秦圣光
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 两个osvdac基因的原核表达及其对水稻的遗传转化
- 电压依赖性阴离子通道/(voltage-dependent anion channel, VDAC/)是一种由小的多基因家族编码的离子孔道蛋白,它们主要依赖电压来调节其对阴阳离子的选择性。VDAC主要存在于线粒体膜上,它...
- 秦圣光
- 关键词：水稻原核表达抗体
- 文献传递
- 水稻YTB中OSVDAC5蛋白的原核表达与抗体制备被引量：4
- 2011年
- 目的:克隆水稻YTB osvdac5基因,原核表达后获得纯化的OSVDAC5蛋白,制备相应的抗体。方法:采用Trizol法提取水稻总mRNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增得到该基因与原核表达载体连接,构建重组质粒pET-30a-osvdac5,并转入大肠杆菌进行原核表达,SDS-PAGE检测表达产物。通过镍柱纯化获得的单一目的蛋白用于抗体制备,用Western Blot检测抗体的特异性。结果:克隆到原核表达载体中osvdac5基因的ORF为813 bp,编码271个氨基酸。在大肠杆菌中15℃、0.7mmol/L的IPTG浓度诱导17 h是pET-30a-osvdac5融合蛋白表达的优选条件,表达的OSVDAC5蛋白属于包涵体蛋白。镍柱纯化后的OSVDAC5为30 kD左右的单一条带。Western Blot分析表明,抗体能够与30 kD处的OSVDAC5蛋白进行特异性结合。结论:成功克隆了水稻YTB osvdac5基因,原核表达蛋白OSVDAC5制备的多克隆抗体具有一定特异性,能与免疫抗原结合,这为进一步研究OSVDAC5蛋白在植物不同生长发育时期中的表达模式奠定了基础。
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- 关键词：水稻克隆原核表达抗体
