、黏附、迁移、凋亡、衰老、体外成血管及VEGF mRNA表达等生物学功能的影响。应用大鼠颈动脉损伤模型及细胞原位移植等实验手段检测剪切应力预处理对晚期EPCs修复受损内皮的影响。结果 1.2 Pa剪切应力处理可不同程度提高晚期EPCs的增殖、黏附、迁移及成血管能力(P<0.01),上调VEGF的基因表达,抑制晚期EPCs的衰老及凋亡(P<0.01);移植经剪切应力预处理的晚期EPCs可加速损伤内皮的修复,减缓内膜的增生。结论流体剪切应力可改善晚期EPCs的功能活性,提高晚期EPCs修复损伤血管内皮的能力,这为EPCs的临床应用及剪切应力介导的细胞疗法提供了实验依据。
- 成敏尹青令崔晓栋张晓芸李鑫李宏官秀梅王建英
- 关键词：剪切应力内皮祖细胞细胞黏附再内皮化
- 一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定被引量：1
- 2020年
- 目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果:该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论:本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。
- 李兰兰聂文青贺燕婷王美月李振凤李宏官秀梅成敏
- 关键词：外泌体流体剪切应力人脐静脉内皮细胞株
- 流体剪切应力对肝星状细胞的活化和相关基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨不同大小的流体剪切应力对大鼠肝星状细胞株HSC-T6的活化和基因表达的影响.方法:对种植于鼠尾胶原上的HSC-T6细胞施以剪切应力处理,剪切应力的大小分别为6、12、20dyn/cm2,干预时间为3h.TRIzol法提取mRNA,采用SYBR Green荧光定量RT-PCR方法分别检测各组-SMA、Collogen-Ⅰ、Collogen-Ⅲ、MMP-2及MMP-9基因的表达情况,流式细胞术检测细胞内蛋白-SMA的表达.结果:剪切应力处理3h后,与对照组相比,6dyn/cm2剪切应力组-SMA、Collogen-Ⅲ的表达降低,但随着剪切应力的增加(12dyn/cm2、20dyn/cm2),-SMAmRNA较对照组表达升高;20dyn/cm2剪切应力组Collogen-Ⅲ基因表达较对照组升高;3种剪切应力组之间Collogen-ⅠmRNA的表达无统计学差异;3种剪切应力均上调MMP-2mRNA的表达.结论:低剪切应力对HSC-T6的活化有一定的抑制作用,相反高剪切应力可以促进HSC-T6的活化,促进Collogen-Ⅲ、MMP-2的表达.
- 崔晓栋尹青令张晓芸李宏官秀梅李鑫王建英成敏
- 关键词：肝星状细胞剪切应力肝纤维化
- 人牙釉质蛋白Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子的初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的分析人釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblastin,AMBN)与釉蛋白(Enamelin,ENAM)基因上游启动子序列,构建不同长度的基因上游启动子报告基因载体,为进一步判断启动子序列的转录调控区奠定基础。方法利用软件分析基因启动子序列,以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中。结果成功地获得了不同长度的Amelotin,Ameloblastin及Enamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功。结论成功构建了不同长度启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,为进一步研究牙釉质蛋白基因启动子的转录活性及转录调控特点奠定基础。
- 刘晓影高志芹韩婷婷官秀梅高玉光
- 关键词：AMELOBLASTINENAMELIN
- 完善评估体系 构建医科院校研究生导师管理平台
- 2013年
- 研究生导师的综合素质和业务水平与研究生的培养质量密切相关，因此，建设一支高水平的研究生导师队伍，是时下我国高等教育改革刻不容缓的任务。而完善评估体系，构建医科院校研究生导师学科管理平台，是加强导师队伍建设与管理，提高导师队伍水平，保障医学研究生的质量，培养高素质的医学人才的必要条件。
- 李宏成敏官秀梅
- 关键词：导师
- 釉成熟蛋白真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确。将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况。结果:成功克隆了Amelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达。结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础。
- 魏亚红郝建忠孙岩高玉光官秀梅
- 人釉蛋白基因启动子在成釉细胞中的转录活性研究
- 2009年
- 目的构建人釉蛋白(Enamelin,ENAM)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,通过分析不同的启动子片段的活性,确定启动子的功能区域,为进一步研究Enamelin基因的转录调控机制奠定基础。方法以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果成功地获得了不同长度的Enamelin基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在成釉细胞中活性不同,-1216～-554与-312～-133区域为特异的转录调控作用区。结论成功构建了不同长度的Enamelin基因启动子的pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体,初步确定Enamelin基因启动子的转录活性区,为进一步研究Enamelin基因转录调控特点奠定基础。
- 刘晓影高志芹韩婷婷官秀梅高玉光
- 关键词：ENAMELIN成釉细胞
- 细胞骨架F-actin在层流剪切应力诱导EPCs内皮分化中的作用被引量：6
- 2012年
- 目的探讨细胞骨架F-actin在层流剪切应力促内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)向内皮分化中的作用。方法对大鼠骨髓来源的EPCs施以层流剪切应力(1.2 Pa),以荧光定量RT-PCR及流式细胞术检测特异性内皮细胞标记分子vWF、CD31 mRNA及蛋白的表达来反映EPCs分化程度;以免疫荧光染色观测F-actin的排列情况;应用Ras GTPase Pull-Down方法检测Ras活性。结果层流剪切力处理后,EPCs分化标记vWF及CD31的基因及蛋白表达较静止组明显升高(P<0.05),细胞骨架F-actin发生重排,Ras活性明显增高。细胞骨架稳定剂Jasplakinolide(JAS)及细胞骨架松弛剂Cytochalasin D(CytoD)预处理均不同程度地抑制了层流剪切应力所致的细胞骨架的重排、Ras活性的上调及EPCs分化效应(P<0.05),而过表达Ras则对层流剪切应力诱导的EPCs分化有明显促进作用(P<0.05)。结论一定大小的层流剪切应力可促进EPCs向内皮细胞分化,其机制可能与层流剪切应力重塑细胞骨架F-actin,进而影响Ras活性有关;这对于揭示受损血管内皮修复的具体机制、阐明动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机理及临床防治此类疾病具有一定的意义。
- 崔晓栋官秀梅张晓芸李宏李鑫王建英成敏
- 关键词：内皮祖细胞细胞骨架
- TGF-β1调控基质金属蛋白酶-20(MMP-20)启动子转录活性的研究被引量：6
- 2009年
- 目的:克隆MMP-20基因启动子序列,分析转化生长因子-β1对其转录活性的影响。方法:检索并分析MMP-20基因翻译起始点上游序列。利用PCR从小鼠基因组上扩增长度为2852bp的启动子序列,并与pMD18-T克隆载体连接。经酶切反应初步鉴定后,以pMD18-T-MMP-20为模板,利用PCR方法获得带酶切位点的MMP-20启动子片段(2842bp),并与pGL3-Basic载体连接。pGL3-MMP-20瞬时转染小鼠成釉细胞系(ALC)过夜后,在培养基中加入1ng/mLTGF-β1,12h后检测荧光素酶的活性。结果:经酶切反应和测序结果证实MMP-20启动子成功插入pGL3-Basic质粒。与pGL3-Basic质粒转染相比较,转染pGL3-MMP-20后荧光素酶活性明显增强;培养基中加入TGF-β1能促使pGL3-MMP-20荧光素酶活性进一步增强。结论:外源性MMP-20启动子在成釉细胞中被激活;TGF-β1能增强pGL3-MMP-20荧光素酶活性,提示釉质发育过程中,TGF-β1具有调节MMP-20基因表达的生物学功能。
- 韩婷婷孙岩张娟娟刘晓影官秀梅高玉光
- 关键词：转化生长因子-Β1启动子
