熊冬梅
- 作品数：8 被引量：6H指数：1
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- 过表达人RI抑制人膀胱癌T24细胞的侵袭、转移及EMT发生被引量：1
- 2012年
- 目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因的质粒pIRES2-EGFP-RI对人膀胱癌T24细胞侵袭转移及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象的影响。方法将连有RI的质粒pIRES2-EGFP-RI稳定转染T24细胞后利用G418筛选出阳性克隆。根据转染的质粒不同分为3组:T24组(未转染组)、T24-0(转染pIRES2-EGFP质粒)和T24-RI组(转染pIRES2-EGFP-RI质粒)。RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化,细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达,利用HE染色观察其细胞形态的变化,Transwell方法检测细胞侵袭及转移能力的变化,Western blot检测侵袭转移及EMT相关蛋白Twist、MMP-9和Snail及E-cadherin的表达,构建移植瘤模型,利用HE染色观测肺组织切片癌细胞转移情况,组织免疫化学方法检测移植瘤中RI、Twist、Snail及E-cadherin的表达。结果 T24-RI组人RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(P<0.05);HE染色结果表明细胞铺展良好,核质比明显减小,细胞由间质形态向上皮形态转变;Transwell方法显示T24-RI组细胞的侵袭及转移能力较T24组、T24-0组明显下降;Western blot结果表明T24-RI组Twist、MMP-9和Snail较T24组、T24-0组显著降低(P<0.01),E-cadherin较T24组、T24-0组显著升高(P<0.01);HE染色肺组织切片显示T24-RI组较其他两组癌细胞转移降低,组织免疫化学结果表明T24-RI组RI、E-cadherin蛋白明显升高,而Twist、Snail显著降低。结论过表达人RI载体提高了RI蛋白的表达水平,并抑制了人膀胱癌T24细胞EMT的发生,从而抑制了膀胱癌T24细胞的侵袭、转移。
- 姚雪熊冬梅舒静李林陈俊霞
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子T24细胞细胞转移细胞侵袭EMT
- 人核糖核苷酸酶抑制因子表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化的影响
- 2013年
- 目的探讨人核糖核苷酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)表达下调对膀胱癌T24细胞在体内外发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法干涉质粒pGensil-1-RI稳定转染T24细胞,经G418筛选阳性克隆,并设实验组、空质粒对照组及未转染对照组,RT-PCR检测各组细胞中RI基因mRNA的转录水平、细胞免疫荧光和Western blot检测RI蛋白的表达水平;HE染色检测细胞形态的变化;Western blot检测各组细胞中E-cadherin、Twist、Slug和Vimentin等相关蛋白表达水平;将3组细胞注入BALB/c裸鼠皮下,35 d后取瘤并称重;免疫组织化学检测瘤组织中RI、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平。结果荧光显微镜下观察可见,干涉质粒pGensil-1-RI转染成功;实验组RI基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平较两对照组分别降低了63.31%和64.11%、49.6%和49.5%(P<0.001);实验组细胞呈梭形,核质比增大;与实验相比,两对照组E-cadhein蛋白表达水平分别增加52.76%和46.93%(P<0.001),而Twist、Slug和Vimentin蛋白分别降低了50.49%和54.63%、43.74%和51.55%、60.35%和53.77%(P<0.001);两对照组的瘤重明显低于实验组,分别低84.91%和80.89%(P<0.01),其RI和E-cadherin蛋白表达水平降低,而Vimentin蛋白表达水平则增加。结论沉默RI基因能明显增加T24细胞的转移、侵袭及EMT的能力。
- 熊冬梅姚雪李林舒静陈俊霞
- 关键词：膀胱癌T24细胞上皮间质转化
- 核糖核酸酶抑制因子过表达抑制B16细胞的侵袭和转移被引量：4
- 2012年
- 目的构建人核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)真核表达载体,检测其对B16细胞侵袭和转移能力的影响。方法提取人7703细胞中的总RNA,RT-PCR特异性扩增RI编码区序列,利用基因重组技术将其克隆到载体pIRES2-EGFP中,稳定转染B16细胞以后,经G418筛选出阳性克隆。根据转染质粒不同分别命名为B16细胞组(未转染组)、空质粒对照组(pIRES2-EGFP组)和实验组(pIRES2-EGFP-RI组)。RT-PCR检测B16细胞中RI mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫化学检测RI蛋白水平的表达;HE染色观察细胞形态的改变,黏附实验、划痕实验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化;Western blot检测MMP-2、MMP-9和nm23-H1以及E-cadherin的表达;建立C57BL/6小鼠肺转移模型,观察肺上肿瘤转移灶的变化。结果酶切和测序结果证明重组质粒构建成功,实验组细胞RI的mRNA和蛋白的表达较B16细胞组和空质粒对照组显著升高(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染pIRES2-EGFP-RI质粒的实验组细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与两对照组相比,实验组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低,nm23-H1和E-cadherin的表达水平明显升高(P<0.05);动物实验结果显示与对照组相比,实验组的肺转移灶明显减少。结论成功构建的RI真核表达质粒能升高RI基因及蛋白水平的表达,显著抑制了B16细胞的转移和侵袭能力。
- 潘湘阳李红彦姚雪熊冬梅陈俊霞
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子细胞黏附细胞运动肿瘤侵润
- 下调RI通过调节EMT和ILK信号通路增强膀胱癌T24细胞转移的机制研究
- 目的:探讨下调RI通过调节EMT的发生和ILK信号通路对膀胱癌T24细胞转移的影响。
方法:用pGensil-1-siRNA-RI等相关质粒转染膀胱癌T24细胞，并用G418筛选出阳性克隆，RT-PCR检测各组细胞...
- 熊冬梅
- 关键词：膀胱癌T24细胞
- HBV上调DKK1在肝癌细胞中表达的机制研究
- <正>目的初步探索DKK1在肝癌中表达升高并且促进肝癌细胞增殖的机制。方法用qRT-PCR、Western blot等分子生物学方法验证DKK1表达上升是否受HBV调控,并确定HBV的四种蛋白其中哪一个起主要作用。Luc...
- 张靖南曹漪伊王丹吴婷熊冬梅黄爱龙汤华
- 文献传递
- MiR-331-3p抑制其靶基因ING5的表达从而参与HBV相关的HCC的发生发展
- <正>目的研究HBV、miR-331-3p和ING5之间的关系以及其在HCC发生发展中起到的作用。方法通过基因芯片技术筛选在HepG2和HepG2.2.1 5细胞系中差异性表达的miRNA,用qRT-PCR的方法对差异表...
- 曹漪伊张靖南王丹吴婷熊冬梅黄爱龙汤华
- 文献传递
- LINC00052通过miR-128和miR-485-3p调节NTRK3的表达影响肝癌细胞侵袭转移
- 目的：探讨LINC00052影响肝癌SMMC7721细胞侵袭转移的机制。 方法：首先，通过一种能够随机插入并整合到细胞染色体中的捕获载体pU21质粒捕获、G418抗生素筛选成功转染pU21质粒的稳定细胞系、通过 Tra...
- 熊冬梅
- 关键词：肝癌SMMC7721细胞小分子RNA
- miR-499a在肝癌细胞中的表达及其靶基因的研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨HBV、miR-499a及CFLAR在肝癌细胞中的关系。方法通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-499a在有HBV复制的肝癌细胞中的表达;通过Real-time PCR、双荧光素酶报告系统、Westernblot证明CFLAR是否为miR-499a的靶基因。结果 miR-499a在Hep G2.2.15细胞中的表达高于Hep G2细胞,在Ad-HBVHep G2细胞中的表达高于Ad-GFP-Hep G2细胞;过表达miR-499a之后在mRNA和蛋白水平发现CFLAR表达降低,抑制miR-499a表达之后在mRNA和蛋白水平发现CFLAR表达升高;miR-499a通过与CFLAR的3’UTR作用来抑制其表达;HBV在mRNA水平降低CFLAR的表达。结论在肝癌细胞中HBV上调miR-499a的表达,CFLAR是miR-499a的靶基因。
- 张靖南曹漪伊王丹吴婷熊冬梅黄爱龙汤华
- 关键词：HBVHCC
