郭锐进
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南民族大学生命科学学院生物技术国家民委重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 水稻HL-CMS中线粒体基因orf216原核表达载体构建及蛋白纯化
- 2012年
- 将orf216基因克隆到含有组氨酸标签的原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-orf216,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys菌株感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。通过Ni-NTA亲和层析系统纯化获得高纯度目的蛋白。研究结果表明,成功构建了pET-30a(+)-orf216原核表达载体并转化大肠杆菌。SDS-PAGE和Western Blot结果显示30 ku处有单一条带,确定其能高效表达并且诱导表达产物为ORF216蛋白。同时对利用Ni-NTA层析系统纯化高纯度高含量ORF216融合蛋白的条件进行了优化。
- 郭锐进刘学群谭艳平程钢
- 关键词：水稻原核表达组氨酸标签
- 水稻YTB中OSVDAC5蛋白的原核表达与抗体制备被引量：4
- 2011年
- 目的:克隆水稻YTB osvdac5基因,原核表达后获得纯化的OSVDAC5蛋白,制备相应的抗体。方法:采用Trizol法提取水稻总mRNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增得到该基因与原核表达载体连接,构建重组质粒pET-30a-osvdac5,并转入大肠杆菌进行原核表达,SDS-PAGE检测表达产物。通过镍柱纯化获得的单一目的蛋白用于抗体制备,用Western Blot检测抗体的特异性。结果:克隆到原核表达载体中osvdac5基因的ORF为813 bp,编码271个氨基酸。在大肠杆菌中15℃、0.7mmol/L的IPTG浓度诱导17 h是pET-30a-osvdac5融合蛋白表达的优选条件,表达的OSVDAC5蛋白属于包涵体蛋白。镍柱纯化后的OSVDAC5为30 kD左右的单一条带。Western Blot分析表明,抗体能够与30 kD处的OSVDAC5蛋白进行特异性结合。结论:成功克隆了水稻YTB osvdac5基因,原核表达蛋白OSVDAC5制备的多克隆抗体具有一定特异性,能与免疫抗原结合,这为进一步研究OSVDAC5蛋白在植物不同生长发育时期中的表达模式奠定了基础。
- 秦圣光程钢刘学群郭锐进周杰王春台
- 关键词：水稻克隆原核表达抗体
